从血培养中分离到一株螺杆菌属新种
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和抗体治疗，能防止ＳＴＥＣ感染猪发生全身性并发 症。保护性取决于使用抗体的效价和治疗时间。实 验发现感染后２ ｄ，用低剂量的抗体即能产生保护 Ｉ土；但在感染后４ ｄ，只有用最高剂量的抗体才具有 保护作用。除浮肿病外，ＳＴＥＣ感染猪后常常只引起 亚临床型浮肿病，显微镜下以血管坏死为特征而无 任何临床症状。实验也发现，用高剂量抗体治疗可 减少亚临床型感染猪的血管坏死发生率及病灶范 围。上述结果提示，ＳＴＥＣ感染人体后，被动免疫法 对阻止ＨＵＳ的产生具有一定的保护作用。 （李 芸李 懿摘 胡福泉校） ０４３毒力基因ｓｔｘ１、ｓｔｘ２、ｅａｅ、ｅｈｘＡ和自凝粘附素的 多重聚合酶链反应法直接检测和鉴定产志贺 毒素大肠埃希菌［英］Ｐａｔｏｎ ＡＷ…／／Ｊ ＣｌｉＩｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１．一２００２，４０（１）．－２７１—２７４ 产志贺毒素大肠埃希菌（Ｓｈｉｇａｔｏｘｇｅｎｉｃ Ｅｓ— ｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ，ＳＴＥＣ）是人类胃肠道疾病的重要病原， 其感染可导致危及生命的诸如溶血性尿毒综合征 （ＨＵＳ）等疾病。ＳＴＥＣ成员多变，许多Ｏ：Ｈ血清型别 与人类疾病有关，但是流行病学资料证实，绝大部分 的严重感染仅与部分ＳＴＥＣ亚群（如０１５７：Ｈ７）有关。 ＳＴＥＣ可产生一种或两种（即全部）主要志贺毒素即 ｓｔｘ１和ｓｔｘ２，后者的产生使ＨＵＳ的危险性大增。另 外，被认为对人类有强毒力的ＳＴＥＣ亚群可对肠黏 膜产生粘附和细胞消除损害。此毒力 有编码于致 病性岛的性质，被命名为肠细胞消除表位（１ｏｃｕｓ ｆｏｒ ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｅ ｅｆｆａｃｅｍｅｎｔ，ＬＥＥ）。ＬＥＥ编码Ⅲ型分泌系统 和大肠埃希菌（简称大肠杆菌）分泌蛋白，能释放效 应分子，作用于宿主细胞，破坏宿主细胞骨架。ＬＥＥ 也携带ｅａｅ基因，编码一种外膜蛋白（亲和素），与菌 体对上皮细胞的密切亲和有关。ｅａｅ已经作为方便 的、ＬＥＥ阳性的ＳＴＥＣ诊断标志物使用。但是ｅａｅ的 存在与对人类的毒力并无绝对关系，一些偶发的严 重ＳＴＥＣ疾病，包括ＨＵＳ及其偶见的暴发流行是由 ＬＥＥ阴性株引起。 最近Ｐａｔｏｎ等阐述了一种称为产志贺毒素大肠 埃希菌自凝粘附素（ＳＴＥＣ ａｕｔｏａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｎｇ ａｄｈｅｓｉｎ， ｓａａ）的基因，它来自一株ＬＥＥ阴性、血清型Ｏ１１３： Ｈ２１的ＳＴＥＣ，１９９８年在南澳大利亚Ａｄｅｌａｉｄｅ市引起 ＨＵＳ暴发。