三种丙酮酸氧化酶法试剂盒测定ALT比较

包头文治医院- 1 -丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（IFCC法）【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清或肝素血浆中丙氨酸氨基转移酶的活力。

【检验原理】在ALT催化下，从丙氨酸转移到2个氨基到α-酮戊二酸上，生成产物谷氨酸和丙酮酸。

后者通过乳酸脱氢酶催化下转变成乳酸，在340nm波长条件下检测到NADH吸光度下降速率，与ALT的活力成比例。

L-丙氨酸+α-酮戊二酸ALT丙酮酸+ L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H+LDH L-乳酸+NAD++H2O【主要组成成份】R1：Tris缓冲液150mmol/L L-丙氨酸750 mmol/L 乳酸脱氢酶（LDH） 1200U/LNADH 0.4mmol/LR2：α-酮戊二酸90mmol/L NADH 0.9mmol/L *不同批号试剂盒各组分请勿混用。

【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。

试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定28天。

试剂不可冰冻。

【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。

若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。

建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。

【样本要求】新鲜血清或肝素血浆样本，采集后及时测定，应避免污染。

【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm 温度37℃分析类型动力学法反应方向下降反应操作步骤空白/校准/样本10ul R1200ul混匀，37℃孵育5min；R250ul 混匀，37℃孵育1min后，连续测定3min内的吸光度，计算吸光度变化率（ΔA/min）。

丙氨酸胺基转移酶测定SOP_ALT临床意义_检验科生化项目SOP丙氨酸胺基转移酶（alanine aminotransferase，ALT），又称谷丙转氨酶，是一种存在于细胞内的酶，主要分布于肝脏、心肌、肾脏和肌肉组织中。

ALT的主要功能是参与氨基酸代谢，将丙氨酸转化为丙酮酸，并把谷氨酸转化为谷酸。

ALT是一种常用的临床血液生化指标之一，用于评估肝细胞损伤和肝功能。

ALT水平常常在肝脏疾病、肝细胞损伤和一些非肝脏疾病中发生变化，因此，ALT的测定具有重要的临床意义。

测定ALT的方法是通过检测血液中ALT的活性。

以下是丙氨酸胺基转移酶测定的SOP（标准操作程序）：1. 准备样本：选择新鲜的全血或血清样本。

尽量避免使用有凝块的样本。

将样本转移到离心管中，并在3000 rpm的离心机中离心10分钟。

2.样本处理：将血清分装到干净的离心管中，避免沉淀和异物。

在2-8摄氏度的条件下保存样本，如无法在2小时内进行测定，应冷冻保存。

3.实验准备：将所需试剂室温恢复至室温，配制工作液，准备好标准品和质控品。

4.仪器设定：打开酶标仪，选择ALT测定程序。

根据仪器的要求进行设定。

5.样本测定：将标准品和质控品与样本一起放置在仪器的试剂槽中。

按照仪器的操作指南，进行试剂的加入和反应的进行。

6.记录结果：根据仪器的操作指南，测定样本的吸光度，并记录下结果。

计算样本的ALT浓度。

7.结果分析：根据仪器的参考范围和临床经验，对ALT的测定结果进行分析和解读。

1.评估肝脏健康状况：ALT水平是评估肝细胞损伤和肝功能的重要指标之一、高ALT水平可以提示肝脏病变或损伤，如肝炎、肝硬化等。

2.监测肝炎治疗效果：ALT水平在肝炎治疗中常被用来监测治疗效果。

治疗有效时，ALT水平会下降。

3.鉴别肝脏疾病：ALT水平的变化可以用来鉴别肝脏疾病的类型。

例如，在急性肝炎中，ALT水平常常显著升高。

而在慢性肝病中，ALT水平可能轻度升高或持续在正常范围内。

ALTAST测定方法ALT（Alanine Aminotransferase）和AST（Aspartate Aminotransferase）是评估肝功能的常用酶学指标。

