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孔雀嗦囊毛细线虫的分子鉴定

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．８．试验研究　养殖与饲料２０１５年第９期　

孔雀嗦囊毛细线虫的分子鉴定　

王荣琼’刘永张　邹丰才　杨建发　彭　洁　

１．云南农业职业技术学院，昆明６５０２１２；　

２．云南省昆明动物园，昆明６５００２１；　

３．云南农业大学动物科学技术学院，昆明６５０２０１　

．摘要通过分子生物学方法对来自昆明市圆通山动物园孔雀消化道中收集的线虫进行鉴定。结果显示，该　

线虫与ＧｅｎＢａｎｋ发表的澳大利亚袋鼠毛细线虫ＣＯＸ１序列的相似性为７７．３％，证明该线虫为毛细科毛细属的毛　

细线虫。ＣＯＸ１序列分析表明序列差异较明显，说明孔雀毛细线虫不同于澳大利亚袋鼠毛细线虫，它们存在着遗传　

背景的差异。　

关键词孔雀；毛细线虫；ＣＯＸ１序列；分子鉴定　

毛细线虫病是由毛细科（Ｃａｐｉｌｌａｒｉｉｄａｅ）毛细属　

（Ｃａｐｉｌｌａｒｉａ）的多种线虫寄生于禽类食道、嗉囊、肠道　

等消化道内的一种寄生虫病。轻度感染时，局部出　

现轻微炎症和增厚；严重感染时，炎症加剧，并出现　

黏液或浓性分泌物，剖检可见寄生部位消化道出　

血，黏膜上有大量虫体，严重感染时，可引起死亡。　

病初如误用消炎药或抗球虫药，会延误病情的治　

疗，因此对其鉴定到种显得由为重要【ｎ。　

本项试验拟进一步深入研究形态学所不能解　

决的问题，欲通过分子生物学技术鉴定孔雀嗉囊内　

收稿日期：２０１５—０７—０４　

基金项目：云南省教育厅科学研究基金项目（２０１０Ｃ１３０）　

通讯作者　

王荣琼，女，１９７８年生，在职兽医硕士，副教授。　的毛细属线虫，以期能确定到种。这是首次在云南　

采用分子生物学的方法对孔雀寄生虫的种属关系　

进行鉴定。对保护世界濒危物种及鉴定寄生虫的种　

类来丰富虫种资源有重要的意义。也为今后孔雀体　

内线虫的分类、鉴别诊断、分子流行病学调查以及　

本病的防治等更深入的研究奠定基础。　

１材料与方法　

１．１材料　

虫体样品：由昆明市圆通山动物园提供。　

３结果与讨论　

１）在阴性转阳性试验中，首次免疫后抗体爬升　

速度很慢，３～４周才有体现。二次免疫没有体现出　

抗体提升的效果。当然，也可能没有二次免疫的话，　

免疫效果更差。　

２）在阴性转阳性二次免疫过程中，２个实验组整　

体抗体水平差异不大。有一段时间有差异，也是和　

个别试验猪“不合群”的抗体表现有直接原因。　

３）在两试验组同时更换ＴＪＭ—Ｆ９２株疫苗进行　

免疫时，差异非常明显。理论上ＪＸＡ１株和ＴＪＭ—Ｆ９２　株都属于高致病性蓝耳毒株，核苷酸序列同源性很　

高，但在试验中并没有很好的体现，没有起到免疫　

记忆效果。而之前免疫ＶＲ一２３３２毒株的，在更换　

ＴＪＭ—Ｆ９２株疫苗免疫后抗体快速上升，确实很意　

外。　

４）就试验结果而言，结合蓝耳疫苗免疫安全性　

的问题（高致病性毒株疫苗安全性差），是否可以考　

虑采用经典毒株ＶＲ－２３３２株代替ＴＪＭ—Ｆ９２株的疫　

苗进行蓝耳免疫。至于其他经典毒株能否代替　

ＴＪＭ—Ｆ９２株以及ｖＲ一２３３２株能否代替其他高致病　

性蓝耳毒株，本文试验未涉及，不得而知。