这一基因编码一种新的外膜蛋白，有自 凝粘附素样作用，该基因也位于一群ＬＥＥ阴性ＳＴＥＣ 的大毒力质粒上，克隆的ｓａａ导人大肠杆菌Ｋ—ｌ２株 可赋予其半定位粘附的表型。在Ｐａｔｏｎ等收集的７ 例ＨＵＳ病例中，６例为ＬＥＥ阴性ＳＴＥＣ引起。因此 ｓａａ有可能是一个对人类有毒力的ＬＥＥ阴性ＳＴＥＣ 株的重要标志。据此，Ｐａｔｏｎ等设计了基于ｓａａ基因 的引物５ 一ＣＧＴＧＡＴＧＡＡＣＡＧＧＣＴＡＴｒＧＣ一３ （ＳＡＡＤＦ）， ５ 一ＡＴＧＧＡＣＡＷ，ＣＣＴＧＴＧＧＣＡＡＣ一３ （ＳＡＡＤＲ），此对弓Ｉ 物扩增的ｓａａ基因为ｌｌ９ ｂｐ片段，该段序列在各种 ＳＴＥＣ中高度保守。用Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交法证实聚合酶 链反应（ＰＣＲ）ｓａａ阳性的ｌ９株ＳＴＥＣ经上述引物，扩 增，均有强阳性１１９ ｂｐ产物带；１３株阴性株均无此 条带。 将ＳＳＡＤＦ和ＳＡＡＤＲ与ｓｔｘ１、ｓｔｘ２、ｅａｅ和ｅｈｘＡ引 物混合后，用ＰＣＲ检测特征性ＳＴＥＣ株的染色体提 取物，５种特征性ＳＴＥＣ ＰＣＲ产物条带都与预期结果 相吻合，显示５种引物及放大过程中互无干扰。由 此看来，ｓａａ特异性引物与其他４种毒力基因（ｓｔｘ 、 ｓｔｘ２、ｅａｅ和ｅｈｘＡ）的引物相结合，可形成多重ＰＣＲ，各 产物据相对分子质量大小（１１９、１８０、２５５、３８４和 ５３４ｂｐ）￣容易用琼脂糖凝胶电泳区分。该法敏感性 好。在１０６倍稀释的样本（相当于ＳＴＥＣ占０．０００ １％）中仍然可以出现阳性结果，所以是分析各种 ＳＴＥＣ，特别是ＬＥＥ阴性株极有价值的快速分析方 法。 （高 鹏摘 张卓然校）
０４４从血培养中分离到一株螺杆菌属新种［英］Ｔｅｅ ｗ…／／Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１．－２０００，３８（１０）．・３８４６ —３８４８ 作者从一个ｌ４个月龄的菌血症患儿，采用 ＢＡＣＴＥＣ血培养系统连续两次分离到１株革兰阴性 螺形菌，类似弯曲菌属细菌。血培养分离株在含有 ６％羊血的琼脂平板、巧克力平板和弯曲菌属选择培 养基中，３７％时生长良好，但４２℃时不能生长，２５℃ 时生长不良（微需氧，培养３ｄ）。在混合气体（１０％ Ｈ２和６％ＣＯ２的Ｎ２）中生长情况更好。菌落呈针尖 状、灰白色，在血琼脂平板数天后出现溶血现象。生 化试验显示氧化酶和过氧化氢酶阳性，但硝酸还原 试验、马尿酸钠试验和尿素水解试验为阴性。分离 株对萘啶酸具有抗性，而对头孢噻吩敏感。分离株 已被ＡＴＣＣ收录，并命名为ＡＴＣＣ７００９５６。 提取和纯化该菌ＤＮＡ，扩增１６Ｓ ｒＲＮＡ。扩增后 的基因（约１５００核苷酸）用末端和内部引物直接测 序，共有１ ８２５个核苷酸，并存在富含ＡＴ的３５３核 苷酸插入序列（ＩＶＳ）。在以１６Ｓ ｒＲＮＡ基因序列重建 的系统进化树中，分离株应为螺杆菌属分支。它与 ４３
