痰涂片抗酸杆菌检验的室内质量控制
痰涂片抗酸杆菌检验主要用于对肺结核病人的诊断、化疗效果评价及为流行病学疫情评价服务，其检验的质量保证对于持续提高实验室痰涂片抗酸杆菌检验的工作效率和可信性非常重要。质量保证包括室内质控、室间质量评估及质量提高，其中室内质控是质量保证的基础。
抗酸杆菌痰涂片检验的室内质量控制包括：实验室内部的操作规程、设备及耗材，痰标本收集、染色液制备、涂片制备和染色、显微镜维护、显微镜镜检结果登记和报告以及痰片保存等整个过程的内部检查及监测。具体操作如下：
1 标本的收集
1.1容器 用直径4cm高度2cm的蜡纸盒收集痰标本，盒上标明病人姓名、日期编号和容器序号1、2、3（1为当日即时痰，2为夜间痰，3为次日晨痰）。
1.2痰标本性质 干酪痰、血痰、粘液痰为合格标本、唾液或口水除照常进行涂片检查外，应要求患者重新送检。
1.3初诊病人收集3份痰标本（当日即时痰、夜间痰和次日晨痰），随访病人或治疗中病人按期每次收集2份痰标本（夜间痰及次日晨痰）。
1.4不能当日及时涂片检查的标本置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。
2 抗酸染色液制备
2.1配制染色液的实验室必须按标准浓度和步骤配制染色液，实验室要有染色液制备配方和配制记录。
2.2染色液试剂瓶需标明染色液名称、浓度和制备时间。
2.3染色液置于棕色瓶或不透明塑料瓶内存放，避光保存。
2.4每次制备一批新的染色液后，需使用未经染色的已知阳性和阴性涂片进行染色镜检，并记录结果，以保证染色液的质量。
3 涂片制备
3.1新载玻片应经95%乙醇脱脂，无划痕。
3.2一张载玻片只能涂抹一份痰标本，且一次性使用，不可重复使用。
3.3铅笔在磨砂面玻片的磨砂面上注明实验序号及标本序号，若使用无磨砂面的玻片，则使用玻璃刻刀在玻片一端的1/3处进行标注。
3.4取大约0.05ml痰标本，在玻片正面右侧2/3的中央处均匀涂抹面积为10×20mm的卵圆形痰膜。
结核杆菌痰涂片镜检的意义及其应注意的问题需知
结核杆菌，是人类结核病的病原菌。结核杆菌是专性需氧菌，无鞭毛，有荚膜，没有运动能力，典型的结核杆菌的形态为细长稍弯曲或直的、两端圆钝的杆菌，长1μm～4μm，宽0.3μm～0.6μm。痰涂片经过抗酸染色阳性的标本，在100倍的生物显微镜下可在蓝色背景下看到紫红色的杆状菌，呈单个散在，有时也呈X、Y形或条索状、聚集成簇等。痰涂片经金胺“O”染液染色后，在含有紫外光源的荧光显微镜下发出橘黄颜色，高倍镜（物镜40倍 目镜10倍）下，可见结核杆菌产生黄绿色荧光，呈杆状或分枝状。目前基层实验室多采用抗酸染色镜检。
（一）结核杆菌痰涂片镜检的意义
1.诊断传染性肺结核
结核病的控制是以发现和控制传染源为主，而痰涂片镜检阳性的肺结核患者是社会上最主要的传染源，故痰涂片镜检结果对诊断传染性肺结核具有重要意义。
2.评价化疗效果
结核病是由结核杆菌引起的，针对结核病的治疗，现行化疗方案的制定也主要是以结核杆菌的生物学特性为依据，所以痰涂片镜检结果可以作为化疗效果的评估依据。
1.
