开题报告(1)

课题题目：红枣核中黄酮类化合物的抗氧化性研究 一、论文选题依据：（包括国内外研究现状、选题的理论意义或实用价值及重要参考文献目录等） 1、课题研究目的、意义 红枣富含各种生物活性物质，其加工和食用后的下脚料枣核，绝大多数以废物的形式丢弃或作为燃料烧掉，其未能得到合理的利用，造成资源的极大浪费，本文利用南疆红枣加工及食用后的下脚料---枣核为实验材料，首次对红枣核黄酮化合物提取进行研究，以其为红枣的总和加工利用提供参考依据，为从天然植物材料中寻求生物活性成分提供一条新的途径。 黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类多苯环化合物 ,根据其荃本结构可 以分为 多个类别 ,如黄酮 、黄酮醇、氢黄酮 醇 ,异黄酮 、双黄酮 、查尔酮、黄烷酮等。其中黄酮和黄酮醉是植物界分布最广的黄酮类化合物。广泛存在于食用蔬菜、水果以 及中草药中。已经证明它是许多中草药的有效成分 、大觉研究证明 ,黄酮类化合物具有抗癌、抗病毒、抗菌、抗黄、抗过敏 ,抗血管脆性和血小板聚集及抗糖尿病并发症等多种生理活性与药理作用 ,而这些生理活性是以黄酮类化合物的抗氧活性为基础的[5] 。黄酮类化合物因其无毒无害,对人类的肿姗 、衰老、心血管病等退行性疾病的治疗和预防有重要意.如果机体内氧 自由基反应和脂质过氧化反应的协调发生紊乱 ,就会引起一系列的新陈代谢失常和免疫功能降低 ,诱发疾病 。国外有文献报道黄酮类化合物用于治疗肿瘤及抗氧化侵蚀等作用。由于新药开发存在环保和耗资巨大,且合成药副作用较严重,从天然资源中寻找新药已越来越受到重视,特别是传统药物,从天然药物和传统药物中寻找有效成分,是当前新药研究打开的一个很重要的方向,如何经济、有效地将这些有效成分,尤其是那些微量成分,从天然产物中提取分离和富集是天然药物研究过程中的主要问题。国内的研究报道，主要集中在枣树的栽培管理以及果实的加工，对类黄酮的研究取材均为枣果，而对以红枣核为材料进行红枣核黄酮的研究尚未见报道。红枣富含多种生物活性物质，其加工及食用后的下脚料-枣核，绝大多数以废物的形式丢弃或作为燃料被燃烧掉，其未能得到合理的利用，造成资源的极大浪费。

2、 国内外研究现状及分析 自由基与人体一些重大疾病有一定的相关性，Harman提出的自由基学说[6]认为：自由基攻击生命大分子造成的损伤是引起机体衰老的根本原因，也是诱发肿瘤等疾病的重大原因，这一学说已被越来越多的人所接受。近年来，对自由基及其清除剂的研究成为热点，寻找、筛选具有阻断自由基形成或抑制细胞膜过氧化活性的药物研究越来越受到人们的关注，其中对黄酮类化合物的研究是自由基清除剂研究中的热门领域之一，到目前为止已发现的黄酮类化合物已超过5000多种。黄酮类化合物具有很强的抗氧化活性 ,如清除超氧阴离子，羟基自由基和DPPH自由基等 ,同时能显著提高超氧化物歧化酶和谷胧甘肤过氧化物酶 一等抗氧化酶的活性 ,对HO 有明显抑制效应[7] 黄酮的提取和抗氧化性的研究在国内外很多，厉阗;在蜂花粉抗氧化性研究中5种蜂花粉提取物有较强的清除超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基和抑制脂质过氧化的能力。其中,荞麦蜂花粉提取物清除超氧阴离子自由基能力最强;茶叶蜂花粉提取物清除羟基自由基能力最强;油菜蜂花粉提取物清除DPPH自由基和抑制脂质过氧化的能力最强。唐津忠 鲁晓翔 陈瑞芳在金莲花中黄酮类化合物的提取及其抗氧化性研究中得出最佳提取条件为：以60％的乙醇作提取剂、按1：15的固液比、温度为60℃、提取时间为2h。金莲花中黄酮类化合物对猪油有明显的抗氧化作用，且黄酮类化合物的添加量在试验剂量范围内与其抗氧化性呈正相关；当添加量为0．5％时，金莲花中黄酮类化合物的抗氧化性能可与BHT相媲美；同时还研究了提取物与VC的协同抗氧化作用，结果表明金莲花中黄酮类化合物与VC有较好的增效协同效应。张晓璐 徐凯宏 山楂叶总黄酮清除DPPH和超氧阴离子自由基的活性研究中对DPPH自由基的清除率随加入量的增加而增加，当加入量为2mg时，清除率为50．29％；而对超氧阴离子自由基的清除在加入量为1．2mg时达到最高值27．36％。 从红枣核中提取研究在国内外研究的很少，杨自藻等采用融冻微级破壁法提取枣核中黄酮类化合物，游离黄酮类化合物最佳提取工艺为：以料液比为1：20（g/ml），体积分数40%的乙醇为浸提剂，再低火，微波提取2min，具酚羟基和游离花色素类化合物的最佳提取工艺为以料液比为1：20（g/ml），在中火，微波提取3min，霍文兰, 刘步明, 曹艳萍在研究超声辅助提取陕北红枣总黄酮的工艺条件及其抗氧化性时，最佳工艺条件为乙醇浓度为50%, 提取时间40min, 提取温度50℃, 料液比1∶30(w/w)。红枣总黄酮对油脂具有明显的抗氧化作用,经测定, POV值可达150。其清除羟自由基作用也很显著, 50%清除率的样品浓度仅为50μg/mL。 张志国、陈锦屏、邵秀芝、王成忠在红枣核类黄酮清除DPPH自由基活性研究将红枣核以60%乙醇提取后,经AB-8大孔吸附树脂吸附分离,首次研究了红枣核类黄酮对DPPH自由基的清除活性.结果表明,红枣核类黄酮对DPPH自由基有很强的清除活性,IC50为6.5μg/ml,对DPPH自由基的清除率有量效关系. 目前，黄酮类化合物的提取主要有：有机溶剂提取法碱性磷醇或碱性水提取，超滤法，超声波提取法，微波提取法。黄酮类化合物具有多种生理活性，引起人们的广泛关注，随着科技的进步，从更多天然产物中提取分离黄酮类化合物的方法将更加快速，高效，完善。 参考文献：