　．１０．试验研究　养殖与饲料２０１５年第９期　

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图４孔雀毛细线虫与澳大利亚袋鼠毛细线虫ＣＯＸ１序列比较　

注：Ａ为澳大利亚袋鼠毛细线虫ＣＯＸｌ序列；Ｋ为孔雀毛细线虫样品ＣＯＸｌ序列；“・”表示与Ａ位置的碱基相同；“一”表示与Ａ位置缺失１个碱基。　

７７．３％，序列差异较明显（图４）。发现孔雀毛细线虫单　

独形成一个分支，说明孔雀毛细线虫不同于袋鼠毛细　

线虫，他们存在着地域及遗传背景的差异。也说明了　

孔雀毛细线虫ＣＯＸ１序列存在种的特异性，可作为鉴　

别孔雀毛细线虫与相似种的有效遗传标记。　

３结论　

野生动物寄生虫研究较少，很多寄生虫严重威　

胁着我国珍贵野生动物。将该线虫的ＣＯＸ１序列与　

ＧｅｎＢａｎｋ公布的澳大利亚袋鼠的毛细线虫的ＣＯＸ１　

比较分析，相似性为７７．３％。说明孔雀毛细线虫与袋　

鼠毛细线虫具有遗传背景差异，也说明孔雀毛细线　

虫ＣＯＸ１序列存在种的特异性，可作为鉴别孔雀毛　

细线虫与相似种的有效遗传标记。但对野生动物寄　

生虫的研究远远还不够，需要投入更多的人力和物　

力来填补这方面的空白ｔ２－＊一。　

近年来线粒体ＤＮＡ已被广泛用作多态性研究　

的重要遗传标记，结合ＰＣＲ扩增及其他方法已成功　

地应用于多种寄生虫的分子鉴定和分类，通过其序　列的变化可反映生物种群内和群体间的遗传变异，　

且ｍｔＤＮＡ特别适用于相似种和亚种的鉴定　。　

参考文献　

谢辉，冯志新．香港地区螺旋线虫种类记述明．华中农业大学学　

报，１９９６，１５（１）：３０—３４．　．　

王伯瑶，黄宁主编．分子生物学技术【Ｍ】．北京：北京大学医学出版　

社，２ＯＯ６：３７—４５．　王洪英．蓝孔雀常见疾病的症状及防治措施叨．养殖技术顾问，　

２００９（４）：５５—５６．　陈虹虹，陈晓梅，朱兴全，等．ＰＣＲ—ｓＳＣＰ对我国鲁道夫对盲囊线　

虫的分子鉴定叨．中国兽医学报，２００６，２６（１）：３５—３８．　索勋，杨晓野．高级寄生虫学实验指导　】．北京：中国农业科学技　

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牛庆丽，罗建勋，殷宏．转录间隔区ｆｉｒｓ）在寄生虫分子生物学分　

类中的应用及其进展叨．中国兽医寄生虫病，２００８，１６（４）：４１—４４．　

张路平，孔繁瑶．线粒体ＤＮＡ在线虫学研究中的应用们．寄生虫　

与医学昆虫学报，１９９７，４（３）：１７８，１８２．　

赵光辉，张改平，宁长申，等．基于ＣＯＸ１基因对猪囊尾蚴河南分　

离株种系发育关系的研究叨．畜牧兽医学报，２００８，３９（１）：７２—７８．　Ａ　Ｋ　Ａ　Ｋ　Ａ　Ｋ　Ａ　Ｋ　Ａ　Ｋ　Ａ　Ｋ　Ａ　Ｋ　

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2.线虫纲、吸虫纲虫体常用的实验室检查方法

2.线虫纲、吸虫纲虫体常用的实验室检查方法

2.线虫纲、吸虫纲虫体常用的实验室检查方法

2线虫纲和吸虫纲是动物界中两个重要的寄生虫纲，它们引起了许多人类和动物的疾病。为了研究和了解这些寄生虫的特征和生活史，实验室检查是必不可少的。以下是关于2线虫纲和吸虫纲虫体常用的10种实验室检查方法的详细描述。