它们通常通过血液样本进行检测。

在本文中，我们将介绍ALT和AST的测定方法、应用以及血液样本的预处理。

首先，ALT和AST的测定方法主要是基于酶促反应原理。

当ALT和AST存在于细胞内时，它们通常以较低的浓度存在。

在细胞损伤或炎症发生时，细胞膜破裂，导致ALT和AST释放到血液中，使其浓度升高。

因此，通过测定血液中ALT和AST的浓度，可以评估肝脏的炎症程度和损伤程度。

目前，常用的ALT和AST测定方法主要有两种：荧光法和颜色反应法。

荧光法是利用荧光探针，例如NADH（尼克酸腺嘌呤二核苷酸还原型）或NADPH（尼克酸腺嘌呤二磷酸盐还原型），与ALT和AST进行反应，生成发射荧光信号。

该方法的优势是灵敏度高、特异性好，可以测定低浓度的ALT和AST。

颜色反应法是利用一些物质与ALT和AST进行反应后，形成可见光吸收的化合物。

这些化合物的光密度和ALT和AST的浓度成正比，可以通过比色法或分光光度法来测定。

在血液样本测定ALT和AST之前，还需要进行一些预处理步骤。

首先，采集血液样本时要注意避免氧化和污染。

其次，血液样本需要离心分离血清或血浆。

一般来说，血清是指凝结后，离心除去凝块，得到的液体部分；而血浆是指在血液凝结前，通过添加抗凝剂，离心除去细胞和凝块，得到的液体部分。

这是因为ALT和AST主要存在于细胞内，测定它们的浓度需要去除细胞成分的干扰。

因此，选择适当的分离方法非常重要。

最后，ALT和AST的应用非常广泛。

它们不仅用于评估肝脏疾病，还用于监测药物治疗的副作用，例如肝毒性。

此外，一些非肝脏疾病，如心肌梗死、肌肉炎等，也会导致ALT和AST的升高。

因此，ALT和AST的测定可以提供有关这些疾病的重要信息。

总结起来，ALT和AST的测定方法主要是基于酶促反应原理。

丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)测定试剂盒（丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法）
适用范围：该试剂用于体外定量测定人血清中丙氨酸氨基转移酶的活性。

1.1 包装规格：
试剂1（R1）：50ml×2 试剂2（R2）：2.5ml×2 (500测试)；
试剂1（R1）：50ml×1 试剂2（R2）：2.5ml×1 (250测试)。

1．试剂空白：用蒸馏水调零，试剂空白吸光度值≤0.15。

2．线性区间：
a)测量范围[10,200]U/L,相关系数r≥0.990；
b)[10,30）U/L,测量浓度值绝对线性偏差不超过±5U/L；[30,200]U/L,测量浓度值相对线性偏差不超过12%。

3．准确度：型式检验：回收率90%～110%
4．分析灵敏度：丙氨酸氨基转移酶47U／L时，10-13min 之间,每分钟吸光度（△A/min）≥0.03。

5. 精密度：
a)重复性：ＣＶ≤10%。

b)批间差：连续三批试剂盒测定同份血清样本，其测定值的批间差≤12%。

3种丙肝抗体检测方法特异性灵敏度比较近年来，在临床诊断中，乙型肝炎和丙型肝炎的检测越来越受到重视。

而丙型肝炎，又被称为丙肝，是由丙型肝炎病毒（HCV）引起的一种肝炎疾病。

丙肝是一种主要通过血液传播的病毒性感染，可以引起急性和慢性肝炎，甚至肝硬化和肝癌。

目前，临床上针对丙肝抗体的检测方法有很多种，其中包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光方法（IFA）和化学发光法（CLIA）等多种方法。

本文将对这三种丙肝抗体检测方法的特异性、灵敏度进行比较，以帮助临床实验室选择最适合的检测方法。

一、酶联免疫吸附试验（ELISA）特异性、灵敏度比较酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的生物化学分析方法，已被广泛应用于临床实验室中。

ELISA方法通过将待检血清中的丙肝抗体与试剂盒中的相应抗体结合，再通过酶标记进行染色检测，从而实现对丙肝抗体的检测。

在丙肝抗体的特异性方面，ELISA方法具有较高的特异性，可以有效地区分出真正的丙肝抗体阳性样本和假阳性样本。

而在灵敏度方面，ELISA方法也具有较高的敏感性，可以有效地检测出丙肝抗体的存在。

ELISA方法在丙肝抗体检测中具有较高的特异性和灵敏度。

酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光方法（IFA）、化学发光法（CLIA）三种丙肝抗体检测方法在特异性和灵敏度方面均表现出了较高的水平。

在实际应用中，不同的方法可能会存在一定差异，如操作难度、成本、所需设备和时间等。

在选择丙肝抗体检测方法时，实验室需要根据自身的情况综合考虑，选取最具实用性和经济性的方法。

在进行临床诊断时，也需综合考虑多种因素，如病情特点、病史等，综合运用多种方法，提高临床诊断的准确性和灵敏度。

希望本文对丙肝抗体检测方法的选择有所帮助，为临床实验室提供一定的参考。

丙氨酸氨基转移酶的测定
丙氨酸氨基转移酶（ALT）的测定主要通过肝功能检查进行，其参考值范围为0~40U/L。

在测定前，患者需要空腹12小时，不过不同年龄及人群参考范围没有明显差异。

当丙氨酸氨基转移酶数值偏高时，通常提示肝脏受到损害。

这可能是由多种原因导致的，如不良饮食习惯、过度劳累、药物因素等。

如果同时伴随肝区不适、全身乏力、食欲下降等情况，可能存在病毒性肝炎、脂肪肝、肝硬化等疾病。

丙氨酸氨基转移酶（ALT）的测定原理是催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应。

具体来说，ALT催化丙氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸上，生成丙酮酸和NADH，然后NADH在LDH的催化下生成NAD+。

