酵母菌的培养与分离

酵母菌的纯培养实验原理酵母菌是一种单细胞真核生物，广泛存在于自然界中，常见于土壤、果皮和发酵食品等环境中。

酵母菌的纯培养实验是一种常用的实验手段，通过这种实验可以得到纯净的酵母菌培养物，为后续的研究提供了可靠的基础。

酵母菌的纯培养实验主要包括以下几个步骤：酵母菌的分离、酵母菌的培养和酵母菌的纯化。

酵母菌的分离是实验的第一步。

我们可以从自然界中采集到含有酵母菌的样品，比如果皮、土壤等。

将样品放入培养基中，利用其富含的养分和适宜的温度等条件，促使酵母菌开始生长。

然后，通过显微镜观察，可以看到培养基中存在着许多酵母菌细胞。

选取单个酵母菌细胞，将其转移到另一个培养基中，再次进行培养。

经过多次的分离，我们可以得到纯净的酵母菌培养物。

酵母菌的培养是纯培养实验的关键步骤。

酵母菌的培养基一般由碳源、氮源、矿物质和维生素等组成，提供了酵母菌生长所需的养分。

培养基的配制需要根据酵母菌的需求来确定，以确保酵母菌能够正常生长和繁殖。

在培养过程中，温度和氧气供应也是需要注意的因素。

一般情况下，酵母菌的最适生长温度为28-30摄氏度，过高或过低的温度都会对其生长产生不利影响。

此外，酵母菌对氧气的需求较高，需要提供充足的氧气供应。

酵母菌的纯化是实验的最后一步。

在酵母菌培养物中，可能会存在其他微生物的杂菌。

为了获得纯净的酵母菌培养物，我们可以采用多种方法，如温度选择法、抗生素选择法和营养选择法等。

这些方法可以通过调节培养基中的温度、添加抗生素或改变培养基中的营养成分，来选择性地培养酵母菌，排除其他微生物的干扰。

通过以上的步骤，我们可以得到纯净的酵母菌培养物。

这些纯净的酵母菌培养物可以用于研究酵母菌的生理特性、代谢途径、基因表达和蛋白质功能等方面的问题。

同时，纯培养的酵母菌也为酵母菌在工业生产中的应用提供了基础。

总结起来，酵母菌的纯培养实验是一种重要的实验手段，通过分离、培养和纯化等步骤，可以得到纯净的酵母菌培养物。

这些纯净的酵母菌培养物可以为酵母菌的研究提供可靠的基础，也为酵母菌在工业生产中的应用提供了有力支持。

YPD培养基YPD 或YPED，：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出粉胨配方：1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉配制方法：1 .溶解10gYeast Extract（酵母膏）, 20gPeptone（蛋白胨）,20g琼脂粉于900ml水中2 .高压 115度 20min3.加入100ml 10×Dextrose (glucose)（葡萄糖），(葡糖糖溶液灭菌后加入) ,注：葡萄糖，yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。

酵母的分离与纯化1、接种：取酵母0.5克，加入到5ml的YPD培养液中，在30℃摇床中过夜培养，可见培养液变浑浊。

2、计数：将酵母菌液稀释到合适的倍数（约102-103倍）以每小格的菌数可数为度，涂于血球计数板上，在高倍显微镜下计数酵母菌数。

3、涂皿：将培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml稀释合适倍数的菌液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。

做平行样。

4、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上三区划线，培养后分离得到单个菌落。

5、镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。

6、菌种保藏：接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱保藏。

血球计数板使用1.取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液，然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。

2.静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。

将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。

酵母菌的分离,接种和培养摘要:200人类认识和利用酵母菌的历史悠久，早在史前时期，先人们就学会酿酒。

约在6000年前，就发明发面的方法。

直到十九世纪有了显微镜，人们才窥探到醉母菌的真面目。

对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦人汉斯，他是为寻求酿造高品质啤酒的途径才去深入研究酵母菌的。

