PBS缓冲液的配方
发布日期:2008-11-11 热门指数:865
PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是我的总结：
母液的配制：
0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水
0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水
各种浓度PB(pH=7.4)的配制：
先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。
然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：
0.1M PB（PH=7.4）：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。
0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。
0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。
若需要 NaCL 的话，加入 NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。
另：其它各种另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方：
pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml）
5.7 93.5
6.5
5.8 92 8
5.9 90 10
6.0 8
7.7 12.3
6.1 85 15
6.2 81.5 18.5
6.3 7
7.5 22.5
6.4 73.5 26.5
6.5 68.5 31.5
6.6 62.5 3
7.5
6.7 56.5 43.5
6.8 51 49
6.9 45 55
7.0 38 62
7.1 33 67
7.2 28 72
7.3 23 77
7.4 19ml 81ml
7.5 16 84
7.6 13 87
7.7 10.5 0.5
7.8 8.5 91.5
7.9 7 93
8.0 5.3 94.7
分子生物学常用溶液配制
发布日期:2008-8-25 热门指数:3471
分子生物学常用溶液配制
一、分子生物学常用贮存液的配制
1．30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。
【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2．40%丙烯酰胺
【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml 的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3．放线菌素D溶液
【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1:10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。
【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液
【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃
5．10mol/L乙酸酰溶液
【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。
6．10%过硫酸铵溶液
【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。
7．BCIP溶液
【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃
8．2×BES缓冲盐溶液
【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。
9．1mol/L CaCl2溶液
【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2?6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm 孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。
10．2.5mol/L CaCl2溶液
【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2?6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液
【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液
【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。
碱基波长（nm）消化系数（ε）[L/（mol?cm）]
A 259 1.54×104
G 253 1.37×104
C 271 9.10×103
T 260 7.40×103
比色杯光径为1cm时,吸光度=εM
13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na?2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。
【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。
14．溴化乙锭（10mg/ml溶液）
【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。
15．2×HEPES缓冲盐溶液
【配制方法】用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g 葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm 滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。
16．IPTG溶液
【配制方法】IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG 后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
17．1mol/L乙酸镁溶液
【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。
18．1mol/L MgCl2溶液
【配制方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl2?6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。【注意】MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。
19．β-巯基乙醇（BME）溶液
【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。
20．NBT溶液
【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。
21．酚/氯仿溶液
【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris?HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris?HCl(pH=7.6)液层,保存于4℃。
【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液
【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时,20μmmol/l PMSF 水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。
23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl 调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。
24．1mol/L乙酸钾（pH=7.5）溶液
【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。
25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）
【配制方法】在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L 而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液
【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH 值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。
27．5mol/L NaCl溶液
【配制方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。
28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液
【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
【注意】SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。
29．20×SSC溶液
【配制方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
30．20×SSPE溶液
【配制方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4?H2O和7.4g EDTA,用NaOH溶液调节pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH）,加水定容至1L,分装后高压灭菌。
31．100%三氯乙酸溶液
【配制方法】在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。
32．1mol/L Tris溶液
【配制方法】在800ml水中溶解121.91g Tris碱,加入浓HCl调节pH值至所需值。
pHHCl 7.4 70ml 7.6 60ml 8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
【注意】如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl 调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。
34．X-gal溶液
【配制方法】X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。
二、常用抗生素溶液
抗生素贮存液a 工作浓度
浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒
氨苄青霉素50mg/ml(溶于水) -20℃20μg/ml 60μg/ml
羧苄青霉素50mg/ml(溶于水) -20℃20μg/ml 60μg/ml
氯霉素34mg/ml(溶于乙醇) -20℃25μg/ml 170μg/ml
卡那霉素10mg/ml(溶于水) -20℃10μg/ml 50μg/ml
链霉素10mg/ml(溶于水) -20℃10μg/ml 50μg/ml
四环素b 5mg/ml(溶于乙醇) -20℃10μg/ml 50μg/ml
a：以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。
b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。三、常用的电泳缓冲液
缓冲液使用液浓贮存液（每升）
Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸50×：242g Tris碱
0.001mol/L EDTA 57.1ml冰乙酸
100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸 10×:10g Tris碱
0.002mol/L EDTA 15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）
40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
Tris-硼酸（TBE）a 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸5×：54g Tris碱
0.001mol/L EDTA 27.5硼酸
20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
碱性缓冲液b 1×:50mmol/L NaOH 1×:5ml 10mol/L NaOH 1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸c 1×:25mmol/L Tris 5×:15.1g Tris 250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）
0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级)
实验室常用技术参数资料（二）
发布日期:2003-11-1 热门指数:6468
二、常用缓冲液
1．分子克隆常用缓冲液
2．磷酸缓冲液
（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※
pH 1mol/L K2HPO4(ml) 1mol/L KH2PO4(ml)
5.8 8.5 91.5
6.0 13.2 86.8
6.2 19.2 80.8
6.4 2
7.8 72.2
6.6 38.1 61.9
6.8 49.7 50.3
7.0 61.5 38.5
7.2 71.7 28.3
7.4 80.2 19.8
7.6 86.6 13.4
7.8 90.8 9.2
8.0 94.0 6.2
（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※
pH 1mol/L Na2HPO4(ml) 1mol/L NaH2PO4(ml)
5.8 7.9 92.1
6.0 12.0 88.0
6.2 1
7.8 82.2
6.4 25.5 74.5
6.6 35.2 64.8
6.8 46.3 53.7
7.0 57.7 42.3
7.2 68.4 31.6
7.4 77.4 22.6
7.6 84.5 15.5
7.8 89.6 10.4
8.0 93.2 6.8
※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值：
pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])
在此，pK’=6.86(25℃)。
3．电泳缓冲液
测序凝胶加样缓冲液
98%去离子甲酰胺
10mol/L EDTA(pH8.0)
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚蓝
甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。
常用的电泳缓冲液
缓冲液使用液浓贮存液（每升）
Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸50×：242g Tris碱
0.001mol/L EDTA 57.1ml冰乙酸
100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸 10×:10g Tris碱
0.002mol/L EDTA 15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）
40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
Tris-硼酸（TBE）a 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸5×：54g Tris碱
0.001mol/L EDTA 27.5硼酸
20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
碱性缓冲液b 1×:50mmol/L NaOH 1×:5ml 10mol/L NaOH
1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸c 1×:25mmol/L Tris 5×:15.1g Tris
250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）
0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级)
说明：
①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2×SDS凝胶加样缓冲液：
100mmol/L Tris?HCl(6.8)
200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2%溴酚蓝
20%甘油
不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。
4．凝胶加样缓冲液
缓冲液类型6×缓冲液贮存温度
Ⅰ0.25%溴酚蓝
4℃
0.25%二甲苯青FF
40%（W/V）蔗糖水溶液
Ⅱ0.25溴酚蓝
室温
0.25%二甲苯青FF
15%聚蔗糖(Ficoll400)
Ⅲ0.25%溴酚蓝
4℃
0.25%二甲苯青FF
30%甘油水溶液
Ⅳ0.25%溴酚蓝
4℃
40%(W/V)蔗糖水溶液
碱性加样缓冲液:
300mmol/L NaOH
6mmol/L EDTA
Ⅴ18%聚蔗糖(Ficoll400)
4℃
0.15%溴甲酚绿
0.25%二甲苯青FF
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb 的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。
5．各种pH值的Tris缓冲液的配制
各种pH值的Tris缓冲液的配制
所需pH值（25℃）0.1mol/L HCl的体积
7．1 45．7
7．2 44．7
7．3 43．4
7．4 42．0
7．5 40．3
7．6 38．5
7．7 36．6
7．8 34．5
7．9 32．0
8．0 29．2
8.1 26.2
8.2 22.9
8.3 19.9
8.4 17.2
8.5 14.7
8.6 12.4
8.7 10.3
8.8 8.5
8.9 7.0
某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与上表所示相应体积（单位：ml）的0.1ml/L HCl混合，加水将体积调至100ml
（2）温度对50mmol/L Tris?HCl液pH值的影响
4℃ 25℃37℃
8．1 7．5 7．2
8．2 7．6 7．3
8．3 7．7 7．4
8．4 7．8 7．5
8．5 7．9 7．6
8．6 8．0 7．7
8．7 8．1 7．8
8．8 8．2 7．9
8．9 8．3 8．0
9．0 8．4 8．1
9．1 8．5 8．2
9．2 8．6 8．3
9．3 8．7 8．4
9．4 8．8 8．5
（6）常用缓冲液的pKa值
缓冲液分子量pKa值缓冲范围
Trisa 12.1 8.08 7.1～7.9
HEPESb 283.3 7.47 7.2～8.2
MPOSc 209.3 7.15 6.6～7.8
PIPESd 304.3 6.76 6.2～7.3
MESe 195.2 6.09 5.4～6.8
a：三羟甲基氨基甲烷；b：N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N-吗啉代）丙磺酸；d：N，N’-双（2-乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-吗啉代）乙磺酸。
7．温度对常用缓冲液pH的影响
缓冲体系pKa(20℃) △pKa/10℃
Mes 6.15 -0.110
Ada 6.60 -0.110
PiPes 6.80 -0.085
Aces 6.90 -0.200
Bes 7.15 -0.160
Mops 7.20 -0.013
Tes 7.50 -0.200
Hepes 7.55 -0.014
Tricine 8.15 -0.210
Tris 8.30 -0.310
Bicine 8.35 -0.180
Glycylglycine 8.40 -0.280
三、常用酶的配制
1．溶菌酶
用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。
2．蛋白水解酶类
贮存液贮存温度反应浓度反应缓冲液温度预处理
0.01mol/L Tris(pH7.8)
链霉蛋白酶a 20mg/ml -20℃（溶于水） 1mg/ml 0.01mol/L EDTA 37℃自消化b
0.5% SDS
0.01mol/L Tris(pH7.8)
蛋白酶Kc 20mg/ml -20℃（溶于水） 50μg/ml 0.005mol/L EDTA 37～56℃无须预处理
0.5% SDS
a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。
b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./l Tris?HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml浓度，于37℃温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保存-20℃。
c：蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶K消化过程中通常加入EDTA（以抑制依赖于Mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT（pH8.0）至终浓度为2mmol/L,以鳌合Ca2+。
3．无DNA酶的RNA酶
将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/l Tris?HCl(pH7.5)、15mmol/l NaCl中，配成10mg/ml 的浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20℃。
四、常用抗生素溶液
抗生素贮存液a 工作浓度
浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒
氨苄青霉素50mg/ml(溶于水) -20℃20μg/ml 60μg/ml
羧苄青霉素50mg/ml(溶于水) -20℃20μg/ml 60μg/ml
氯霉素34mg/ml(溶于乙醇) -20℃25μg/ml 170μg/ml
卡那霉素10mg/ml(溶于水) -20℃10μg/ml 50μg/ml
链霉素10mg/ml(溶于水) -20℃10μg/ml 50μg/ml
四环素b 5mg/ml(溶于乙醇) -20℃10μg/ml 50μg/ml
a：以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22μm滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。
b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。
五、常用贮存液的配制
1．30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】
将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。
【注意】
丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2．40%丙烯酰胺
【配制方法】
把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】
见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3．放线菌素D溶液