1. 显微镜检查

显微镜检查是识别和观察线虫纲和吸虫纲虫体最常用的方法。寄生虫标本通过制备透明或染色的片片检查，可以观察到虫体的结构特征、外骨骼、体内器官以及其他相关特征。

2. 漂浮法

漂浮法是一种用于寄生虫卵的检查方法。将宿主体液或粪便样本离心，沉淀后上清液上层取出，将其置于载玻片上，然后加盖滴液，并用显微镜观察虫卵的形态、大小和数量。

3. 粪便检查

线虫纲和吸虫纲虫体通常通过对宿主的粪便样本进行检查来确认感染。采集新鲜的宿主粪便样本，制备湿涂片或浓缩片，并用显微镜检查虫卵、虫幼体或虫体。

4. 血液检查

某些线虫纲和吸虫纲寄生虫可以通过检查宿主的血液样本来确定感染情况。这通常涉及到制备薄片或涂片，并使用显微镜检查寄生虫的成虫、幼虫或虫卵。

5. 组织切片

对一些感染的组织进行切片是观察和确定寄生虫存在的另一种重要方法。通过取得组织样本，将其固定、制片，然后用染色剂染色，最后使用显微镜进行观察。

6. 生活史研究

为了了解线虫纲和吸虫纲的生活史和生活循环，可以进行相关的实验室研究。这包括培养和观察幼虫、产卵和孵化的过程，以及在不同条件下的生长和发育过程。

7. DNA分析

DNA分析是确认和鉴定线虫纲和吸虫纲寄生虫的一种有力方法。通过提取寄生虫的DNA，使用分子生物学技术如PCR、DNA测序等进行分析，可以确定物种的身份和遗传特征。 8. 宿主动物感染实验

为了研究线虫纲和吸虫纲寄生虫的传播和病原性，可以进行宿主动物感染实验。选择适当的实验动物，将感染源注入宿主体内，然后观察和记录感染后的症状、病程和寄生虫的存在。

菌种鉴定方法及手段真菌细菌检测

菌种鉴定方法及手段真菌细菌检测

菌种鉴定方法及手段真菌细菌检测

菌种鉴定是指通过特定的方法和手段，对样品中存在的真菌和细菌进行鉴定和分类的过程。下面将介绍几种常见的菌种鉴定方法及手段。

1.形态学鉴定：形态学鉴定是根据菌落形态、菌丝形态和孢子形态等特征来鉴定菌种的一种方法。常见的形态学鉴定方法包括裸眼观察、显微镜观察、染色观察等。裸眼观察主要通过观察菌落的颜色、形状、质地等特征，结合菌丝形态进行初步判断。显微镜观察可以观察到菌丝的形态、孢子的形状、颜色等细节特征，通过比对菌种鉴定手册等资料进行鉴定。

2.生理代谢鉴定：生理代谢鉴定是通过菌株在不同培养基上的生理代谢特点来鉴定菌种的方法。常见的生理代谢鉴定方法包括生理生化鉴定、生长温度范围鉴定、碳源利用鉴定、氮源利用鉴定等。通过测定菌株在不同培养基上的生长速率、产酶能力、酸碱度变化、利用不同碳源和氮源等特征，判断菌株所属的种属。

3.分子生物学鉴定：分子生物学鉴定是通过检测菌株的DNA序列来鉴定菌种的一种方法。常见的分子生物学鉴定方法包括PCR技术、基因测序、DNA指纹图谱鉴定等。通过提取菌株的DNA，选择合适的引物进行PCR扩增，再通过基因测序获得菌株的DNA序列，通过比对菌株的DNA序列与数据库中已知的菌种进行比对，确定菌株所属的种属。

4.免疫学鉴定：免疫学鉴定是通过检测菌株与特定抗原的反应关系来鉴定菌种的方法。常见的免疫鉴定方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹等。通过与特定抗原结合，通过特异性抗体的反应来进行菌种的鉴定。 5.生化鉴定：生化鉴定是通过检测菌株的生化活性来鉴定菌种的方法。常见的生化鉴定方法包括生化试剂盒、色谱分析、质谱分析等。通过检测菌株在不同生化试剂上的产物或反应物的变化，进行菌种的鉴定。