本文将在实验室酵母菌的分离，接种和培养方面做详细论述。

关键词:酵母菌；分离；接种；培养前言:酵母菌属真菌。

体呈圆形、卵形或椭圆形，内有细胞核、液泡和颗粒体物质。

通常以出芽繁殖；有的能进行二等分分裂；有的种类能产生子囊孢子。

广泛分布于自然界，尤其在葡萄及其他各种果品和蔬菜上更多。

是重要的发酵素，能分解碳水化合物产生酒精和二氧化碳等。

酵母菌在治疗消化系统疾病，作为发酵和繁殖的供体等方面有着重要的作用。

所以了解酵母菌的分离，接种和培养的方法也是很有必要的。

1.材料与方法1.1样品及玻璃器皿手提式不锈钢蒸汽消毒器DF205电热鼓风干燥箱SW-CJ-2FD双人单面净化工作台DHP-500型电热恒温培养箱(酵母菌30°左右)1.2方法1.2.1 培养基的配制及灭菌葡萄糖酵母培养基:蛋白胨10g,葡萄糖20g , 酵母膏5g琼脂15~18g ,蒸馏水1000ml1.2.1.1称量药品根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。

蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。

1.2.1.2溶解用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。

待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。

如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。

1.2.1.3调节pH根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。

测定pH可用pH 试纸或酸度计等。

1.2.1.4溶化琼脂固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。

酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤如下：
1. 取少量酵母菌样品，使用选择培养基（例如固体葡萄糖、面粉琼脂培养基，添加有特殊药液和增菌剂的选择培养基有利于酵母菌的筛选）进行分离纯化。

2. 筛选出发酵力良好的菌落并进行纯培养。

在酒精发酵实验中发现典型的酵母菌菌落可移种至综合生化管培养箱中进一步鉴定。

3. 使用液体培养基进行酵母菌扩大培养，准备好无菌吸管和无菌锥形瓶，将酵母菌从锥形瓶中转移到试管中。

4. 对酵母菌进行计数，准备血液培养皿和牛肉膏琼脂培养基，接种菌液到培养基中使其生长并繁殖，观察生长情况并进行计数。

通过以上步骤，就可以对酵母菌进行纯培养，请确保所有使用到的工具和试剂都经过灭菌处理。

以上步骤仅供参考，建议您咨询专业人士获取更具体的信息。

酵母菌的分离纯化•实验目的1.了解培养基的配置与灭菌技术；2.无菌操作技术；3.工业微生物的分离与纯化技术；4.工业微生物的检测及保藏。

•基本原理1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。

也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。

由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。

不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。

由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。

2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。

所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。

3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。

首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。

分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。

此次实验采用梯度稀释涂布平板法。

4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。

本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。

实验器材仪器设备恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器玻璃器皿烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片试剂与材料苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液其它纱布、滤纸•实验内容及操作步骤(一)、样品的选择酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。