【配制方法】
把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml 的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。
【注意】
放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液
【配制方法】
在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成
小份保存于-70℃
5．10mol/L乙酸酰溶液
【配制方法】
把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。
6．10%过硫酸铵溶液
【配制方法】
把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。
7．BCIP溶液
【配制方法】
把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃
8．2×BES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl 和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。
9．1mol/L CaCl2溶液
【配制方法】
在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2?6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】
制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。
10．2.5mol/L CaCl2溶液
【配制方法】
在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2?6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液
【配制方法】
用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】
DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液
【配制方法】
把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。
碱基波长（nm）消化系数（ε）[L/（mol?cm）]
A 259 1.54×104
G 253 1.37×104
C 271 9.10×103
T 260 7.40×103
比色杯光径为1cm时,吸光度=εM
13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
【配制方法】
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na?2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。
【注意】
EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。
14．溴化乙锭（10mg/ml溶液）
【配制方法】
在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
【注意】
小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。
15．2×HEPES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。
16．IPTG溶液
【配制方法】
IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
17．1mol/L乙酸镁溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。
18．1mol/L MgCl2溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解203.4g MgCl2?6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。
【注意】
MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。
19．β-巯基乙醇（BME）溶液
【配制方法】
一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】
BME或含有BME的溶液不能高压处理。
20．NBT溶液
【配制方法】
把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。
21．酚/氯仿溶液
【配制方法】
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris?HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris?HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。
【注意】
酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液
【配制方法】
用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
【注意】
PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF 水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。
23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。
24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液
【配制方法】
将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。
25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）
【配制方法】
在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液
【配制方法】
在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。
27．5mol/L NaCl溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。
28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液
【配制方法】
在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
【注意】
SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。
29．20×SSC溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
30．20×SSPE溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4?H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。
31．100%三氯乙酸溶液
【配制方法】
在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。
32．1mol/L Tris溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节pH值至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
【注意】
如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。
Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L 的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。
34．X-gal溶液
【配制方法】
X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。
杂交试验中用于降低背景的封闭剂
试剂用途
Denhardt试剂Northern杂交
使用RNA探针的杂交
单拷贝序列的Southern杂交
将DNA固定于尼龙膜上的杂交
Denhardt试剂通常配制50×贮存液，过滤后保存于-20℃。可将该贮存液10倍稀释于预杂交液（常为含有0.5%SDS和100μg/ml经变性被打断的鲑精DNA的6×SSC或6×SSPE）中。50×Denhardt 液中含5g聚蔗糖（Ficoll,400型，Pharmacia）、5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白（组分V”Sigmal），加水至终体积为500ml。
BLOTTO Grunstein-Hogness杂交
Benton-Davis杂交
除单拷贝序列Southern杂交以外的所有Southern杂交
斑点印迹
1×BLOTT（牛乳转移技术优化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer）,是含5%胶脂奶
粉和0.02%叠氮钠的水溶液，应保存于4℃。使用前可用预杂交液稀释25倍。BLOTTO不应与高浓度的SDS并用，因为后者会导致牛奶中蛋白质析出。如果杂交背景不合要求，可在杂交液中加入NP-40至终浓度为1%。BLOTTO不能用作Northern杂交的封闭剂，因为这一封闭剂中可能含有RNA酶，其活性之高使人无法接受。
注意：叠氮钠有毒性，取用时需戴手套小心操作。含叠氮钠的溶液应予明确标记。
肝素Southern杂交
原位杂交
肝素（Sigma H-7005，从猪中提取的二级产品或相当等级的产品）用4×SSPE或4×SSC溶解配制成50mg/ml的浓度，保存于4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的杂交液中用作封闭剂的浓度为500μg/ml，在不含葡聚糖硫酸酯的杂交液中的浓度为50μg/ml。
经变性并被打断的鲑精DNA southern和Northern杂交
把鲑鱼精子DNA（Sigma,Ⅲ,盐钠）溶解于水配制成10mg/ml的浓度，必要时于室温磁力搅拌2～4h 助溶。把溶液中NaCl的浓度调至0.1mol/L，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合DNA溶液快速通17号皮下注射针头12次，以剪切DNA。加入2倍体积用冰预冷的乙醇沉淀DNA。离心回收DNA并重溶于水，配制成10mg/ml的浓度，测定溶液的OD260值并计算出精确的DNA浓度，然后煮沸10min，分装成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加热5min，然后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有100μg/ml经变性并被打断的鲑鱼精子DNA
分子生物学实验基本数据
发布日期:2006-7-25 热门指数:2359
Units
? 1 mg = 10-3 g
1 ug = 10-6 g
1 ng = 10-9 g
1 pg = 10-1
2 g
? 1 kb of double stranded DNA = 660 kD
1 kb of single stranded DNA = 330 kD
1 kb of single stranded RNA = 340 kD
? Average MW of a deoxynucleotide base = 324.5 Daltons
Average MW of a deoxynucleotide base pair = 649 Daltons
? 1 ug/ml of DNA = 3.08 uM phosphate
1 ug/ml of 1 kb of DNA = 3.08 nM 5' ends
1 mol of pBR32
2 = 2.8
3 x10+6 g.
