紫外分光光度法测定维生素B1片的含量
李刚
（四川大学华西药学院 四川成都）
摘 要 本试验采用紫外分光光度法对维生素B1片的含量进行测定，对此法进行方法验证，证明了此法具有专属性高，回收率高、精密度高，线性好、测定范围宽的特点，并对数据处理方法进行了比较，发现采用对照品比较法进行数据处理受仪器波动影响较小，测定结果可信度较高。
关键词 维生素B1 紫外分光光度法 含量测定 方法验证 对照品比较法
维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1 实验装置及试剂
1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料 维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法
2.1 测定波长的选择：分别称取维生素B1标准品，维生素B1片粉，维生素B1空白辅料各10mg，平行配制：加盐酸溶液适量溶解后，用盐酸溶液定容至50ml，摇匀后精密量取1ml，盐酸溶液定容至25ml，摇匀后在紫外/可见光区进行全波长扫描，测得不同波长下的吸光度值。
2.2 线性与范围：取五个100ml的容量瓶，精密量取维生素B1对照品（200ug/ml）4.00、5.00、6.00、7.00、8.00ml，用盐酸溶液定容至刻度，摇匀，每瓶中对照液浓度分别为8.00、10.00、12.00、14.00、16.00ug/ml，在246nm波长处进行吸光度测定，以吸光度与维生素B1对照液浓度进行最小乘法回归分析，得到回归方程，此为标准曲线。
实验九 差示分光光度法测定维生素B1片的含量
一、实验目的
1．掌握差示分光光度法的基本原理。
2．熟悉标准曲线定量的操作方法.
二、实验原理
(一）差示分光光度法(简称△A法)，它保留了通常的分光光度法简便、快捷、直接读数的优点，又无需事先分离，并能消除干扰.
方法：取两份相等的供试液，分别制成两种不同的化学环境（如在其一中加酸或碱,改变pH或在其一中加能与供试品发生某种化学反应的试剂），然后将它们稀释至同样浓度后，分置于样品池和参比池中,于适当波长处，测定吸光度的差值（△A）。
应用条件：①供试品在不同的化学环境中以不同的分子形式存在,它们的吸收光谱有显著的差异；②干扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，光谱行为不变。
定量依据:设x、y分别代表在两种不同的化学环境中供试品的存在形式，它们在测定波长处的吸光度以Ax 、Ay表示，背景和干扰的吸收度以AZ表示，AZ不受测定时化学环境改变的影响。根据吸光度加和性原则:
即在供试液的一定浓度范围内△A值与其浓度C呈线性关系,并消除了AZ的干扰，可用标准曲线法或对照法定量.
（二)维生素B1片的测定
维生素B1分子中具有共轭双键结构，在紫外区有吸收，其紫外吸收随溶液pH的变化而变化。在pH7的磷酸盐缓冲液中具有两个吸收峰，在232~233nm处，%11cmE=345;在266nm处，%11cmE=255。在pH2时，最大吸收在246nm处，%11cmE=425。可用于维生素B1片的差示分光光度法的测定.
三、实验方法
（一）测定波长的选择
精密称取维生素B1100mg，用水溶解并稀释成100ml，精密量取2ml二份，分别用缓冲液（pH 7.0）和盐酸液(pH 2。0)稀释成100ml，以相应溶剂为空白，测定紫外吸收光谱。再将前者放于参比池，后者放于样品池,绘制差示吸收光谱(见图11)。差示光谱图表明在247nm处有最大差示吸收值(△A)，确定247nm为测定波长。
国畜禽种业
中2021.1基金项目院农业行业渊国家冤标准项目野制修订维生素B1注射液及片剂标准冶渊项目编号院2018H033冤遥作者简介院陆春波渊1972.2-冤袁女袁浙江省杭州市人袁高级兽医师袁研究方向院兽药质量标准技术研究遥HPLC法测定维生素B1注射液中维生素B1含量
陆春波林仙军阮鑫陈晓林(浙江省兽药饲料监察所311099)
摘要院采用HPLC法测定维生素B1注射液的含量袁采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱渊5滋m袁4.6mm伊250mm冤袁以甲醇-乙腈-0.02mol/L庚烷磺酸钠溶液渊含1%三乙胺袁用磷酸调节pH=5.5冤渊7:7:86袁v/v冤为流动相袁流速为1.0ml/min袁柱温为30益袁检测波长为246nm遥结果表明院维生素B1在1耀200滋g/ml范围内线性良好袁R2=1.0000袁平均回收率为99.76%渊n=9冤袁RSD为0.4%遥本方法简便尧准确尧可靠袁可用于维生素B1注射液的质量控制遥关键词院维生素B1注射液曰含量测定曰HPLC
mice[J].JournalofEthnopharmacology,2015,173:81-90.[30]周光炎.免疫学原理[M].2013.[31]ZhuH,LuX,LingL,etal.Houttuyniacordatapolysaccharidesamelio鄄ratepneumoniaseverityandintestinalinjuryinmicewithinfluenzavirusinfection[J].JournalofEthnopharmacology,2018,218(23):90-99.[32]洪佳璇,江丽,唐法娣.鲜鱼腥草油对哮喘豚鼠气道收缩和炎症反应的影响[J].中国中医药科技,2011,18(4):313-314.