在上述偶联反应中，NADPH的氧化速率与样本中酶活性呈正比，因此可以通过检测NADPH的氧化速率来确定ALT的活性。

总的来说，丙氨酸氨基转移酶的测定对于评估肝脏功能具有重要意义。

如果检测到肝脏功能受损，建议前往医院就诊，由专业医生进行评估和治疗。

三种丙肝抗体检测方法的比较摘要】目的：通过三种丙肝抗体检测方法的特异性和灵敏度比较，寻找特异性和灵敏度高的筛查的方法，以减少临床的漏诊和误诊。

方法：采用金标法，酶联法，电化学发光法检测79例临床标本，通过检测结果比较方法学的差异。

结果：金标法特异性为95.5%灵敏度为93.6%，酶联法特异性为97.0%灵敏度为97.5%，电化学发光法特异性为98.5%灵敏度为100%，结论：电化学发光检测丙肝抗体的特异性、灵敏度明显高于金标法和酶联法，可作为体检、临床输血、术前筛查丙肝抗体的筛查。

【关键词】丙肝抗体；a金标法；酶联法；电化学发光法【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）22-0193-02丙型病毒性肝炎是由丙型肝炎病毒引起的一种主要经血液传播的疾病，50%～85%的HCV感染者会进展为慢性肝炎。

慢性感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞肝癌。

对患者的健康和生命产生危害。

我国(HCV)感染率在0.9%～5.1%。

[1]HCV感染者自然阴转率低，治疗效果差，病程迁延，未经治疗的丙肝慢性硬化率为50%～85%；肝癌发生率1%～5%。

[2]早期诊断和治疗尤为重要。

所以丙肝抗体筛查试剂要具有高度的灵敏性和特异性，以减少误诊和漏诊。

丙肝的诊断目前主要靠实验室抗HCV抗体检测，HCV-RNA诊断。

HCV-RNA需要特殊实验室所以受到很大限制，HCV-RNA定量有较高的特异性和灵敏度，但其标准化和高成本问题尚待解决[3]，不宜作为常规筛查；抗-HCV抗体检测因其操作简单，易于标准化，成为主要的实验室检测方法，目前实验室检测抗-HCV抗体的方法主要有；胶体金免疫层析法(GICA）、酶联法（ELISA)、电化学发光法(ECLI)、化学发光(CL IA）检测法。

笔者应用胶体金免疫层析法、酶联法、电化学发光法等方法对丙肝抗体进行了比较，结果报告如下：1.材料方法：1.1 检测对象标本来源：我院2012年10月～2013年12月间4126例门诊及住院患者,抗-HCV阳性标本79例，男性37例，年龄26～80岁，年龄中位数42.3岁，女性42例，年龄27～76岁，年龄中位数52岁，作为阳性组。

3种丙肝抗体检测方法特异性灵敏度比较丙肝是一种存在于人体内的病毒，可以引起肝脏炎症和疾病。

丙肝抗体检测是一项常见的临床检查，可用于诊断和监测丙肝感染。

目前有三种主要的丙肝抗体检测方法，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光免疫测定法（CLIA）和免疫层析检测（ICA）。