1 pmol of linear pBR322, 5' ends = 1.4 ug
1 A260 unit of duplex DNA = 50 ug
1 A260 unit of single-stranded DNA = 37 ug
1 A260 unit of single-stranded RNA = 50 ug
? 1 kb of DNA = 333 amino acids of coding capacity
= 37,000 daltons
? Densities (50% GC):
RF I (supercoiled) ds DNA 1.709 g/ml
RF II (nicked) ds DNA 1.54 g/ml
ss DNA 1.726 g/ml
ss RNA 1.90 g/ml
protein 1.33 g/ml
Formulas
? DNA melting point:
? For duplex DNA >50 bp:
Tm = 81.5deg. C +16.6 log (M of NaCl) + 0.41(% GC)
- [500/bp of shortest chain in duplex]
- [0.65(% formamide)]
For duplex DNA <50 bp:
Add 2deg. C for each A or T
Add 4deg. C for each G or C
? Picomoles of ends:
? pmol ends per ug linear DNA = 3030/number of bases
DNA mobility in gels
? Migration of marker dyes in native polyacrylamide non-denaturing gels
Gel % Bromophenol blue (BP) Xylene cyanole (XC)
3.5 100 460
5.0 65 260
8.0 45 160
12.0 20 70
20.0 12 45
? Migration of marker dyes in polyacrylamide denaturing gels
Gel % Bromophenol blue (BP) Xylene cyanole (XC)
5.0 35 130
6.0 26 106
8.0 19 75
10.0 12 55
20.0 8 28
? Relative positions of different DNA forms on Tris-acetate agarose gels
The exact distance between bands is influenced by percentage of agarose, time of electrophoresis, concentration of Ethidium bromide, degree of supercoiling and the size and complexity of the DNA.
Amino acid symbols
Alanine Ala A
Arginine Arg R
Asparagine Asn N
Aspartic acid Asp D
Asparagine or Aspartic acid Asx B
Cysteine Cys C
Glutamine Gln Q
Glutamic acid Glu E
Glutamine or Glutamic acid Glx Z
Glycine Gly G
Histidine His H
Isoleucine Ile I
Leucine Leu L
Lysine Lys K
Methionine Met M
Phenylalanine Phe F
Proline Pro P
Serine Ser S
Threonine Thr T
Tryptophan Trp W
Tyrosine Tyr Y
Valine Val V
Commonly used restriction enzymes and assay buffers
Enzyme Isoschizomers Buffer Temp Recognition Site Cloning sites Aat II med 37 GACGT/C Aat II
Acc I med 37 GT/(AC)(GT)AC Acc I, Cla I
Aha III Dra I med 37 TTT/AAA blunt
Alu I med 37 AG/CT blunt
Asu II 37 TT/CGAA Acc I, Cla I
Ava I med 37 C/YCGRG Sal I, Xho I, Xma I
Ava II med 37 G/G(AT)CC
Bal I low 37 TGG/CCA blunt
BamH1 med 37 G/GATCC BamH1, Bgl II
Bgl I med 37 GCCN4/NGGC
Bgl II low 37 A/GATCT BamH1, Bgl II
BstE II high 60 G/GTNACC
BstN I low 55 CC/(AT)GG
Cla I low 37 AT/CGAT Acc I, Cla I
Dra I Aha III low 37 TTT/AAA blunt
EcoR1 high 37 G/AATTC EcoR1
EcoR1* low 37 /AATT EcoR1
EcoRV med 37 GAT/ATC blunt
Hae I low 37 (AT)GG/CC(TA) blunt
Hae II low 37 RGCGC/Y
Hae III med 37 GG/CC blunt
Hha I Cfo I, HinP1 med 37 GCG/C Hha I
Hinc II med 37 GTY/RAC blunt
Hind III med 37-55 A/AGCTT Hind III
Hinf I med 37 G/ANTC
HinP1 Cfo I, Hha I low 37 G/CGC Acc I, Cla I
Hpa I low 37 GTT/AAC blunt
Hpa II Msp I low 37 C/CGG Acc I, Cla I
Kpn I low 37 GGTAC/C Kpn I
Mbo I Sau3A med 37 /GATC BamH1, Bgl II
Msp I med 37 C/CGG Acc I, Cla I
Mst I Fsp I high 37 TGC/GCA blunt
Mst II Bsu36 I high 37 CC/TNAGG
Nae I med 37 GCC/CCG blunt
Nco I high 37 C/CATGG Nco I
Nde I med 37 CA/TATG Nde I
Not I high 37 GC/GGCCGC
Nru I med 37 TCG/CGA blunt
Pst I med 21-37 CTGCA/G Pst I
Pvu I high 37 CGAT/CG Pvu I
Pvu II med 37 CAG/CTG blunt
Rsa I med 37 GT/AC blunt
Sac I Sst I low 37 GAGCT/C Sac I, Sst I
Sal I high 37 G/TCGAC Ava I, Sal I, Xho I
Sau3A I Mbo I med 37 /G*ATC BamH1, Bgl II
Sfi I 50 GGCCN4/NGGCC
Sma I Xma I (1) 37 CCC/GGG blunt
Sph I high 37 GCATG/C Sph I
Sst I Sac I med 37 GAGCT/C Sst I, Sac I
Sst II Sac II med 37 CCGC/GG Sst II
Taq I low 37-55 T/CGA AccI, Cla I
Tha I FnuD II, Acc II low 37-60 CG/CG blunt
Xba I high 37 T/CTAGA Xba I
Xho I Ccr I high 37 C/TCGAG Ava I, Cla I
Xma I Sma I low 37 C/CCGGG Ava I, Xma I
Assay buffers (see enzyme vendors catalogs for additional information) 10x Low salt buffer 10x Core buffer
100mM Tris-HCl, pH 7.6 500mM NaCl
100mM MgCl2 500mM Tris-HCl, pH 7.6
10mM DTT 100mM MgCl2
10x Medium salt buffer 10x Hind buffer
500mM NaCl 600mM NaCl
100mM Tris-HCl, pH 7.6 100mM Tris-HCl, pH 7.6
100mM MgCl2 70mM MgCl2
10mM DTT
10x High salt buffer 10x Sma I buffer (1)
1.0M NaCl 200mM KCl
500mM Tris-HCl, pH 7.6 100mM Tris-HCl, pH 7.6
100mM MgCl2 100mM MgCl2
10mM DTT 10mM DTT
Heat inactivation of restriction enzymes
? The following enzymes CAN be heat inactivated by incubation at 65 deg. C for 10 min.: Alu I, Apa I, Ava II, Bal I, Bgl I, Cvn I, Dpn I, Dra I, Eco R II, Eco RV, Hae II, Hha I, Hinc II, Kpn I, Mbo I, Msp I, Nar I, Nde II, Rsa I, Sau 3a, Sca I, Sfi I, Spe I, Sph I, Ssp I, Sst I, Stu I, and Sty I.
