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干细胞

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文章编号(ArticleID):1009-2137(2003)02-0115-05

・论著・

人骨髓间充质干细胞表达多种造血细胞因子朱光荣,周小玉,陆　化,周建伟,李爱萍,徐　卫,李建勇,汪承亚南京医科大学第一附属医院血液科,南京210029

摘要 为了研究培养的人骨髓间充质干细胞在造血中的生物作用,采用RT2PCR方法在mRNA水平上分析体外培养的人骨髓间充质干细胞(BM2MSC)造血因子的表达,以及氢化考的松对BM2MSC表达造血细胞因子的影响。结果显示,体外传代培养的正常人、白血病和淋巴瘤等血液病人BM2MSC均能表达SCF,Flt32ligandTPO,

LIF,IL26和IL211等重要的造血细胞因子,但不表达G2CSF,GM2CSF和IL23。不同代数的BM2MSC细胞,造血细胞因子的表达相同。BM2MSC经氢化考的松作用7-21天后,可诱导G2CSFmRNA表达,但不诱导GM2CSF的表达,细胞在形态学上也未发生明显改变。结论:体外培养的正常人和本组血液病病人BM2MSC具有促造血功能。关键词 骨髓间充质干细胞;造血细胞因子;基因表达中图分类号 R331122文献标识码 A

HumanBoneMarrowMesenchymalStemCellsExpressMultipleHemato2poieticGrowthFactorsZHUGuang2Rong,ZHOUXiao2Yu,LUHua,ZHOUJian2Wei,LIAi2Ping,XUWei,LIJian2Yong,WANGCheng2YaDepartmentofHematology,theFirstAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity,Nanjing210029,ChinaAbstract Tostudythebiologicalroleofhumancultruedbonemarrowmesenchymalstemcell(BM2MSC)inhematopoiesisbyinvestigationofitsexpressionofmultiplehematopoieticgrowthfactors,RT2PCRwasusedtoanalyzetheexpressionofSCF,Flt32ligand,TPO,LIF,G2CSF,GM2CSF,IL23,IL26andIL211atmRNAlevelforhumanBM2MSCfromhealthydonorsandpatientswithleukemiaandlymphoma.BM2MSCwereincubatedwithorwithouthydrocortison(HC).TheresultsclearlyshowedthattheculturedBM2MSCexpressedmRNAofSCF,Flt32ligand,TPO,LIF,IL26andIL211atpassages3upto15,butdidnotexpressG2CSF,GM2CSFandIL23.Thesameexpressionpatternofabovecytokineswasseenalsoforthepatient′sBM2MSC.HCwasabletoinduceBM2MSCtoexpressG2CSFbutnottoexpressGM2CSF.BM2MSCseemednottochangemorphologicallyafterincubationwithHCforupto21days.Inconclusion,bothnormalandpatientBM2MSCshouldbepotentialtopromotehematopoiesisaccordingtotheirexpressionofmultiplehematopoieticcytokines,andHCisabletoinducehematopoieticgrowthfactorexpression.Keywords bonemarrowmesenchymalstemcell;hematopoieticcytokine;geneexpressionJExpHematol2003;11(2):115-119

骨髓造血微环境为造血干细胞/祖细胞(HSC/HPC)提供生长发育的场所。造血微环境细胞成分主要由骨髓多能间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcell,BM2MSC)分化产生的成纤维细胞、脂肪细胞、成骨细胞等基质细胞构成[1],他们通过与HSC/HPC接触和分泌多种细胞因子,正负调控他们的增殖、分化,维持骨髓正常造血。近年来,由于BM2MSC在体外成功地分离培养,并能诱导分化为骨、软骨、脂肪细胞、神经细胞等多种其他组织细胞,引起了人们对BM2MSC的广泛而深入的实验和临床应用研究。Chaudhary等[2]报道BM2MSC在体外培养诱导分化时表达多种细胞因子。Koal等[3]指出骨髓造血干细胞移植时,同时输入体外培养的病人自身BM2MSC能够促进HSC的植活率,缩短无髓期,减少死亡率。本文报告BM2MSC体外培养不同代数的细胞及经氢化考的松诱导作用后的重要造血细胞因子的表达,以探讨BM2MSC的促造血功能的分子基础。

材料与方法标本的的来源传代培养的BM2MSC,2例来原于正常骨髓,7例为

基金项目:本研究为江苏省卫生厅重点课题基金项目资助(编号H200131)和南京医科大学创新基金资助项目(编号CX2001004)通讯作者:汪承亚,研究员、教授、博士生导师　电话:(025)371883626933.E2mail:wangcylu@yahoo.com2002-10-11收稿;2003-02-25接受

・511・中国实验血液学杂志　JournalofExperimentalHematology2003;11(2):115-119

© 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.淋巴瘤和白血病等血液病病人骨髓。BM2MSC培养取生长密度达90%左右的培养细胞,应用胰酶/ED2TA(Gibco,LifeTech.Inc.USA)消化,收集细胞并悬浮于含10%FBS(StemCellTech.Inc.,Cana2da)的DMEM(GibcoLifeTech.Inc.USA)完全培

