2012-2013《分子生物学实验》试卷
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一,填空题(每空2分共20分)
1,测定DNA浓度和纯度的方法通常有 法和 法。
2,1OD的光密度值相当于双链DNA浓度为 。
3抽提质粒的过程中,由于各种因素的影响,使其可能存在三种构型,电泳中,泳动最快的是 ,其次 ,最慢的是 。
4,不同来源的限制性内切酶可以切割相同的序列这些酶称为 。
5,只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成,用 技术可以将这段DNA进行百万倍的扩增。
6,连接Buffer中含有的 为连接反应提供能量,要尽量避免其反复冻融。
7,细胞的感受态一般出现在生长 期。
二,判断题(每小题3分共30分)
1,实验测得A260/A280=1.8说明提取的DNA 样品非常纯净。( × )
2,Taq酶和DNA连接酶均需要引物。( × )
3,酶切反应过程中为保证底物完全反应,加入的酶越多越好。( × )
4,提取质粒过程中,加入溶液Ⅱ时不能剧烈振荡。( √ )
5,T4DNA连接酶只能连接具有粘性末端的序列。( × )
6,在PH=8.0时核酸分子带负电荷,向正极移动。( √ )
7,设计引物时,向引物5'端添加限制性酶切位点,同时应超出限制酶识别位点2-3个核苷酸为宜,作为保护碱基。( √ )
8,用乳糖基因插入失活法,筛选出白色噬菌斑均为重组子。( × )
9,制备感受态细胞时应严格无菌操作,不能离开冰浴条件。( √ )
10,所有的酶均应在其最适反应温度下进行。( × )
三,简答题(每小题10分共30分)
1,SDS碱裂解法制备质粒DNA中三种溶液的生化原理分别是什么?(10分)
2,移液器的使用中应该注意哪些问题?(10分)
3,转化时为什么要先在不含抗生素的液体培养基中培养1个小时,然后再涂布于含有抗生素的平板上?(10分)
四,综合题(20分)
我们在拟南芥中发现了一个抗旱基因A,想通过转基因技术把它转到玉米中,提高玉米的抗旱能力,解决全国缺水导致的玉米减产问题,请结合本课程的实验,设计一个吧A基因的全部序列整合到表达载体p1300上得到重组子的详细过程。(表达载体p1300可用EcolⅠ和Hind Ⅲ两个酶切位点来酶切,载体抗氨苄青霉素,同时含有β-半乳糖苷酶的N端序列,其中EcolⅠ和Hind Ⅲ两个酶切位点在β-半乳糖苷酶的N端序列的编码区内)。