土壤中酵母菌的分离与纯化实验报告结果实验步骤：
1.实验前准备：准备好所需的培养基、试剂和实验器材。

2.取一定量的土壤样品，加入无菌水中制备土壤悬浮液。

3.对土壤悬浮液进行预处理：将悬浮液通过过滤器过滤，以去除大颗粒杂质。

4.制备培养基：根据酵母菌的生长要求，配制适宜的培养基。

5.接种培养基：将过滤后的土壤悬浮液均匀地接种在培养基表面，避免接种过多的菌落。

6.培养条件：将接种好的培养基培养于适宜的温度和湿度条件下。

7.观察培养结果：在培养一定时间后，观察培养皿上是否出现酵母菌菌落。

8.分离纯化：选择单个菌落，用无菌技术将其移至新的培养基上，重复培养步骤，直到获得纯种的酵母菌培养物。

实验结果：
经过培养和分离纯化的酵母菌培养物显示出单一的菌落形态，颜色为白色或乳白色。

观察下显微镜下，酵母菌呈现为球形或椭圆形的单细胞结构，直径约为5-10微米。

酵母菌菌落在培养基上呈现出光滑、湿润的表面，并具有边缘清晰的特点。

实验结论：
通过土壤中酵母菌的分离与纯化实验，成功地从土壤样品中分离出纯种的酵母菌培养物。

这些酵母菌菌落形态规整、单一，符合酵母菌的特征。

该实验结果为进一步深入研究酵母菌的生理特性和应用提供了基础。

酵母菌的分离酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中的土壤、水体、果实等环境中。

酵母菌以其独特的代谢特性被广泛应用于食品工业、制药业、酿酒业等领域。

为了深入了解酵母菌的特性和应用潜力，科学家们对酵母菌进行了大量的分离研究。

酵母菌的分离是指从样本中筛选出纯种的酵母菌，并将其进行培养和研究。

在分离酵母菌的过程中，科学家们需要采集样本，如土壤、果实等，将样本经过一系列处理后进行培养。

首先，样本会经过物理处理，如振荡、搅拌等，以分散其中的酵母菌。

然后，样本会被培养在富含营养物的培养基中，提供适宜的环境条件，使酵母菌能够生长繁殖。

接下来，科学家们会进行菌落计数，通过观察和统计菌落的数量和形态，筛选出单一的酵母菌菌种。

最后，分离得到的酵母菌菌种会被进行进一步的鉴定和培养，以确保其纯度和活力。

酵母菌的分离研究对于酵母菌的应用具有重要意义。

首先，分离得到的酵母菌菌种可以用于酿酒和发酵产业。

不同的酵母菌菌种具有不同的发酵特性和产物特性，通过分离和筛选，可以获得更适合特定产品的酵母菌菌种，从而提高产品的质量和产量。

其次，分离得到的酵母菌菌种可以用于制药工业。

酵母菌可以被用于生产多种药物，如抗生素、维生素等，分离研究可以为制药工业提供更多的菌种资源和新的应用途径。

此外，分离酵母菌还可以用于食品工业。

酵母菌可以被用于发酵食品的制作，如面包、啤酒等，通过分离和培养研究，可以获得更适合特定食品的酵母菌菌种，提高食品的品质和口感。

当前，酵母菌的分离研究正处于不断深入的阶段。

科学家们通过采集不同样本，如极端环境、农产品等，寻找更多的酵母菌菌种。

同时，利用现代生物技术手段，如基因工程、高通量筛选等，加速酵母菌的分离和鉴定过程。

这些研究不仅有助于发现新的酵母菌菌种，还可以为酵母菌的应用提供更多的可能性。

酵母菌的分离是一项重要的研究工作，对于酵母菌的应用具有重要意义。

通过分离研究，科学家们可以获得纯种的酵母菌菌种，并将其应用于食品工业、制药业、酿酒业等领域。

1. 学习微生物分离纯化的基本原理和方法。

2. 掌握酵母菌的分离纯化技术。

3. 观察酵母菌的形态和培养特征。

二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界中。

本实验通过平板划线法将混合菌液中的酵母菌分离纯化，并在适宜的培养基上培养，观察其形态和特征。

三、实验材料1. 菌种：啤酒酵母菌2. 培养基：酵母膏葡萄糖琼脂培养基（YGA）3. 工具：接种环、酒精灯、无菌试管、无菌棉签、培养皿、显微镜等四、实验方法1. 菌种活化：将啤酒酵母菌菌种接种于YGA培养基中，在28℃恒温培养箱中培养24小时。

2. 分离纯化：取活化后的酵母菌菌液，用无菌棉签涂布于YGA平板上，用接种环进行平板划线，划线时注意不要划破菌落。

将平板倒置于28℃恒温培养箱中培养24小时。

3. 观察与计数：观察平板上的菌落，记录菌落形态、大小、颜色等特征。

用无菌棉签挑取单个菌落，接种于新的YGA平板上，重复上述操作，直至获得纯化的酵母菌。

4. 酵母菌形态观察：将纯化的酵母菌接种于YGA培养基中，在28℃恒温培养箱中培养24小时，用无菌吸管吸取少量菌液，滴加于载玻片上，用无菌盖玻片覆盖，在显微镜下观察酵母菌的形态。

五、实验结果1. 菌落特征：酵母菌菌落呈圆形，表面光滑，湿润，边缘整齐，颜色为乳白色。

2. 酵母菌形态：酵母菌为单细胞，呈椭圆形或卵圆形，细胞核明显，细胞壁较厚。

1. 通过平板划线法，成功分离纯化了酵母菌，表明该方法适用于微生物的分离纯化。

2. 酵母菌在YGA培养基上生长良好，菌落特征明显，便于观察和识别。

3. 显微镜下观察酵母菌的形态，有助于了解其生物学特性。

七、实验结论1. 本实验成功分离纯化了酵母菌，掌握了酵母菌的分离纯化技术。

2. 通过观察酵母菌的形态和培养特征，了解了酵母菌的基本生物学特性。

3. 平板划线法是一种简单、有效的微生物分离纯化方法，适用于实验室研究。

八、实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作，防止杂菌污染。

酵母菌的纯培养实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界各种环境中，包括土壤、水体和植物表面等。