[33]DuS,LiH,CuiY,etal.Houttuyniacordatainhibitslipopolysaccha鄄ride-inducedrapidpulmonaryfibrosisbyup-regulatingIFN-酌andin鄄hibitingtheTGF-茁1/Smadpathway.[J].InternationalImmunopharma鄄cology,2012,13(3):331-340.[34]郭亚丽,洪佳璇,唐法娣.鲜鱼腥草挥发油对慢性肺损伤模型大鼠肺组织中白介素-8尧丙二醛含量的影响[J].江西中医学院学报,2011,23(5):55-57.[35]LingLJ,LuY,ZhangYY,etal.FlavonoidsfromHouttuyniacordataattenuateH1N1-inducedacutelunginjuryinmiceviainhibitionofin鄄fluenzavirusandToll-likereceptorsignalling[J].Phytomedicine,2019,67:153150.[36]王俊辉.复方鱼腥草制剂在断奶仔猪生产中的应用及其安全性评价研究[D].湖南农业大学,2007.[37]YanL,MengQW,KimIH.TheeffectsofdietaryHouttuyniacordataandTaraxacumofficinaleextractpowderongrowthperformance,nutri鄄entdigestibility,bloodcharacteristicsandmeatqualityinfinishingpigs[J].LivestockScience,2011,141(2-3):188-193.[38]吴华生,温刘发.鱼腥草提取物对肉鸡生产性能的影响[J].广东饲料,2019,28(12):34-36.[39]周业飞.鱼腥草对肉鸡生长性能及免疫力的影响[J].山西农业科学,2011,39(12):1310-1312.[40]赵枝新.日粮中添加鱼腥草对肉仔鸡生产性能尧营养物质代谢及免疫力的影响[D].中国农业科学院,2008.[41]王盛楠.槲皮素对AA肉鸡蛋白质消化利用的作用及机制[D].东北农业大学,2018.维生素B1属于水溶性B族维生素袁在动物体内与焦磷酸结合成二磷酸硫胺袁参与体内糖代谢中丙酮酸尧琢-酮戊二酸的氧化脱羧反应袁为糖类代谢所必须遥维生素B1对维持神经组织尧心脏及消化系统的正常机能起重要作用遥临床上维生素B1注射液用于防治维生素B1缺乏症袁如多发性神经炎尧运动失调尧抽搐等袁也用于胃肠弛缓袁还可用于高热尧重度损伤以及牛酮血症尧心肌炎的辅助治疗[1]遥维生素B1注射液属于人兽共用品种袁在收集兽用维生素B1注射液样品时发现袁养殖场和宠物医院采用人用维生素B1注射液的现象普遍袁究其原因袁一是人用药品比兽用药品价格低廉曰二是兽用维生素B1注射液的生产企业相对较少袁进货及时性很难保证遥建议农业农村行政主管部门加强对养殖场和宠物医院用药的监督检查袁禁止将人用药品用于动物袁以规范兽药使用遥维生素B1注射液含量测定方法主要有紫外-可见分光光度法[2]尧液相色谱法[3,4]尧漫反射红外光谱法[5]等遥该产品收载于叶中国兽药典曳2015年版一部袁采用高效液相色谱法检测有关物质袁但采用紫外-可见分光光度法对维生素B1含量进行测定遥本文建立了HPLC法测定维生素B1注射液中维生素B1含量的方法袁对方法进行验证袁并比较了紫外-可见分光光度法和本法的结果差异遥1材料与方法1.1仪器与试药Waters2695高效液相色谱仪袁配Waters2487检测器袁美国Waters公司曰XS-205电子天平渊感量0.01mg冤袁瑞士MET鄄TLERTOLEDO公司曰FE20型pH计袁瑞士METTLERTOLE鄄DO公司曰TU-1810紫外分光光度计袁北京普析通用仪器有限责任公司曰维生素B1对照品袁购自中国食品药品检定研究院袁批号100390-201806袁含量97.9%曰甲醇尧乙腈为色谱纯袁试验研究
【精品】8实验八维生素B1片含量测定的方法验证
一、实验目的
1.验证维生素B1含量测定的方法的准确性和可靠性。
2.了解高效液相色谱法对于短波紫外检测器的适应性。
二、实验原理
1.高效液相色谱法
高效液相色谱法（HPLC）是一种高效分离、快速分析的方法。它与用计算机控制的仪器联用，可以进行定量、半定量和定性分析。本实验中，采用HPLC法测定维生素B1的含量。
2.短波紫外检测器
短波紫外检测器是一种用于分析有机物的光谱仪器。它在紫外光谱的200~400nm范围内进行检测，可以检测吸收较大的分子。在本实验中，采用短波紫外检测器测定维生素B1的含量。
三、实验步骤
1.样品的准备
取维生素B1片0.2g，加入250mL量瓶中，加入10mL0.1mol/L盐酸溶液，加水至刻度线，摇匀，称取100mL筛滤取滤液5mL，加入5mL4%磷酸溶液中，用向后溯流液相色谱（HPLC）法测定。
2.试剂的准备
（1）0.1mol/L盐酸溶液
取盐酸100mL，加水至1000mL，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液调节pH，使溶液处于酸性状态。
（2）4%磷酸溶液
取磷酸15mL，加水至250mL，摇匀。
（3）乙腈甲醇（2:1）
将乙腈甲醇配制成2:1比例。 3.测定方法
（1）样品注射量为20μL。
（2）柱温为35℃。
（4）短波紫外检测器的检测波长为266nm。
4.数据处理及结果分析
四、实验结果
样品编号 维生素B1标准品质量（mg） 峰面积（mv∙s） 维生素B1含量（mg）
1 0.006 8898 0.006
2 0.008 11956 0.008
3 0.010 15576 0.010