? The following enzymes are ONLY PARTIALLY heat inactivated by incubation at 65 deg.C for 10 min.: Ava I, Cfo I, Cla I, Cvn I, Eco RI, Mbo II, Mlu I, Nci I, Nru I, Pst I, Pvu II, Sma I and Xma III
? The following enzymes CANNOT be heat inactivated by incubation at 65 deg. C for 10 min.: Acc I, Bam HI, Bcl I, Bgl II, BstE II, Dde I, Hae III, Hind III, Hinf I, Hpa I, Hpa II Nde I, Nhe I, Nsi I, Pvu I, Sal I, Sau 96 I, Sst II, Taq I, Tha I, Xba I, Xho I, and Xor II.
Oligonucleotide universal primers used for DNA sequencing
M13 (-21) universal forward 5'-TGT-AAA-ACG-ACG-GCC-AGT-3'
M13 (-40) universal forward 5'-GTT-TTC-CCA-GTC-ACG-AC-3'
M13/pUC reverse primer 5'-CAG-GAA-ACA-GCT-ATG-ACC-3'
T7 primer 5'-TAA-TAC-GAC-TCA-CTA-TAG-GG-3'
SP6 primer 5'-ATT-TAG-GTG-ACA-CTA-TAG-3'
-16bs 5'-TCG-AGG-TCG-ACG-GTA-TCG-3'
+19bs 5'-GCC-GCT-CTA-GAA-CTA-GTG-3'
Listing of M13 (pUC) cloning sites
As they are read on DNA sequencing gels using the Universal primer:
M13mp7
.......EcoR1....BamH1.SalI..PstI..SalI..BamH1....EcoR1 GGCCAGTGAATTCCCCGGATCCGTCGACCTGCAGGTCGACGGATCCGGGGAATTC
M13mp8
..........HindIII.PstI.SalI...BamH1.SmaI.EcoR GGCCAGTGCCAAGCTTGGCTGCAGGTCGACGGATCCCCGGGAATTCGTAATCATG
M13mp9
.......EcoR1.SmaI.BamH1..SalI..PstI..HindIII GGCCAGTGAATTCCCGGGGATCCGTCGACCTGCAGCCAAGCTTGGCGTAATCATG
M13mp10
...HindIII..PstI..SalI..XbaI..BamH1..SmaI..SstI..EcoR1
各种浓度各种P H的P B S T r i s H C l缓冲液配 制 文件排版存档编号：[UYTR-OUPT28-KBNTL98-UYNN208]
一、PBS 缓冲液 1.1 母液的配制： 0.2M Na 2HPO 4：称取 71.6g Na 2HPO 4-12H 2O ，溶于 1000ml 水 0.2M NaH 2PO 4：称取 31.2g NaH 2PO 4-2H 2O ，溶于1000ml 水 1.2不同PH 值PBS 配制 各种PH 值的 0.2M PBS （100ml)配方 ： pH 0.2M NaH2PO4（ml ） 0.2M Na2HPO4（ml ） 5.7 93.5 6.5 5.8 92 8 5.9 90 10 6.0 8 7.7 12.3 6.1 85 15 6.2 81.5 18.5 6.3 7 7.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 3 7.5
6.7 56.5 43.5 6.8 51 49 6.9 45 55 7.0 38 62 7.1 33 67 7.2 28 72 7.3 23 77 7.4 19ml 81ml 7.5 16 84 7.6 13 87 7.7 10.5 0.5 7.8 8.5 91.5 7.9 7 93 8.0 5.3 94.7 以配制100ml 0.2M PBS 为例，先配制母液，按照配方表分别取19ml 0.2mol/L 的 NaH 2PO 4和81ml 0.2mol/L 的 Na 2HPO 4,混合即可。 1.3 不同浓度PBS 的配制
只需将0.2M PBS按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PBS（PH=7.4）：取 500ml 0.2M PBS，加水稀释至 1000ml 即可。 0.01M PBS（PH=7.4）：取50ml 0.2M PBS，加水稀释至 1000ml 即可。 0.02M PBS（PH=7.4）：取100ml 0.2 M PBS，加水稀释至 1000ml 即可。 若需要 NaCl的话，加入 NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。 二、Tris-HCl缓冲液 某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris 碱溶液与配方表中所示相应体积（单位：ml）的0.1mol/L HCl混合，加水将体积调至100ml 即可。(至于配制0.1M HCl 就是8.58ml浓盐酸用蒸馏水定容到1000ml啦)
53种常见缓冲液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)取5 mol/L醋酸溶液15.0 ml，加乙醇60 ml和水20 ml，用10 mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)取三羟甲基氨基甲烷12.14 g，加水800 ml，搅拌溶解，并稀释至1000 ml，用6 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)取氯化钙0.294 g，加0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40 ml使溶解，用1 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)取三羟甲基氨基甲烷6.06 g，加盐酸赖氨酸3.65 g、氯化钠5.8 g、乙二胺四醋酸二钠0.37 g，再加水溶解使成1000 ml，调节pH值至9.0，即得。 乌洛托品缓冲液取乌洛托品75 g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2 ml，再用水稀释至250 ml，即得。 巴比妥缓冲液(pH7.4)取巴比妥钠4.42 g，加水使溶解并稀释至400 ml，用2 mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52 g与巴比妥钠30.9 g，加水使溶解成2000 ml，即得。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠5.05 g，加氯化钠3.7 g及水适量使溶解，另取明胶0.5 g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2 mol/L盐酸溶液调节pH 值至7.8，再用水稀释至500 ml，即得。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)取2 mol/L甲酸溶液25 ml，加酚酞指示液1滴，用2 mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2 mol/L甲酸溶液75 ml，用水稀释至200 ml，调节pH值至3.25～3.30，即得。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)取邻苯二甲酸氢钾10 g，加水900 ml，搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000 ml，混匀，即得。 枸橼酸盐缓冲液取枸橼酸4.2 g，加1 mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40 ml使溶解，再用20％乙醇稀释至100 ml，即得。 枸橼酸盐缓冲液(pH6.2)取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至6.2，即得。
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 24 Na2HPO4-2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。C4H2O7·H2O分子量= 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 ② 687·H2 柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12 ，0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。 7．磷酸盐缓冲液
2 4·2H 2Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为71.64克/升。 Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为31.21克/升。 24·2H 2KH 2PO 4分子量 = 136.09，1/15M 溶液为9.078克/升。 8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M ）
10．Tris –盐酸缓冲液（0.05M ，25℃） C HOCH2 NH2 分子量=121.14; 0. 1M 溶液为12.114克/升。Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 247·H 2硼酸H 2BO 3,分子量=61.84,0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