养基,按1∶3比例接种于新的培养皿(Falcon,

USA),置5%CO2、37℃饱和湿度细胞培养箱培养。

每3-4天更换1次培养液。约1周细胞生长密度可达到90%左右时,进行再次传代。

BM2MSC受氢化考的松(hydrocortison,HC)作用的诱导培养取传代培养第2天的细胞,更换含有1×10

-6

mol/L

HC(Gibco,LifeTech.Inc.USA)的培养液,置5%CO2、37℃饱和湿度细胞培养箱,分别于7,14和21

天中止培养,制备细胞裂介液。

RT2PCR分析BM2MSC造血因子mRNA水平的表达细胞总RNA的制备　尽弃待收集细胞的细胞培养液,细胞用1×DPBS(Hyclone,USA)洗涤2遍,按1

ml/cm2加入TripureRNA抽提液(Roche,USA),

将细胞充分裂解。细胞裂解液置-80℃保存备用。

RNA抽提按照使用说明进行。逆转录反应　用逆转录试剂盒(Promega公司,

USA),按说明书操作。逆转录反应体系的总容积20μl,含有RNA1.0μg,随机引物0.25μg/μl,AMV逆转录酶15U。逆转录产物于95℃灭活5分钟后,保存于-20℃备用。聚合酶链反应　PCR反应总容积50

μl。含2μ

l逆

转录产物,2UFastStartTaqDNA聚合酶(Roche,

USA)。PCR其他操作步骤按Roche公司说明书进行。各细胞因子PCR扩增引物序列见表1,PCR反应条件见表2。PCR扩增产物置1.5%琼脂糖凝胶(Promega,USA)90V电泳30分钟,EB染色,紫

外线下观察并照相。

结 果人BM2MSC体外培养和HC的诱导分化BM2MSC为单层贴壁生长的梭形细胞,大小均一,有明显的方向性。本组2例正常BM2MSC和7例病人BM2MSC均能在体外正常生长和传代。图1

所示为第8代正常BM2MSC细胞的形态。经HC

诱导作用7-21天后,BM2MSC生长速度减慢,但形态并没有明显的变化(照片略)。

Table1　OligonucleotideprimersusedinPCRfordetectionofgenetranscriptsGenePrimerProductSizeβ22MGSense5′2TCTGGCCTTGAGGCTATCCAGCGT23′270bp

Antisense5′2GTGGTTCACACGGCAGGCATACTC23′SCFSense5′2CTCCTATTTAATCCTCTCGTC23′177bpAntisense5′2TACTACCATCTCCGCTTATCCA23′Flt32LigandSense5′2TGGAGCCCAACAACCTATCTC23′333bpAntisense5′2GGGCTGAAAGGCACATTTGGT23′TPOSense5′2CCTCCTTGGGGCCCTGCAGAGCCT23′606bpAntisense5′2GGGTGGAGCTGGACCACAGGG23′LIFSense5′2AACAACCTCATGAACCAGATCAGGAGC23′405bpAntisense5′2ATCCTTACCCGAGGTGCAGGGCCGTAGG23′GM2CSFSense5′2GTCTCCTGAACCTGAGTAGAGACA23′286bpAntisense5′2AAGGGGATGACAAGCAGAAAGTCC23′G2CSFSense5′2AGCTTCCTGCTCAAGTGCTTAGAG23′346bpAntisense5′2TTCTTCCATCTGCTGCCAGATGGT23′IL26Sense5′2GTAGCCGCCCCACACAGACAGCC23′174bpAntisense5′2GCCATCTTTGGAAGGTTCAGG23′IL211Sense5′2ATGAACTGTGTTTGCCGCCTG23′270bpAntisense5′2GAGCTGTAGAGCTCCCAGTGC23′IL23Sense5′2ATGAGCCGCCTGCCCGTCCTG23′449bpAntisense5′2GCGAGGTCAAAGTCGTCTGTTG23′

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干细胞采集流程

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关于干细胞你所要了解的几个知识点

关于干细胞你所要了解的几个知识点

关于干细胞你所要了解的几个知识点
关于干细胞，以下是你需要了解的几个知识点：
1. 干细胞的概念：干细胞是一类具有自我复制和多向分化潜能的细胞，可以分化成多种细胞类型，包括各种分化细胞或特化细胞。

它们在人体或动物个体发育过程中发挥着重要的作用，是各种分化细胞或特化细胞的初始来源。

2. 干细胞的分类：根据其分化潜能和来源时期的不同，干细胞可以分为全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。