为流行病学疫情评价服务
由于传染性肺结核在流行病学中有着特殊的意义，因此，涂阳患病率、涂阳发现率是反映某一国家或地区结核病疫情的严重程度的重要指标。根据世界卫生组织（WHO)和国际防痨及肺部疾病联合会（UNION）针对低收入且结核病疫情严重的发展中国家所制定的技术指南，痰涂片镜检是相应国家开展结核病控制项目时非常符合成本效益原则的细菌学试验技术。相对于临床和实验室经常采用的其他诊断和检查项目，高质量的痰涂片镜检有其自身特殊的优势：作为诊断手段，对传染性肺结核的诊断比X线的准确性高；技术相对简单，操作容易标准化；建立结核杆菌检查室设备投入少；检查成本低，易于接受；从收到标本到报告结果的时间短，能够满足临床诊断的需要；对涂阳患者的治疗效果，能够作出及时和准确的评价。
（二）结核杆菌痰涂片镜检应注意的问题
广东医学２０１１年８月第３２卷第ｌ５期 ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ａｕｇ．２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．１５
参考文献 【３］ＳＣＨＵＬＩＴＺ Ｋ Ｐ，ＡＳＳＨＥＵＥＲ Ｊ・Ｄｉｓｃｉｔｉｓ ａｆｔｅｒ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｏｎ ｔｈｅ
［ ］ ＭＡ ＧＮＥ Ｙ，ＰＬＡＮｃＨ０Ｎ ｃＡ・ 。ｒＵｉ ｊ。ｉ“ ｐ ｉ“ａｎ。 “ｍｈ ［４］张旭，张春和，高金伟．腰椎间盘术后椎间隙感染的早期诊断 ｆｕ ｉ。“・Ａ ”ｄｙ ｉ ｈ 。 【ｈ ｉ。ｂｌ ｋ Ｊ］・Ｅ ｓｐｉ“ Ｊ，２ｏ０５，１４ 治疗［Ｊ］．中华矫形外科杂志，２００５，１３（３）：２３２—２３３． ……’ ［５］ 陈伯华，胡有谷，何树刚，等．原发性下腰椎椎间隙感染［Ｊ］． ［２］ Ｑ叭 ｏＮＥ ｍＮＯＪｏ Ａ Ａ，ＪＵＮ ＪＡｃ０Ｂ Ｒ’ ＿Ｇｅｎｅｒａｌ 柱善 ： １ ０（２ ）： Ｏ６一 ．……… ｐ丌“ ｐ ｅｓ “ｍ。 。ｍ。。 ｓｕｒｇｉｃａｌ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｓｐｉｎａｌ 。。一 （收稿日期：２０１１—０２—２１ 编辑：林培德） ｔｉｏｎｓ：ｍｕｈｉｄｉｓｅｉｐｌｉｎａ￣ａｐｐｒｏａｃｈｌ Ｊ Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ Ｆｏｃｕｓ，２００４，１７ （６）：Ｅ１．
发光二极管荧光法与抗酸染色法查找抗酸菌
效果对比术
钱明，高燕波，陈燕梅，尹建军，江勇，陈涛，李海成，钟球
广东省结核病防治研究所（广州５１０６３０）
【摘要】 目的通过发光二级管荧光法与抗酸染色法查找抗酸茵效果的对比，评价发光二极管荧光法查找 抗酸杆菌的应用价值。方法将发光二极管荧光法金胺“０”染色涂片采用抗酸染色法复染，以抗酸染色法结果作 为参照．比较两种方法的检验结果。结果 对１ ０６３张涂片检查结果进行比较，抗酸染色检查法阳性率为
３９．３２％，发光二极管荧光法阳性率为４６．００％。在６４５张抗酸染色检查阴性的结果中，发光二极管荧光法有７１张
・调查报告・ 国际检验医学杂志２０１２年６月 ３３鲞箜 塑！ 盟！』 堡 ！ ！：望！ ： 某地区抗酸杆菌阳性携带者痰液检测及结果分析 陈明明，李自越，李 岩，路 蔓，张惠中△ （第四军医大学唐都医院检验科，西安７１００３８） 摘要：目的探讨近年西安地区抗酸杆茵携带者的发病趋势 方法 直接厚涂片萋一尼氏抗酸染色法染色显微镜检查，并 对结果进行统计分析。结果 ２００９￣２０１１年女性和６０岁以上的老年人抗酸杆菌阳性检出率逐年升高；抗酸杆菌在干酪样痰中 的检出率明显高于其他性状的痰标本（Ｐ＜Ｏ．０５）。结论４ｃ，ｔ￣和老年人应注意防治，避免感染；在标本送检时，应注意留置痰液 标本的标准和要求。 关键词：痰；抗酸杆茵；女性；老年人 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１２．１２．０２０ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４１３０（２０１２）１２—１４５２—０２ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｃｉｄ－ｆａｓｔ ｂａｃｉｌｌｉ ｉｎ ｓｐｕｔｕｍ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｃａｒｒｙｉｎｇ ａｃｉｄ－ｆａｓｔ ｂａｃｉｌｌｉ ｉｎ ｃｅｒｔａｉｎ ａｒｅａ Ｃｈｅｎ Ｍｉｎｇｍｉｎｇ，Ｌｉ Ｚｉｙｕｅ，Ｌｉ Ｙａｈ，Ｌｕ Ｍａｎ，Ｚｈａｎｇ Ｈｕｉｚｈｏｎｇ （ＤＰｐ盘ｒ￡， Ｄｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｔａｎｇｄｕ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅ Ｆｏｕｒｔｈ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ ａｎ，Ｓｈａｎｘｉ ７１００３８，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｔｒｅｎｄ ｏｆ ａｃｉｄ—ｆａｓｔ ｂａｃｉｌｌｉ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ ｔｈｉｓ ａｒｅａ ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｚｉｅｈｌ－ Ｎｅｅ１ｓｅｎ ｓｔａｉｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅＣｔ ａｃｉｄ－ｆａｓｔ ｂａｃｉｌｌｉ ｉｎ ｄｉｒｅｃｔ ｔｈｉｃｋ ｓｍｅａｒ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｗｉｔｈ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ，ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｓｔａｆｆｓ— ｔｉｃａ１１ｖ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ａｃｉｄ—ｆａｓｔ ｂａｃｉｌｌｉ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｙｅａｒ ｂｙ ｙｅａｒ ｉｎ ｆｅｍａｌｅ ａｎｄ ａｇｅｄ ＳＵｂｊｅｃｔｓ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ６０ ｙｅａｒｓ ｏｌｄ ｆｒｏｍ ２００９ ｔｏ ２０１ １．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ａｃｉｄ－ｆａｓｔ ｂａｃｉｌｌｉ ｉｎ ｃａｓｅｏｕｓ ｓｐｕｔｕｍ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｉｎ ｓｐｕｔｕｍ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｏｆ ０ｔｈｅｒ ｔｒａｉｔｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｍｏｒｅ ａｔｔｅｎｔｉｏｎ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｐａｉｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍａｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｌｄｅｒｌｙ．Ｓｐｕｔｕｍ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ａｎｄ ｓｅｎｔ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ａｎｄ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｓｐｕｔｕｍ； ａｃｉｄ—ｆａｓｔ ｂａｃｉｌｌｉ； ｆｅｍａｌｅ； ａｇｅｄ 痰标本的检测是发现结核杆菌传染源的最主要途径和手 段，是确定结核病诊断和鉴别诊断的重要依据和方法，也是考 核疗效、评价防治效果的可靠标准 ］。在现代结核病控制工作 中占有不可或缺的位置。据世界卫生组织（ＷＨＯ）统计，大约 １／３的世界人口感染结核菌，而且据统计，个别地区的抗酸杆 菌携带者在逐渐上升ｒｚ］。笔者对西安地区２００９年１月至 ２０１１年１２月不同时间收集的痰液标本进行检测，并对结果进 行了分析和讨论，现报道如下。 １资料与方法 １．１ 调查对象 １０ ８９６例痰液标本来源于２００９年１月至 ２０１１年１２月本院呼吸科就诊患者，其中门诊患者痰液标本 ２ ５０４例，住院患者痰液标本８ ３９２例，男性患者痰液标本７ １８５ 例，女性患者痰液标本３ ７１１例。 １．２仪器与试剂 Ｏｌｙｍｐｕｓ ＣＸ２１光学显微镜、玻片。结核 菌染色液购自珠海贝索生物技术有限公司。 １．３方法 １．３．１染色采用直接厚涂片萋一尼氏抗酸染色法＿３］：涂片自 然干燥后，火焰固定；滴加苯酚复红溶液盖满玻片，染色５ ｍｉｎ； 流水冲洗，冲去染色液后滴加酸性酒精溶液脱色１～２ ｍｉｎ，如 有必要，需流水冲去酸性酒精溶液后，再次脱色至痰膜无可视 红色为止；流水冲洗，冲去酸性酒精溶液后滴加亚甲基蓝溶液， 染色３Ｏ～６０ Ｓ；流水冲洗，冲去亚甲基蓝溶液，待玻片干燥后用 １００倍油镜观察，镜检３００个视野（１０ ｍｉｎ内完成）。 １．３．２报告结果痰检结果记录、报告采用结核病细菌学检 验规程的有关标准报告｜４］。 通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｄｚｈｚ３２８＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｃｒｌ。 １．４统计学处理实验数据处理采用ＳＰＳＳ１３．０软件系统， 率的比较采用卡方检验。 ２结 果 ２．１痰液标本抗酸染色检测结果 １０ ８９６例标本中阳性３６０ 例，阳性检出率为３．３０ ；男性标本数７ １８５例，女性标本数 ３ ７１１例，男性２１５例阳性，女性１４５例阳性，男性阳性率为 ２．９９ ，女性阳性率为３．９１ 。 ２．２不同性别间抗酸染色阳性率比较见表１。 表１ ２００９￣２０１１年不同性别抗酸染色阳性率比较