247·10H 2硼酸H 2BO 3，分子量=61.84, 0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂 易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。 12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（ 0.05M ） 13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M 硼酸根） 2 47·10H 2 14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） 2+2+22·10H 2
实验方案镧铈对铜胁迫下豌豆种子萌发和生长的影响 https://www.doczj.com/doc/fe1713196.html,(Ⅲ)、Ce(Ⅲ)对重金属胁迫下种子萌发影响的显效剂量筛选 (1)浓度梯度设计： LaCl3/ CeCl 3溶液配置：先配置1g?L-1的LaCl3/ CeCl 3溶液母液，然后将母液分别稀释成浓度为5、10、20、40，60 mg?L-1梯度浓度，调节PH（HCL/NAOH）至6.5，对照(CK)为PH调节至6.5的去离子水。 重金属Cuso4浓度的设置：10、25、50、100、200、400 mg?L-1，对照用蒸馏水。 (2)试材培养 种子预处理：选取均匀饱满的豌豆种子用0.1%HgCl2溶液消毒15min，分别用自来水和去离子水洗净，常温下晾干备用。 （3）实验设置：CK，La，Ce，Cu（共4组18个浓度57个样品） （4）试材处理： 选取LaCl3、CeCl3和CuSO4各个梯度溶液溶液，豌豆种子经预处理后用各个梯度溶液浸没处理，对照用蒸馏水，置于25±1℃浸种24h后，将处理后种子均匀排列在直径9cm、垫有2层滤纸的培养皿中，每处理加入一定量水培养（以没过种子2/3为标准），每处理3皿重复，每皿20粒。 指标测定方法： 种子发芽第三天测α—淀粉酶，第四天测发芽势，前三天测发芽指数和发芽率，第五天测量根长、茎长，第六天测根系活力、叶绿素含量、可溶性蛋白质、可溶性糖、SOD、POD、CA T、MDA. 2．La(Ⅲ)和Ce(Ⅲ)对重金属胁迫下种子萌发及保护酶的影响 (1)试材培养 种子预处理：选取均匀饱满的豌豆种子用0.1%HgCl2溶液消毒15min，分别用自来水和去离子水洗净，常温下晾干备用。 （2）实验设置：在上一步骤中分别筛选出LaCl3、CeCl3的低剂量、适宜剂量、高剂量三个有效浓度和CuSO4的一个有效浓度，分别记为A1，A2，A3；B1，B2，B3；C。 （3）实验步骤：有以下几组： A+C:A1+C、A2+C、A3+C B+C:B1+C、B2+C、B3+C A+B+C：A1+B1+C 、A1+B2+C 、A1+B3+C、A2+B1+C、A2+B2+C、A2+B3+C、A3+B1+C 、A3+B2+C、A3+B3+C 酸盐缓冲液（PBS）配制方法 磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2M） pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.2M NaH2PO4/ml 7.0 61.0 39.0 7.7 89.5 10.5 7.8 91.5 8.5 Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05 0.2M溶液含35.61g/L Na2HPO4·12 H2O分子量＝358.22 0.2M溶液含71.64g/L NaH2PO4·H2O分子量＝138.01 0.2M溶液含27.6g/L NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03 0.2M溶液含31.21g/L
各种缓冲液的配制方法
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升 pH X Y pH X Y 2.0 2.4 2.6 2.8 50 50 50 50 44.0 32.4 24.2 16.8 3.0 3.2 3.4 3.6 50 50 50 50 11.4 8.2 6.4 5.0 甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到20毫升 pH(20℃)X Y pH(20℃)X Y 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 5 5 5 5 5 4.070 3.960 3.295 2.642 2.022 3.2 3.4 3.6 3.8 5 5 5 5 1.470 0.990 0.597 0.263 邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升）0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 19.15 19.45 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55 Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。 Na2HPO4-2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。C4H2O7·H2O分子量 = 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
PBS缓冲液的配制 PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是总结：母液的制： 0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol... PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是总结： 母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4，81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4, 即可。 然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。 若需要NaCl的话，加入NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。 另：其它各种另PH值的0.2M PB（100ml)配方： pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml） 5.7 93.5 6.5 5.8 92 8 5.9 90 10 6.0 8 7.7 12.3 6.1 85 15 6.2 81.5 18.5 6.3 7 7.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 3 7.5 6.7 56.5 43.5
常见缓冲溶液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液：取5mol/L醋酸溶液，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至，用水稀释至1000ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取氯化钙0.294g，加L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L 盐酸溶液调节pH值至，加水稀释至100ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至。 乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液，再用水稀释至250ml。 巴比妥缓冲液：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至，滤过。 巴比妥缓冲液：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。 巴比妥－氯化钠缓冲液：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用L盐酸溶液调节pH值至，再用水稀释至500ml。 甲酸钠缓冲液：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至～。 邻苯二甲酸盐缓冲液：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至，加水稀释至1000ml，混匀。 枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。 枸橼酸盐缓冲液：取％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至。 枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液：甲液：取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液与乙液混合，摇匀。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氯溶液35ml，再加水稀释至100ml。 硼砂－氯化钙缓冲液：取硼砂0.572g与氯化钙2.94g，加水约800ml溶解后,用1mol/L盐酸溶液约调节pH值至，加水稀释至1000ml。 硼砂－碳酸钠缓冲液～：取无水碳酸钠5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml与硼砂溶液27ml，混匀。 硼酸－氯化钾缓冲液：取硼酸3.09g,加L氯化钾溶液500ml使溶解，再加L氢氧化钠溶液210ml。 醋酸盐缓冲液：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至(电位法指示)，用水稀释至100ml，即得。 醋酸－锂盐缓冲液：取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH值至，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.1g，加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取无水醋酸钠20g，加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml，加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠18g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.4g，加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至，再加水稀释至100ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml。 醋酸－醋酸钾缓冲液：取醋酸钾14g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸铵缓冲液：取醋酸铵7.7g，加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml与适量的水使成100ml。