[1]韩志萍，陕北红枣中总黄酮的提取及含量比较，食品科学2006，27(2):560-562. [2]樊海燕，赛音，广枣中黄酮类化合物提取工艺研究，内蒙古大学学校，2005，36(1):81-83. [3]梁丹，张保东，黄酮类化合物提取和分离方法研究进展，周口师范学院学校，2007，24(05):87-89. [4]祝虚发，王番，正交试验优选山楂粒中总黄酮的提取工艺，四川中医，2007,25(05):36-37. [5]刘成梅，李莉，檞寄生中黄酮类化合物不同提取工艺的研究，食品科学，2007，28(05):170-172. [6]Cao CH.Emin sofic Antioxidant and prooxidant behavior of flavonoids structure-activity relationships. Free Radical Bidog&Medicine.1997.22(5):729

[7]ROSSJA,KASUMCM.Dietaryflavonoids:bioavailability,metaboliceffects,andsafety[J].AnnualReviewofNutrition,2002,22(1);19-34. [8]周君富 银杏叶黄酮 的抗脂质过氧化作用 中药药理与临床 1994.10(2);42 二、 对课题所涉及的任务要求及实现预期目标的可行性分析 1、 任务要求 完成枣核中黄酮类化合物的提取及其抗氧化性的研究，主要针对其对植物油和动物油的抗氧化性质的测定和其与人工合成抗氧化剂的抗氧化性质的对比研究，以及其对超氧自由基和DPPH自由基的清楚效果的研究。 1、 可行性分析 原料圆翠枣，新疆南疆有丰富的红枣资源，使本课题有了原料保障。 实验所需仪器：水浴锅，粉碎机，紫外可见分光光度计，电子天平，烘箱，旋转蒸发仪，索氏提取器，冷凝回流装置及冰箱等，食品科学实验室都有，使本课题有了仪器，场所的保障。 技术尽管国内外很少涉及对红枣核中黄酮类化合物的提取及研究，但根据黄酮类化合物的理化性质，以及参考诸多其他植物中黄酮类化合物的提取及研究，使本课题的完成有了充分的保证。 三、 本课题拟解决的关键问题及解决方法 本课题主要研究枣核中黄酮对油脂的抗氧化性和对自由基的清除效果。国内外很少涉及对红枣核中黄酮类化合物的提取及研究，只有根据黄酮类化合物的理化性质，以及参考诸多其他植物中黄酮类化合物的提取及研究，探索适合本课题的提取和其性质的研究方法。 通过查阅大量类似植物中黄酮类化合物提取及研究的资料，结合多方面的因素比较后，确定本课题研究所用的油为棉籽油和猪油，黄酮类化合物的浓度为0.2%、0.5%以及人工合成抗氧化剂0.02% BHT、0.02% PG、0.05%VC做对比试验。做清楚自由基的同时也用VC做对比。 四、完成本课题所必需的条件 试验所需要的仪器主要有：电热恒温不锈钢水浴锅，756型紫外可见分光光度计，电子天平，旋转蒸发仪，索氏提取器，冰箱，所示提取器，冷凝回流装置，粉碎机。 试剂主要有：60%乙醇，氢氧化钠（AR）;氯仿（AR）;冰乙酸（AR）;碘化钾（AR）;硫代硫酸钠（AR）;淀粉（AR）;二丁基羟基甲苯（AR）;没食子酸丙酯（AR）;Vc 水杨酸（AR）;磷酸二氢钠（AR）;磷酸氢二钠（AR）;三氯乙酸（AR）;钨酸钠（AR）;亚硝酸钠（AR）;邻苯三酚（AR）;HCl（AR）;FeSO4（AR）; EDTA（AR）;乙醚（AR）; NaCl（AR）; 双氧水（AR）;Tris（AR）;HCl（AR）。

五. 完成本课题的工作方案及进度计划 1. 工作方案 查阅相关书籍和资料，确定浸提方法将黄酮提取出来，然后将提取出的黄酮和其他抗氧化剂加入到植物油和动物油中，把它们对油脂抗氧化的结果进行对比，再用黄酮和Vc、黄酮和BHT做协同作用与前面的做对比。最后再用黄酮和Vc清除超氧自由基、羟基自由基和DPPH自由基，把它们的清除效果做对比。

2. 工作进度安排 1～4周：查阅资料，确定实验方案，进行试验的需求分析、准备试剂，完成开题报告。 5～7周：准备各种实验材料，主要试剂及主要仪器，将黄酮提取出来，进行浓缩烘干。 8～13周：黄酮和其它抗氧化剂对植物油和动物油的抗氧化效果的比较和黄酮和Vc、黄酮和BHT对植物油的协同作用。 14～18周：黄酮、Vc对超氧自由基、羟基自由基和DPPH自由基的清除效果对比研究。 19～22周：补充实验，对实验数据进行整理分析，撰写毕业论文。