TG1感受态细胞使用说明书

高效感受态细胞制备试剂盒产品编号：SK9305/SK9306包装规格：40支/200支试剂盒组成组分 SK9305，40支 SK9306，200支BT Buffer F 10 ml 5 × 10 mlBT Buffer E 4 ml 5 × 4 ml2个 10个BT Media(1 Capsules for 50 mL)操作手册1份1份保存方法及注意事项BT Media以胶囊的形式提供，请于室温密封干燥保存。

BT Buffer F和BT Buffer E可于常温运输，收到后请于4°C保存，长期保存请置-20°C。

产品介绍生工BT高效感受态制备试剂盒采用了一种简单而可靠的方法制备感受态细胞，由该试剂盒制备的感受态细胞在进行转化时无需经过热激步骤，对于Ampicillin抗性质粒而言，甚至连活化步骤都可以省略，感受态细胞和DNA混合后即可直接涂布，极大地简化了转化过程，提高了实验效率。

用该试剂盒制备的大肠杆菌DH5α细胞使用pUC19质粒DNA转化，转化率可以达到107~109 cfu/µg DNA，对其他常用的工程菌株和质粒也同样适用。

产品特色1. 感受态制备流程快速简单。

2. 转化过程无需热激。

3. 转化效率高达107~109 cfu/µg DNA。

4. 使用感受态专用培养基，最大化感受态效率。

5. 适合大量制备。

高效感受态细胞制备流程自备材料：目标菌种、LB培养基及平板、离心机、50 ml离心管、冰等。

BT Media培养基准备：将一只胶囊投入50 mL蒸馏水中，高压灭菌即可。

准备工作：将BT Buffer F和BT Buffer E放冰上预冷，预冷低温离心机至4°C。

1. 用超低温冰箱中保存的菌种在LB平板上进行划线培养，置37°C培养箱中静置培养12~16 h待菌落生长至直径1~2 mm大小。

2. 挑取一个生长正常的菌落，接种至10~15 mL液体LB培养基中，于37°C摇床充分振荡（≥ 250 rpm）培养12~16 h。

GBcompetin感受态细胞制备及转化使用说明书Web:Tel**************Fax**************Email:**********************产品描述GBcompetin感受态细胞制备试剂盒是一种快速、高效制备化学态感受态细胞的试剂盒，用此试剂盒制备感受态细胞仅需简单的几个步骤，比常规的氯化钙方法更为快速和高效。

由GBcompetin 溶液制备的感受态细胞可用于即时转化也可长期冷冻保存。

使用pUC19 质粒进行检测，转化效率可达到108 cfu/μg DNA。

GBcompetin感受态细胞制备试剂盒提供了快速而方便的制备方法，适用于几乎所有常用的大肠杆菌菌株。

试剂盒组成GB Transformation Kit产品保存条件100 ml SOB 培养基室温50 ml GB-Wash Buffer 4℃20 ml GBcompetin Buffer 4℃使用说明书GB Transformation Buffer Set产品保存条件100 ml Wash Buffer 4℃40 ml Competent Buffer 4℃使用说明书订购信息保存制备感受态细胞所用试剂可在4 0C保存半年。

使用说明A.感受态细胞的制备1.用接种针挑取大肠杆菌（-80 °C甘油保存菌），在LB平板培养基上划线，置于37 °C恒温培养箱中过夜培养至长出单独菌落。

2.挑取10-12个饱满的单菌落至 5 ml SOC培养基中，置于37 °C摇床中过夜培养。

3.在上述过夜培养的菌液中加入甘油使其浓度达到15%，将上述细胞分装于 1.5 ml离心管中，每管1 ml，分装后保存于-80 °C作为种子菌。

4.在100 ml SOB培养液锥形瓶中加入1 ml种子菌，置于37 °C摇床培养至OD600达到0.2-0.4。

✧此步骤大约需要3小时的培养。

✧确保OD值不要超过此范围，否则将不能保证转化效率。

感受态细胞转化（一）实验准备：1.Amp母液：称取氨苄青霉素100mg溶于1ml dd H2O中。

0.22μm滤器过滤除菌，用EP管分装后储存于-20℃冰箱.2.X-Gal溶液（2%，m/v）称取20mg X-Gal溶于1ml二甲基甲酰胺（DMF）中。

用玻璃试管或聚丙烯管分装后储存于-20℃冰箱,装有X-Gal溶液的试管须用铝箔包裹以防因光照而被破坏.（无须过滤）3.IPTG（20%,m/v,0.8mol/L）称取IPTG2g溶于8ml dd H2O中。

用蒸馏水定容至10mL。

0.22μm 滤器过滤除菌，用EP管分装成1mL一小份后储存于-20℃冰箱. （二）操作步骤“质粒pBS SK(-)的转化1.取感受态细胞置于冰浴中，待感受态细胞融化后，分别在100μl 感受态细胞悬液中加入下列DNA质粒或水，轻轻摇匀后冰上放置30分钟。

感受态细胞+pBS SK(-)质粒2μl (含量不超过50ng,体积不超过10μl)感受态细胞+无菌水2μl （阴性对照）2. 热击：42℃水浴中热击90秒（注：精确计算时间，过长将对细胞造成伤害）,热击后立即置于冰上冷2-5分钟（禁止摇动）。

3. 复苏：向每管中加入400μl LB液体培养基(注：不含Amp),混匀后37℃轻摇培养1~1.5小时,使细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因(Ampr )。

涂布平板筛选转化质粒方法一（《分子克隆实验指南》标准方法）1.将溶化的顶层琼脂分装于17*100mm试管，将试管置于45℃的加热块槽内备用。

（90mm培养板用3mL顶层琼脂；150mm培养板用7mL顶层琼脂）2．从加热块取出一支试管，快速加入活菌含量不多于3000（90培养基）或10000（150培养基）的细菌悬液0.1mL。

盖紧试管盖颠倒数次。

以使细菌在琼脂中混匀。

3.按下表加入：4. 快速将溶化的顶层琼脂倾入含有适当抗生素的凝固琼脂板的中部，旋转培养板使琼脂散匀。

华越洋⽣生物提供 QQ: 1733351176A GL1农杆菌感受态细胞使⽤用说明书编号 名称 产品规格北京华越洋生物GX9131-­‐100s AGL1农杆菌感受态细胞 10*100UL北京华越洋生物GX9131-­‐100 AGL1农杆菌感受态细胞 20*100UL基本信息：AGL1农杆菌感受态细胞基因型:C58 R ecA (rif R/carb R) T i p TiBo542DT-­‐DNA (strep R) S uccinamopine产品说明：AGL1菌株为C58, RecA型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒 pTiBo542DT-­‐DNA，此质粒含有vir 基因（vir基因是T-­‐DNA插入植物基因组必需的元件， pTiBo542DT-­‐DNA 质粒自身的T-­‐DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-­‐DNA 顺利转移）。

pTiBo542DT-­‐DNA型Ti质粒含有筛选标签：strep，赋予AGL1菌株链霉素抗性，适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率可达5×103cfu/μg。

操作⽅方法:1. 取-­‐80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。

每100μl感受态加1ug（体积不大于10ul）质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

2. 加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。

3. 6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-­‐3天。