维普资讯 http://www.cqvip.com ｔｔ．ｆｅｒｍｅｌｌｉａｅ的部分序列最接近，但至少在３２个碱 基取代位置和插人序列上有差别。这是最保守的估 计，因为Ｈ．ｆｅｎｎｅｌｌｉａｅ序列中，有４２个未确定的核苷 酸，包括核苷酸数量不确定的一区域。其次与ｔｔｅｌｉ— ｃｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．Ｍａｉｎｚ的１６Ｓ ｒＲＮＡ序列最接近，但其同源 性低于９７％。Ｈ．Ｆｅｎｎｅｌｌｉａｅ和Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．Ｍａｉｎｚ 都不含有插人序列。按Ｄｅｖｅｒｅｕｘ和Ｓｒａｃｋｅｂｒａｎｄｔ等 的建议，两种生物１６Ｓ ｒＲＮＡ的同源性为９７％或更 低，说明它们属于不同的种。因此，作者认为所分离 到的细菌在分类学上应为螺杆菌属的一个新种。 根据相关的疾病类型，可以将螺杆菌属分为３ 组。第１组包括胃相关性螺杆菌，如幽门螺杆菌和 Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｉｉ，它们能引起人类胃肠道疾病。第２组 包括从雪貂、鼠、狗、猫、豹、猴或其他哺乳动物中分 离到的螺杆菌属细菌，它们能引起各自宿主的疾病。 第３组包括引起人体肠道和全身疾病的螺杆属细 菌，如Ｈ．ｃｉｎａｅｄｉ、Ｈ．ｆｅｎｎｅｌｌｉａｅ、Ｈ．ｗｅｓｔｍｅａｄｉｉ、Ｈ．ｒａｐ． ｐｉｎｉ、Ｈ．ｓｐ．Ｍａｉｎｚ、Ｈ．ｐｕｌｌｏｒｕｍ、Ｈ．ｓｐ．ＣＬ０３；还有 ＧｅｎＢａｎｋ中大量未命名的种，如两株从艾滋病病人 中分离到的菌和作者分离到的ＡＴＣＣ７００９５６株。 （吴凯宇摘郭晓奎校） ０４５ 幽门螺杆菌诱导的肠上皮细胞凋亡依赖于 Ｃａｇ致病岛的表达［英］Ｌｅ’Ｎｅｇｒａｔｅ Ｇ…／／Ｉｎ． ｆｅｅｔ ＩＩｎｎｌｕｎ．－２００１，６９（８）．－５００１—５ＯＯ９ 幽门螺杆菌（Ｈｐ）是胃炎、胃及十二指肠溃疡、 以及胃腺癌的主要致病因子，Ｃａｇ致病岛、尿素酶、 空泡毒素ＶａｃＡ等毒力因子均可促进胃上皮细胞损 伤，但Ｈｐ与上皮细胞膜的交互作用如何促进细胞 凋亡仍不十分清楚。为此，作者采用不同Ｈｐ株与 肠上皮细胞（ＩＥＣ）Ｔ８４共育。由于１＂８４细胞同时表 达Ｆａｓ和ＦａｓＬ，而胃上皮细胞只表达Ｆａｓ，且在ｃａｓ— ｐａｓｅ途径的激活和ＩＬ－８分泌方面，＂Ｉ＂８４细胞与胃上 皮细胞相似，因此该细胞可作为研究Ｈｐ致凋亡机 制的模型。 通过电镜检测发现，感染ＶａｃＡ ／Ｃａｇ ＰＡＩ 的 １＂８４细胞，其超微结构发生凋亡改变；感染ｃａｇＥ同基 因突变株者，其凋亡表现不甚明显；而感染ＶａｃＡ一／ Ｃａｇ ＰＡＩ一株者已很少发生凋亡改变。流式细胞仪检 测证实了１＂８４细胞与Ｈｐ共育后发生的凋亡改变。 分别用ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ．ＦＩＴＣ和ＤｉＯＣ６染色细胞，细胞凋亡 率随时间延长而增长，但Ｆａｓ受体表达上调不明显， 提示凋亡的诱导与Ｆａｓ的表达升高并无显著关系。 然而，与抗Ｆａｓ抗体共育可抑制Ｈｐ的致凋亡效应， ４４ 提示Ｆａｓ受体途径参与了对细胞凋亡的诱导。