PBS缓冲液配方 不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是常用配方，供大家参考。 用于细胞培养的PBS需含有氯化钾 称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L，灭菌即可。0.01M PBS缓冲液 称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml 双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。 一般免疫组化用PBS，主要用来清洗，都只包含Na2HPO4?12H2O（磷酸氢二钠）和NaH2PO4?2H2O（磷酸二氢钠）两种组分，母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。 然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PB（PH=7.4）：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 若需要 NaCL 的话，加入 NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。
一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA?2H2O和20g的NaOH，
磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法 科研实验 2010-04-20 22:25:48 阅读935 评论0 字号：大中小订阅 0.01M PBS PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2) PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L 称7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4，溶于800 ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4℃冰箱中即可。 需要注意的是，通常所说的浓度0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。 母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4, 即可。 然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。 若需要NaCl的话，加入NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。 另：其它各种另PH值的0.2M PB（100ml)配方： pH 0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml） 5.7 93.5 6.5 5.8 92 8 5.9 90 10 6.0 8 7.7 12.3 6.1 85 15 6.2 81.5 18.5
不同缓冲液的缓冲范围 pH缓冲液 六十一秒的常用缓冲溶液的配制&缓冲溶液原理（2007年6月16日更新）（一）甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 甘氨酸分子量＝75.07。 0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01 g/L。 （二）邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量＝204.23。0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85 g/L。（三）磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量＝141.98；0.2 mol/L溶液为28.40 g/L。 Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。
C6H8O7·H2O分子量＝210.14；0.1 mol/L溶液为21.01 g/L。 ①使用时可以每升中加入1克酚，若最后pH值有变化，再用少量50％氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 柠檬酸钠：Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 ；0.1 mol/L溶液为29.41 g/L。 （六）醋酸-醋酸钠缓冲液（0.2 mol/L） NaAc·3H2O分子量＝136.09；0.2 mol/L溶液为27.22 g/L。冰乙酸11.8 mL稀释至1 L（需标定）。 （七）磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05 mol/L） X 毫升0.2 mol/L KH2PO4+Y毫升0.2 mol/L NaOH 加水稀释至20毫升。
（八）磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2 mol/L） Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。 NaH2PO4·H2O分子量＝138.01；0.2 mol/L溶液为27.6 g/L。 NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03；0.2 mol/L溶液为31.21 g/L。 （九）巴比妥纳-盐酸缓冲液 巴比妥钠分子量＝206.18；0.04 mol/L溶液为8.25 g/L。 （十）Tris-HCl缓冲液（0.05 mol/L） 50毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100
磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法 PBS PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH PBS缓冲液（～）：NaCl 137mmol/L，KCl L，Na2HPO4 L， KH2PO4 L 称7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4，溶于800 ml 蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至，最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4℃冰箱中即可。 需要注意的是，通常所说的浓度0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。 母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=的配制： 先配 0.2M PB (pH=，100ml)：取19ml L的 NaH2PO4， 81ml L 的 Na2HPO4, 即可。 然后只需将0.2M PB (pH=按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PB（PH=）：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.01M PB （PH=）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.02M PB （PH=）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 若需要 NaCl的话，加入 NaCl 至%（g/100ml）即可。 另：其它各种另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方：
磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2mol/L 溶液为28.40克/升。 Na2HPO4·2H2O 分子量 = 178.05，0.2mol/L 溶液含35.01克/升。 C4H2O7·H2O 分子量 = 210.14，0.1mol/L 溶液为21.01克/升 20%盐酸溶液如何配置： 取浓盐酸（质量百分比浓度为36.5%）一个体积（如100毫升），加入到96.5毫升水中就可以了。36.5%*100*1.17=20%*mm=213.5(克)所需水的质量为;213.5-117=96.5克，也就是96.5毫升水。 PH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 1 9.15 19.45 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 Ampicillin（氨卡青霉素）100mg/ml □组份浓度100mg/ml Ampicillin □配制量50mL □配置方法 1.称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 Kan（卡那霉素）50mg/ml □组分浓度50mg/ml卡那霉素 □配制量50mL □配制方法 1.称取2.5g卡那霉素置于50ml塑料离心管中。 2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷) 24 mg/ml □组份浓度24mg/L IPTG □配制量50mL □配置方法 1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。
