小鼠组织中过氧化氢酶的活性与年龄的关系

实验33 过氧化氢酶的活性测定目的意义过氧化氢酶（catalase ，CAT ）普遍存在于植物所有的组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定联系，故常加以测定。

本实验的目的在于掌握过氧化氢酶活性测定的方法、原理及操作技术。

一、高锰酸钾滴定法（一）原理过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂，因此，可根据H 2O 2的消耗量或O 2的生成量测定该酶活力大小。

在反应系统中加入一定量（反应过量）的H 2O 2溶液，经酶促反应后，用标准KMnO 4溶液（在酸性条件下）滴定多余的H 2O 2，即可求出消耗的H 2O 2的量。

5H 2O 2 + 2KMn04 + 4H 2SO 4 ──→ 502 + 2KHS04 + 8H 20 + 2MnS04（二）实验材料、仪器与试剂1. 实验材料：小麦叶片。

2. 仪器：恒温水浴、研钵、三角瓶、酸式滴定管、容量瓶等。

3. 试剂：（1）10％ H 2SO 4（2）0.2mol ·L -1 pH 7.8磷酸缓冲液（3）0.lmol ·L -1 KMnO 4标准液：称取KMnO 4（AR ）3.1605g ，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL ，再用0.lmol ·L -1草酸溶液标定。

（4）0.lmol ·L -1 H 2O 2：市售30％ H 2O 2大约等于17.6 mol ·L -1，取30％ H 2O 2溶液5.68mL ，稀释至1000mL ，用标准0.l mol ·L -1 KMnO 4溶液（在酸性条件下）进行标定。

（5）0.lmol ·L -1草酸：称取优级纯H 2C 2O 4·2H 2O 12.607g ，用蒸馏水溶解后，定容至1000mL 。

（三）操作步骤1. 酶液提取：称取小麦叶片2.5g 加入pH 7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25mL 容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容至刻度，4000rpm 离心15min ，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。

过氧化氢酶的活性测定——高锰酸钾滴定法（滴定法、比色法）【原理】过氧化氢酶（CAT）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

R(Fe+2)+H2O2==R(Fe+3+OH－)R(Fe+3OH－)2+ H2O2==R(Fe+2)2+2H2O+O2据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。

在反应系统中加入一定量（反应过量）的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H2O2 5 H2O2+2 KMnO4+4H2SO4-------- 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4即可求出消耗的H2O2的量。

【仪器和用具】研钵；三角瓶50ml×4；酸式滴定管（10ml）；恒温水浴；容量瓶25ml×1。

【试剂】10% H2SO4；0.2mol/L磷酸缓冲液pH7.8；0.1mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液标定；0.1mol/L H2O2：市售30% H2O2大约等于17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/ KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；0.1mol/L草酸：称取优级纯H2C2O4•2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。

【方法】1.酶液提取取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。

2.取50ml三角瓶4个（两个测定两个对照），测定瓶中加入酶液2.5ml，对照瓶中加入高温灭活酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10% H2SO4 2.5ml。

过氧化氢酶(CAT)活性测定高锰酸钾滴定法(李合生．植物生理生化实验原理和技术[M]．北京：高等教育出版社．2000．165-167)一、原理过氧化氢酶(catalase，CA T)普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，它属于血红蛋白酶，含有铁，能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

22R(Fe OH3+－) R(Fe2+2 2)2+2 H O2＋O2因此，可以根据H2O2的消耗量或者O2的生成量测定该酶活力的大小。

在该体系中加入一定量(反应过量)的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的H2O2，即可求出消耗的H2O2的量。

5H2O2+2KMnO4+4H2SO45O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4二、材料、仪器设备及试剂(一)材料植物器官(花瓣、叶片等)(二)仪器设备冰箱、离心机、微量加样器(1ml、20μl、100μl)、移液管、精密电子天平、试管、研钵、剪刀、镊子、三角瓶、恒温水浴、容量瓶、酸式滴定管(三)试剂(1)10% H2SO4(2)0.2mol/L PH7.8磷酸缓冲液(3)0.1mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO4(AR)3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，再用0.1mol/L草酸溶液标定(4) 0.1mol/L H2O2：取30% H2O2(大约等于17.6 mol/L)5.68mL，稀释至1000mL，用0.1mol/L高锰酸钾标准液(在酸性条件下)进行标定(5) 0.1mol/L草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O12.607g，用蒸馏水溶解后，定溶1000mL。