以 ＤＥＶＤ．ｐＮＡ为底物，用连续比色法测定ｃａｓｐａｓｅ活性 发现，ＶａｃＡ ／Ｃａｇ ＰＡＩ Ｈｐ株通过Ｆａｓ依赖途径强烈 诱导ｃａｓｐａｓｅ一３活化，ＣａｇＥ突变株诱导能力较弱，而 ＶａｃＡ。／Ｃａｇ ＰＡＩ一株不能诱导ｃａｓｐａｓｅ．３活化。提示， ＶａｃＡ与Ｃａｇ ＰＡＩ的共同表达对于细胞凋亡的发生起 着关键作用。ＣａｇＥ基因产物亦在Ｔ８４细胞凋亡的 过程中发挥重要作用，是Ｈｐ不依赖ＰＭＮ迁徒而发 挥直接致凋亡效应的一个重要因素。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹 法检测发现，ＶａｃＡ ／Ｃａｇ ＰＡＩ Ｈｐ株与ＩＥＣ共育后， ｐｒｏｅａｓｐａｓｅ－３水平降低，与ｃａｓｐａｓｅ．３的活化相一致； ｃａｓｐａｓｅ一３底物ＰＡＲＰ被切割；ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ．８的量显著 减少，提示这一上游ｃａｓｐａｓｅ亦被活化；在早期丝裂 原激活的蛋白（ＭＡＰ）激酶中，ＥＲＫ１／２活化显著，磷 酸化ｐ３８表达量增高，ｐ３８ＭＡＰ激酶和ＪＮＫ激酶激 活。ＥＲＫ１／２的迅速激活与菌株的ＶａｃＡ／ｃａｇ ＰＡＩ状 态无关，说明ＩＥＣ中ＥＲＫ１／２激酶的活化并不需要 ＶａｃＡ与Ｃａｇ ＰＡＩ基因产物的表达，所以，这两种基因 并不参与Ｈｐ诱导凋亡的调控过程。为了确认Ｈｐ 介导的肠上皮细胞死亡是否需要ｐ３８和ＪＮＫ的活 化，用应激活化蛋白（ＳＡＰ）激酶抑制物（抑制ｐ３８和 ＪＮＫ）于ＶａｃＡ ／Ｃａｇ ＰＡＩ Ｈｐ株感染前处理细胞，发 现，ｃａｓｐａｓｅ一３的活化明显减低，说明ＳＡＰ激酶（ｐ３８ 和ＪＮＫ）参与了Ｈｐ感染诱导细胞凋亡的调节。 综上所述，本研究表明Ｈｐ通过Ｆａｓ依赖途径诱 发肠上皮细胞凋亡，并依赖于Ｃａｇ致病岛的表达。 （袁建平摘童善庆校）
Ｏ４６应用两种酶免疫分析法和聚合酶链反应法检 测患儿粪便中的幽门螺杆菌［英］Ｍａｋｒｉｓｔａｔｈｉｓ Ａ…／／Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１．－２０Ｏ０，３８【１０）．－３１７０— ３７１４ 幽门螺杆菌（Ｈｐ）可以引起胃炎和消化性溃疡， 且与胃部恶性肿瘤相关。近年来非侵袭性诊断试验 对儿童患者特别是用于治疗后随访尤为重要。已经 成熟的方法有血清试验和Ｂ Ｃ尿呼吸试验（ Ｃ ＵＢＴ）。但是血清试验不适用于治疗后早期随访，而 ＢＣ ＵＢＴ不宜用于婴儿及有精神障碍的患者。 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法和抗原酶免疫分析 （ＥＩＡ：Ｐｒｅｍｉｅｒ Ｐｌａｔｉｎｕｍ ＨｐＳＡ）检测粪便标本均可得到 准确的结果，但随访检测易出现假阳性。本文作者 应用一种新的抗原ＥＩＡ（Ｆｅｍｔｏｌａｂ Ｈｐ），即应用单克 隆抗体检测Ｈｐ抗原。作者评估了它的诊断意义， 并对两种ＥＩＡ和ＰＣＲ法是否适用于治疗后随访检