全能干细胞可以分化成所有的细胞类型，包括生殖细胞；多能干细胞可以分化成多种细胞类型，但不一定包括生殖细胞；单能干细胞只能分化成一种或有限的几种细胞类型。

3. 干细胞的生物学特性：干细胞具有自我复制和多向分化潜能的特性，可以在特定条件下进行自我更新和分化。

此外，干细胞还具有迁移和归巢的能力，可以向损伤或病变部位迁移并参与组织修复。

4. 干细胞的应用：干细胞在许多生物医学领域都有广泛的应用，包括再生医学、组织工程、药物筛选和疾病模型研究等。

例如，通过诱导干细胞分化成特定类型的细胞，可以用于治疗某些疾病，如糖尿病和帕金森病等。

总之，了解干细胞的基本概念、分类、生物学特性和应用，有助于你更好地理解干细胞在生物医学领域中的重要性
和潜在应用价值。

干细胞发展史

干细胞发展史

干细胞发展史（实用版）目录1.干细胞概述2.干细胞的发展历程3.干细胞技术的应用4.我国干细胞研究的发展5.干细胞面临的挑战与未来展望正文1.干细胞概述干细胞是一种具有自我复制和分化潜能的细胞，可以分化成多种类型的细胞。

根据分化潜能的不同，干细胞可分为全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。

干细胞研究在生物学、医学等领域具有重要意义，为疾病的治疗和组织修复提供了新的可能。

2.干细胞的发展历程（1）早期阶段（19 世纪 -20 世纪中叶）：干细胞概念的形成。

在这个阶段，科学家们开始研究细胞的分化和生长，为干细胞的发现奠定了基础。

（2）中期阶段（20 世纪中叶 -20 世纪末）：干细胞的实验室研究。

科学家们成功在体外分离和培养出了干细胞，并证实了干细胞的分化潜能。

（3）现代阶段（21 世纪至今）：干细胞技术的快速发展。

这个阶段，干细胞研究取得了突破性进展，干细胞技术在临床试验和应用方面取得了重要成果。

3.干细胞技术的应用干细胞技术在很多领域具有广泛的应用前景，如下列举了一些典型的应用领域：（1）疾病治疗：利用干细胞的分化潜能，替换损伤或病变的组织和器官，如糖尿病、帕金森病、心脏病等。

（2）组织工程：利用干细胞在体外培养生成组织和器官，用于疾病治疗和替换。

（3）基因治疗：通过干细胞将正常基因引入患者体内，修复或替换病变的基因。

4.我国干细胞研究的发展我国干细胞研究起步较晚，但在政府的大力支持和科研人员的努力下，取得了一系列重要成果。

目前，我国在干细胞分离、培养、分化和应用等方面都取得了显著进展，并在国际上占据了一席之地。

5.干细胞面临的挑战与未来展望干细胞研究虽然取得了很多成果，但仍面临着一些挑战，如：干细胞来源、干细胞培养技术、干细胞移植的免疫排斥反应等。

为了应对这些挑战，科学家们正在努力开展相关研究，以期解决这些问题。

干细胞应用的伦理原则和规范解读

干细胞应用的伦理原则和规范解读

干细胞应用的伦理原则和规范解读干细胞技术是一项前沿的医学研究领域，具有广泛的应用潜力。

然而，干细胞的获取和利用涉及一系列伦理和道德问题，需要制定明确的原则和规范来指导实践。

本文将对干细胞应用的伦理原则进行解读，以保障其在医学研究和治疗中的合理使用。

首先，伦理原则中最重要的一点是尊重个体的权益和尊严。

干细胞的获取涉及胚胎、胚胎干细胞、成体干细胞等多个来源，因此，必须确保从这些来源中获得干细胞的过程符合道德和法律的规范，保护胚胎和个体的权益。

在胚胎干细胞相关研究中，必须遵循严格的伦理审查程序，确保胚胎的获取和利用仅在符合道德和法律要求的情况下进行。

其次，干细胞应用的伦理原则还涉及公正分配资源和研究成果的问题。

干细胞技术的发展需要大量的研究经费和资源，因此，必须确保这些资源能够公平地分配给各个研究机构和科研人员。

在使用干细胞技术开展治疗时，也必须遵循公平的原则，不得因为经济因素或其他不合理的因素而剥夺患者的治疗机会。

此外，研究成果的发布和利用也必须遵循公正、透明的原则，确保研究结果能够广泛受益于整个科学界和医学社会。

伦理原则中还包括保护参与者的隐私和数据安全的要求。

干细胞研究和应用涉及大量的个人数据，如基因信息、医疗记录等，必须确保这些数据的收集、保存和利用符合相关的法律法规，同时保护个体的隐私和数据安全。

研究机构和科研人员在进行干细胞研究时，应制定科学、合理的数据管理和安全措施，防止数据泄露和滥用的风险。

此外，伦理原则还强调研究透明度和公众参与。

干细胞的研究和应用涉及到公众的关注和利益，因此，研究机构和科研人员应积极与公众沟通，公开研究目的、方法、进展和风险等信息，确保公众了解和参与到干细胞研究和应用的过程中。

此外，研究机构和科研人员还应接受独立的伦理审查和监督，确保研究过程的透明度和合法性。

总结起来，干细胞应用的伦理原则和规范包括尊重个体权益和尊严、公正分配资源和研究成果、保护参与者隐私和数据安全、研究透明度和公众参与等。