三、试验步骤(一)酶液提取取植物材料2.5g，加入PH7.8的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至25mL容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定溶，4000r/min离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。

一、实验目的1. 了解过氧化氢酶的作用和特性。

2. 掌握过氧化氢酶活力的测定原理和方法。

3. 通过实验，验证过氧化氢酶在催化过氧化氢分解过程中的活力。

二、实验原理过氧化氢酶（Catalase，简称CAT）是一种广泛存在于生物体内的酶，其主要功能是催化过氧化氢（H2O2）分解为水（H2O）和氧气（O2），从而降低过氧化氢对生物体的毒害作用。

过氧化氢酶活力的测定通常通过测量在一定时间内过氧化氢的分解量或氧气的生成量来进行。

本实验采用碘量法测定过氧化氢酶活力。

碘量法的基本原理是：在一定条件下，过氧化氢酶将过氧化氢分解，生成氧气，使溶液中的碘离子（I-）氧化成碘单质（I2）。

然后，用硫代硫酸钠滴定溶液中的碘单质，根据消耗的硫代硫酸钠的量计算出过氧化氢的分解量，从而推算出过氧化氢酶的活力。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如青菜、萝卜叶等）、蒸馏水、碘液、硫代硫酸钠溶液、盐酸、氢氧化钠溶液、0.1 mol/L过氧化氢溶液等。

2. 实验仪器：分析天平、研钵、漏斗、容量瓶、移液管、滴定管、锥形瓶、水浴锅、计时器等。

四、实验步骤1. 酶液提取：- 称取0.5 g新鲜植物叶片，置于研钵中，加入2 mL pH 7.0磷酸缓冲液和少量石英砂，研磨成匀浆。

- 将匀浆转入25 mL容量瓶中，用磷酸缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容至刻度。

- 将容量瓶置于4℃冰箱中静置10 min，取上清液即为过氧化氢酶粗提液。

2. 测定过氧化氢酶活力：- 取4个锥形瓶，分别编号为1、2、3、4。

- 向1、2、3号锥形瓶中分别加入0.5 mL过氧化氢酶粗提液，向4号锥形瓶中加入0.5 mL蒸馏水。

- 向各锥形瓶中分别加入1 mL 0.1 mol/L过氧化氢溶液，立即开始计时。

- 当加入0.1 mL 1 mol/L盐酸时，停止计时，此时溶液中剩余的过氧化氢量即为酶促反应所分解的过氧化氢量。

- 向各锥形瓶中加入1 mL碘液，充分振荡，静置3 min。

过氧化氢酶结构
过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶类蛋白质。

它在生物体内广泛存在，并参与多种生理反应。

以下是一份过氧化氢酶的结构描述。

过氧化氢酶以四级结构（原始结构、亚单位、二聚体和四聚体）存在。

每个酶分子由四个亚单位组成，每个亚单位都包含一个催化中心和一个血红素基团。

催化中心是一个铁原子，通过与一个氧原子形成坐标键来催化过氧化氢的分解反应。

血红素基团负责电子传递，将电子从酶的一个区域传递到另一个区域，从而促进反应。

整个过氧化氢酶分子呈球形结构，直径约为60 Å。

四个亚单位相互结合形成一个中央管道，过氧化氢沿着管道进入催化中心。

每个亚单位周围还有一片薄膜，起到保护酶的作用。

过氧化氢酶是一种高度稳定的酶，能够在酸碱和高温环境中保持其催化活性。

这种稳定性使得过氧化氢酶在许多工业应用中具有广泛的用途。

过氧化氢酶的结构在生物体内起着重要的催化作用，通过分解过氧化氢保护细胞免受氧化损伤。

其结构特点使其具有广泛的应用前景，可以在医学、生物技术等领域发挥重要作用。

过氧化氢酶活性测定实验报告实验目的，通过测定过氧化氢酶活性，探究不同条件下过氧化氢酶的活性变化规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供实验数据支持。

