根蛋白(RDX)ELISA试剂盒说明书

REV20190712仅供研究，不用于临床诊断。

客服热线: 400-7060-959﹡技术支持邮箱: **************公司官网: 目录简介 ................................................................................................................................................... - 3 -检测原理............................................................................................................................................ - 3 -试剂盒组分 ........................................................................................................................................ - 4 -储存条件............................................................................................................................................ - 4 -其他实验材料(不提供，但可协助购买) : ......................................................................................... - 5 -注意事项............................................................................................................................................ - 5 -样本收集处理及保存方法 .................................................................................................................. - 5 -试剂准备............................................................................................................................................ - 6 -操作步骤............................................................................................................................................ - 7 -操作流程图 ........................................................................................................................................ - 8 -操作要点提示..................................................................................................................................... - 8 -结果判断............................................................................................................................................ - 8 -结果重复性 ........................................................................................................................................ - 9 -灵敏度................................................................................................................................................ - 9 -特异性.............................................................................................................................................. - 10 -参考文献.......................................................................................................................................... - 10 -该产品由北京四正柏生物科技有限公司研制。

大豆抗原蛋白elisa试剂盒使用方法检测范围：96T2 ng/L -48 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中大豆抗原蛋白含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大豆抗原蛋白水平。

用纯化的大豆抗原蛋白抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入大豆抗原蛋白，再与HRP标记的大豆抗原蛋白抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的大豆抗原蛋白呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大豆抗原蛋白浓度。

试剂盒组成1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

核蛋白提取试剂盒说明书货号：R0050规格：50T/100T 产品内容：保存：核/浆蛋白抽提试剂2-8℃保存，PMSF 于-20℃保存。

产品简介：本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。

整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。

得到的蛋白可以用于Western blot 等实验。

本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。

然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。

本试剂盒可以抽提50/100个样品（每个样品约2×106个Hela 细胞或40mg 组织）。

操作方法（仅供参考）：*裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

一、对于体外培养细胞：1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1mM 。

PMSF 需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT 至终浓度0.5mM 。

2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS 洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA 消化后吹打下细胞（最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。

500g 离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。

3．对于悬浮细胞：用PBS 洗一遍，500g 离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。

4．每20μL 细胞沉淀加入200μL 浆蛋白抽提试剂（2×106个细胞沉淀的体积约20μL 或40mg ）。

5．用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长），必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。

细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。

6．冰浴10分钟。

7．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃12000～16000g 离心10分钟。

8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的PAGE 、Western 等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。

产品说明书人血管内皮生长因子ELISA试剂盒（Human VEGF ELISA KIT）产品货号：H6139S, H6139M, H6139L产品规格：24T, 48T, 96T产品内容：注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。

储存条件4℃避光保存，有效期见外包装。

开封后，保存温度详见说明书。

产品介绍Human VEGF ELISA Kit (Human Vascular Endothelial Cell Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人血管内皮生长因子ELISA试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组VEGF浓度。

人VEGF是由两个相同亚基以二硫键交联组成的二聚体糖蛋白，基因定位于第6号染色体长臂，由8个外显子和7个内含子交替构成，约14 kb。

由于mRNA剪接方式不同，产生了单链分别含121，145，165，183，189和206个氨基酸的不同变异体。

VEGF 121分子量约为34-46 kDa，是可溶性分泌型蛋白质，以游离状态存在，不能与肝素结合；VEGF 165分子量为45 kDa，30-50%以可溶性形式分泌于细胞外基质，其余部分与细胞膜、基底膜或细胞外基质含有肝素的糖蛋白结合。

VEGF 145存在于胎盘细胞和女性生殖道肿瘤细胞。

VEGF 189及VEGF 206分泌后完全结合于细胞膜或基底膜含有肝素的糖蛋白上。

骨骼肌，心肌，肝细胞，成骨细胞，中性粒细胞，巨噬细胞，角质形成细胞，血小板，褐色脂肪组织，CD34+细胞，星形细胞，神经元和内皮细胞等多种细胞和组织均可产生VEGF。

血清和血浆样本均可检测到VEGF，由于血小板可释放VEGF，因此血清中VEGF含量较高。

VEGF是一种特异作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，可增加血管通透性、促进血管形成、引起细胞外基质成分改变等。