2.加入40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 X- Gal 20mg/m □组份浓度20mg/L X-Gal □配制量50mL □配置方法 1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。 2.加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解， 定容至50mL。 3.小份分装（1mL/份）后，-20℃避光保存。 LB培养基 □组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量1L □配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone（胰化蛋白胨）10g Yeast Extract（酵母提取物）5g NaCl（氯化钠）10g 2.加入约800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.2-7.3。
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl （pH8.8）□配制量1L □配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL 500 mM EDTA（pH8.0）20mL 2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠 （pH5.2）□配制量100mL □配置方法1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 5、PBS Buffer□组份浓度137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 □配制量1L □配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸铵□组份浓度10 M醋酸铵 □配制量100mL □配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚□配置方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： ①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。 ②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 ③加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ④重复操作步骤③。 ⑤加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。 ⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 ⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。 8、苯酚/氯仿/异戊醇□配置方法 1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
P B S缓冲液的配方 发布日期:2008-11-11 热门指数:865 PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是我的总结： 母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4，81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4, 即可。 然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。 若需要NaCL 的话，加入NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。 另：其它各种另PH值的0.2M PB（100ml)配方： pH 0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml） 5.7 93.5 6.5 5.8 92 8 5.9 90 10 6.0 8 7.7 12.3 6.1 85 15 6.2 81.5 18.5 6.3 7 7.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 3 7.5 6.7 56.5 43.5 6.8 51 49 6.9 45 55 7.0 38 62 7.1 33 67 7.2 28 72 7.3 23 77 7.4 19ml 81ml 7.5 16 84 7.6 13 87 7.7 10.5 0.5 7.8 8.5 91.5 7.9 7 93 8.0 5.3 94.7 分子生物学常用溶液配制 发布日期:2008-8-25 热门指数:3471
P B S缓冲液的配制方法(总4 页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1 -CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除
PBS缓冲液配方 不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是常用配方，供大家参考。 用于细胞培养的PBS需含有氯化钾 称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L，灭菌即可。 0.01M PBS缓冲液 称取NaCl?8g，KCl?0.2g，Na2HPO412H2O3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。 一般免疫组化用PBS，主要用来清洗，都只包含Na2HPO412H2O（磷酸氢二钠）和NaH2PO42H2O（磷酸二氢钠）两种组分，母液的配制： 0.2MNa2HPO4：称取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水 0.2MNaH2PO4：称取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml?水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配?0.2MPB(pH=7.4，100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4，81ml0.2mol/L的 Na2HPO4,即可。 然后只需将0.2MPB(pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如： 0.1MPB（PH=7.4）：取500ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。 0.01MPB（PH=7.4）：取50ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。 0.02MPB（PH=7.4）：取100ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。
常用缓冲溶液的配制 （一）甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） X毫升0.2 mol/L甘氨酸＋Y毫升0.2 mol/L HCl，再加水稀释至200毫升。 甘氨酸分子量＝75.07。 0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01 g/L。 （二）邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾＋Y毫升0.2 mol/L HCl，再加水稀释至20毫升。
邻苯二甲酸氢钾分子量＝204.23。0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85 g/L。 （三）磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量＝141.98；0.2 mol/L溶液为28.40 g/L。 Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。
C6H8O7·H2O分子量＝210.14；0.1 mol/L溶液为21.01 g/L。 （四）柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液 ① 使用时可以每升中加入1克酚，若最后pH值有变化，再用少量50％氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 （五）柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L）
柠檬酸：C6H8O7·H2O分子量＝210.14 ；0.1 mol/L溶液为21.01 g/L。 柠檬酸钠：Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 ；0.1 mol/L溶液为29.41 g/L。 （六）醋酸-醋酸钠缓冲液（0.2 mol/L） NaAc·3H2O分子量＝136.09；0.2 mol/L溶液为27.22 g/L。冰乙酸11.8 mL 稀释至1 L（需标定）。 （七）磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05 mol/L） X 毫升 0.2 mol/L KH2PO4+Y毫升0.2 mol/L NaOH 加水稀释至20毫升。