实验原理，过氧化氢酶是一种重要的酶类，在生物体内起着重要的氧化还原作用。

本实验采用比色法测定过氧化氢酶活性，其原理是过氧化氢酶催化过氧化氢分解成水和氧气，过氧化氢酶活性与生成的氧气量成正比。

实验材料与方法，实验中所需材料包括过氧化氢酶、过氧化氢、磷酸盐缓冲液、吡啶甲酸钠盐等。

首先，按照一定比例将过氧化氢酶和过氧化氢混合，然后加入磷酸盐缓冲液和吡啶甲酸钠盐，使混合液在一定温度下进行反应。

接着，通过比色法测定生成的氧气量，进而计算出过氧化氢酶的活性。

实验结果与分析，在不同温度、pH值、底物浓度等条件下，测得过氧化氢酶的活性数据。

通过对比分析不同条件下的活性数据，发现过氧化氢酶在不同条件下呈现出不同的活性变化规律。

在温度较低时，过氧化氢酶活性较低；在酸性环境下，过氧化氢酶活性受到抑制；随着底物浓度的增加，过氧化氢酶活性呈现出逐渐增加的趋势。

结论与讨论，通过本实验，我们得出了过氧化氢酶活性与温度、pH值、底物浓度等因素之间的关系。

这些结果对于深入研究过氧化氢酶的功能机制，以及在生物医学、生物工程等领域的应用具有一定的指导意义。

同时，我们也发现过氧化氢酶在不同条件下表现出不同的活性变化规律，这为进一步探究过氧化氢酶的调控机制提供了重要的实验数据支持。

综上所述，本实验通过测定过氧化氢酶活性，揭示了过氧化氢酶在不同条件下的活性变化规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供了实验数据支持。

希望本实验结果能够为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。

大鼠谷胱甘肽过氧化物酶正常范围大鼠谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GPx）是一种重要的抗氧化酶，具有保护细胞免受氧化应激损伤的重要功能。

它能够将有害的过氧化物质转化为无害的代谢产物，从而维护细胞内氧化还原平衡。

该酶的正常范围可作为综合评估大鼠健康状况的重要指标。

一般来说，正常大鼠的GPx活性应在一定的范围内。

实验研究表明，GPx活性与大鼠的年龄、性别、营养状况等因素相关。

首先，GPx活性随着大鼠的年龄增长而发生变化。

在幼年阶段，大鼠体内GPx活性较低。

随着成长，GPx活性逐渐增加，达到成年期的稳定水平。

然而，在老年阶段，GPx活性又会逐渐降低。

因此，根据大鼠的年龄，我们可以了解其GPx活性是否处于正常范围内。

其次，性别也会对大鼠GPx活性产生一定的影响。

一项研究发现，雄性大鼠的GPx活性明显高于雌性大鼠。

这可能与雄性大鼠对氧化应激的抵抗能力更强有关。

因此，在评估大鼠GPx活性时，应考虑到性别差异。

此外，营养状况也会对大鼠GPx活性产生影响。

一项研究发现，摄入富含谷胱甘肽的食物可以提高大鼠体内GPx活性。

这表明，适当的营养摄入对维持GPx活性的正常范围非常重要。

总结起来，大鼠GPx活性的正常范围受到多种因素的影响，包括年龄、性别以及营养状况等。

我们可以通过测量大鼠的GPx活性来评估其细胞内氧化还原平衡情况。

如果GPx活性超出正常范围，则可能存在氧化应激损伤等问题。

因此，掌握大鼠GPx活性的正常范围对于研究大鼠健康状况具有指导意义。

在实际应用中，我们可以通过特定的实验方法检测大鼠GPx活性，并结合其他指标综合评估大鼠的氧化应激状况。

这为大鼠健康管理和疾病研究提供了重要的参考依据。

过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：过氧化氢酶活性测定实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。

一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。

在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。

即可求出消耗的H2O2的量。

二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。

（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5.0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。

三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。

（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。

竭诚为您提供优质文档/双击可除过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：实验35过氧化氢酶的活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。

h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。

过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。

因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。

本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。

一、过氧化氢含量的测定【原理】h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比色测定。

在一定范围内，其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。

【试剂】100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。

【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。

待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm波长下比色。

2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视h2o2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。

(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。

沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。

(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。