本文将比较这三种方法的特异性和灵敏度。

一、ELISAELISA是一种广泛应用于临床诊断的抗体检测方法。

该方法可以通过测量血清中丙肝病毒抗体的反应来诊断患者是否感染了该病毒。

这种方法具有以下优点：1. 特异性好ELISA方法在临床应用中，具有灵敏的特异性。

可以检测人体内是否存在丙肝抗体，且不会产生假阳性结果。

因此，该方法可以靠谱的诊断患者是否感染丙肝病毒。

2. 灵敏度高此外，ELISA方法还具有高灵敏度。

在临床实践中，能有效的诊断出低浓度的丙肝抗体，能够有效的进行丙肝感染的早期诊断。

虽然ELISA方法有许多优点，但它也存在一些缺点。

该方法的主要缺点是操作比较复杂，需要使用较多的仪器，费用较高。

ELISA的结果还需要进行过一段时间的反应，因此可能存在一定程度上的误差。

化学发光免疫测定法（CLIA）是一种高灵敏度的临床检测方法。

该方法利用发光底物的发光性质，对血清中的丙肝抗体进行检测。

CLIA的优缺点如下：CLIA和ELISA一样，具有高度的特异性。

经过多次实验，CLIA检测丙肝抗体结果显示其特异性和性能均达到了标准。

CLIA通常被认为比ELISA更灵敏，能够在较小的样本中检测到丙肝抗体，因此能够更早地检测出患者是否感染了丙肝病毒。

CLIA的缺点是，需要一定的仪器和技术，但由于其快速、灵敏和准确的特点，已经成为很多临床实验室的首选方法。

三、ICA1. 简单快捷ICA是一种非常简单且快速的临床检测方法。

试剂盒内本身存在丙肝抗体，因此不需要经过复杂的仪器操作，即可进行检测。

并且通常不需要昂贵的仪器。

2. 使用范围窄虽然ICA的操作简单，但其结果不如ELISA和CLIA精准，存在的误差较大。

ALT检测操作规程ALT（丙氨酸氨基转移酶）是一种存在于细胞质中的酶，广泛分布于人体包括肝脏、心脏、肾脏等组织中。

ALT是肝脏功能的重要指标之一，通过测量血液中ALT的活性，可以评估肝脏功能的健康程度。

本文将介绍ALT（丙氨酸氨基转移酶）检测操作规程（速率法）。

一、实验器材和试剂准备1.乙醚：用于准备昏迷鼠模型；2.丙酮：用于制备丙酮胺溶液；3.氯化二乙酸：用于制备氯化二乙酰胺试剂；4.丙酮胺：用于制备丙酮胺溶液；5.磷酸氢二钾溶液：用于制备缓冲液；6.氧化丙酮胺：用于制备氧化丙酮胺试剂；7.pH7.0缓冲液：用于制备反应体系；8.4-氨基硫代洪美酸：用于停止反应；9.甲醛：用于制备甲醛溶液；10.维生素C溶液：用于制备维生素C溶液；11.肝组织磷酸化酰胺：用于制备肝组织提取液；12.酶提取液：用于提取ALT酶。

二、实验步骤1.制备ALT酶提取物：（1）取新鲜动物（小鼠）肝脏组织15g，加入磷酸缓冲液5倍的体积；（2）放入冷冻机中，-20℃下保存12h；（3）取出，加入万能匀浆器中，对肝脏组织进行研磨；（4）将研磨后的肝脏组织加入毛细管离心管中，进行离心，1800r/min 离心10 min；（5）将提取液转入新的毛细管离心管中，再次离心，3000r/min 离心10 min；（6）将上清液收集至离心管中，取出备用。

2.制备标准曲线：（1）取6个试管，分别标记为A、B、C、D、E、F，一个空白试管用作对照；（2）分别加入0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml的ALT 酶提取液；（3）加入pH 7.0缓冲液，使总体积为2.0ml；（4）每个试管中加入0.2ml的氧化丙酮胺试剂；（5）按顺序加入2ml、0.2ml、2ml的维生素C溶液、氧化丙酮胺试剂和ALT提取液；（6）加入4-氨基硫代洪美酸停止反应，并立即搅拌均匀；（7）用甲醛溶液处理样品；（8）分别在0.1、0.2、0.3、0.4及0.5的浓度范围内，测定样品的吸光度。

丙氨酸氨基转移酶试剂盒（丙氨酸底物法）标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。

2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。

3 适用范围：本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中丙氨酸氨基转移酶（ALT）的活力。

4 检验方法本试剂反应原理采用国际临床化学联合会（IFCC）推荐的方法。

5 检验原理在丙氨酸氨基转移酶的作用下，L-丙氨酸与α-酮戊二酸反应，生成丙酮酸和L-谷氨酸。

丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸，同时NADH 被氧化为NAD＋，使340nm处的光吸收值下降，通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可以测定丙氨酸氨基转移酶活力。

样品中内源性丙酮酸的干扰可由试剂中LDH在反应延迟时间内消除，不会干扰测定。

ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸LDH丙酮酸+NADH L-乳酸+NAD+6 检验标本要求6.1 样本为血清。

6.2 不得使用溶血或被污染的样本。

6.3 样本在2℃~8℃条件下可保存7天、室温条件下可保存1天。

7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司丙氨酸氨基转移酶试剂盒7.2试剂组成7.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1 试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为18个月。

7.3.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天，试剂不可冷冻。

7.3.3 反应液在2℃~8℃可稳定30天。

7.4试剂的变质指示：若试剂混浊，或在340 nm处试剂空白吸光度值低于1.000A 时，不能使用。

8 实验仪器及性能指标8.1实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1 空白吸光度：A≥1.000。

8.2.2 空白吸光度变化率：︱△A︱/min≤0.002/min。

8.2.3 分析灵敏度：测试1U/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）＜-0.0001。

8.2.4 线性范围：4U/L～1000U/L；线性相关系数r≥0.9900；[4，200]U/L范围内，线性绝对偏差应不超过±40U/L；（200，1000]范围内，线性相对偏差不超过±15％。