综上所述，菌种鉴定方法及手段包括形态学鉴定、生理代谢鉴定、分子生物学鉴定、免疫学鉴定和生化鉴定等多种方法和手段。不同的鉴定方法可以互相补充，提高鉴定的准确性和可靠性。

昆虫病原线虫的分子鉴定

昆虫病原线虫的分子鉴定

土壤与作物

2020年

12月 第

9卷 第

4期

Soils and Crops, Dec. 2020,9(4)

：380 - 387

李春杰

，王鑫鹏

，黄铭慧

，等

•昆虫病原线虫的分子鉴定

［J］. 土壤与作物

,2020,9(4):380 -387.

LI C J,WANG X P,HL AN G M H,et al. Molecular identification of entomopathogenic nematodes ［J］. Soils and Crops, 2020,9(4)

：380 - 387.

昆虫病原线虫的分子鉴定

李春杰

1,王鑫鹏

W,黄铭慧

W,姜 野

W,王从丽

1

(1.中国科学院东北地理与农业生态研究所 黑土区农业生态重点实验室，黑龙江 哈尔滨150081；

2.中国科学院大学，北京100049)

摘 要

：为了快速鉴定昆虫病原线虫，同时验证实验室多年保存的昆虫病原线虫种或品系间的差异，采用线虫保守区间核

糖体DNA (rDNA，18S-ITS1-5. 8S-ITS2-28S)的PCR扩增和测序分子鉴定方法，对13个线虫种和品系的18S-28S

rDNA和28S rDNA ( D2 -D3 )进行扩增并对序列进行比较和分析，研究斯氏属(Steinernema)和异小杆属(Heterorhabditis)

线虫的rDNA保守区域是否和已报道的线虫相同。结果表明，28S rDNA的D2-D3的扩增序列比对的分子数据和形态学鉴

定的结果完全一致，且与基因库已报道的线虫种相似度达到99% - 100%，能明显区分线虫属、种或者品系。18S - ITS1 -

5. 8S的序列能够区分

S. glaseri和

S. carpocapsae，但不能区分序列相近的

S. Utorale和

S. feltiae，需要內转录间隔区ITS2来区

分。因此，rDNA能被用于快速分类鉴定昆虫病原线虫的种和品系。

关键词

：昆虫病原线虫；分子鉴定；核糖体DNA； ITS； D2-D3

植物寄生线虫分子鉴定技术研究进展

植物寄生线虫分子鉴定技术研究进展

植物寄⽣线⾍分⼦鉴定技术研究进展

植物寄⽣线⾍分⼦鉴定技术研究进展

学⽣：

指导⽼师：

摘要：20世纪80年代以来,分⼦⽣物学技术在各个研究领域得到⼴泛应⽤，分⼦鉴定诊断技术也成为植物线⾍学研究的新途

径。本⽂将简述运⽤多种分⼦技术，如限制性染⾊体⽚段长度多型性(RFLPS)、特异性DNA探针、线粒体DNA、合成低聚核

苷酸，rDNA–ITS–PCR 等分⼦⽣物学⽅法来区分、鉴定植物寄⽣线⾍的⽅法。

关键词：植物寄⽣线⾍; 分⼦⽣物学; DNA序列; 线⾍分⼦鉴定

Research progress of plant-parasitic nematode

identification technology

Student：YANG Hao-na

Instructor:HUANG Guo-hua

Abstract:Since in the 1980 of the 20th century, molecular biological techniques in all areas of research widely, molecular

identification of diagnosis new approach to technology has also become a study of plant-parasitic nematodes. Brief

introduction of this article using various molecular techniques, Such as restrictive chromosome fragment length

polymorphism(RFLPS), Specific DNA probe, Mitochondrial DNA, Synthesis of oligonucleotide, rDNA–ITS–PCR

identification of molecular biological methods to distinguish, such as methods of plant-parasitic nematodes.