酵母菌的纯培养实验是一种基本的实验手段，用于研究酵母菌的生长、代谢以及其他生物学特性。

本文将探讨酵母菌的纯培养实验的原理和方法。

酵母菌的纯培养实验是指将酵母菌分离出单个纯种，使其在培养基上单独生长。

这样可以避免不同种类的酵母菌相互干扰，从而更好地研究其生物学特性。

纯培养实验的关键是分离出单个酵母菌，实验过程大致分为以下几个步骤。

需要选择适当的培养基。

常用的培养基有酵母抽提物培养基、酵母营养盐琼脂培养基等。

培养基应提供适当的碳源、氮源和其他必需的营养物质，以满足酵母菌的生长需求。

需要从自然环境中分离出酵母菌。

可以通过取样、稀释和涂布等方法，将样品均匀地分布在培养基表面。

然后，将培养皿放置在适当的温度和湿度条件下，等待酵母菌的生长。

接下来，需要进行单菌分离。

当培养皿上出现酵母菌生长的斑点时，可以使用显微镜和接种针等工具，将单个酵母菌菌落转移到新的培养基上。

这个步骤需要非常细心和准确，以确保每个菌落只含有一个酵母菌。

需要进行鉴定和纯化。

通过观察酵母菌的形态特征、生长性状和代谢产物等，可以初步鉴定酵母菌的种类。

然后，可以将纯培养的酵母菌菌落转移到新的培养基上，进行进一步的培养和研究。

酵母菌的纯培养实验不仅可以研究其基本生物学特性，还可以应用于酵母菌的育种和工业生产等领域。

例如，通过培养高产酵母菌株，可以提高酵母菌的发酵产物的产量和质量；通过培养抗逆性强的酵母菌株，可以提高发酵过程的稳定性和效果。

酵母菌的纯培养实验是一种重要的实验手段，用于研究酵母菌的生物学特性和应用价值。

通过适当的培养基和实验方法，可以成功地分离和纯化酵母菌，并进行进一步的研究和应用。

酵母菌的纯培养实验对于推动酵母菌研究的发展和应用具有重要意义。

啤酒酵母分离后的提取方法摘要：一、啤酒酵母的培养与分离方法二、从土壤中分离啤酒酵母菌的步骤三、啤酒酵母在生产中的应用四、酵母菌提取方法的探讨正文：一、啤酒酵母的培养与分离方法啤酒酵母，作为一种常用的发酵剂，在食品、饮料等行业中具有广泛的应用。

啤酒酵母的培养与分离方法主要有以下两种：1.直接从麦汁中培养：这种方法适用于啤酒厂家的生产过程中，目的是将酵母添加到麦汁中进行发酵。

在此过程中，培养基就是麦汁，无需进行酵母分离。

2.从土壤中分离：这种方法适用于研究或生产中需要特定酵母菌的情况。

通过从土壤中分离啤酒酵母，可以得到具有特定性状的酵母菌株。

二、从土壤中分离啤酒酵母菌的步骤1.配制适合酵母菌的选择培养基，如麦芽汁培养基或YPD培养基。

2.对土壤样品进行梯度稀释，首先配制几包9mL的生理盐水，对1g土壤样品进行稀释，一般稀释到6的梯度就可以了。

3.倒平板，分区划线，将稀释后的土壤样品均匀涂布在培养基表面，25℃培养2到3天。

4.挑选生长良好的菌落进行进一步纯化。

三、啤酒酵母在生产中的应用啤酒酵母不仅在啤酒生产中起到发酵作用，还具有以下应用：1.酿造：啤酒酵母用于麦汁的发酵，使麦汁中的糖分转化为酒精和二氧化碳，从而制成啤酒。

2.食品添加剂：啤酒酵母含有丰富的营养成分，如蛋白质、维生素和矿物质，可作为食品添加剂，提高食品的营养价值。

3.生物发酵：啤酒酵母还可用于生产其他发酵产品，如葡萄酒、果酒、腐乳等。

四、酵母菌提取方法的探讨酵母菌提取是酵母生产与应用的关键环节。

常用的提取方法有以下几种：1.机械法：通过离心、过滤等机械手段将酵母菌从培养液中分离出来。

2.沉降法：利用酵母菌与培养液的密度差异，使酵母菌自然沉降，从而实现分离。

3.浮选法：通过添加表面活性剂，使酵母菌聚集在一起，形成浮游颗粒，从而实现分离。

4.生物分离法：利用酵母菌与其他微生物的生物学特性差异，选择合适的分离介质和条件，实现酵母菌的分离。

综上所述，啤酒酵母的培养、分离与提取方法多种多样，可根据实际需求和应用场景选择合适的方法。

酵母菌培养与分离的方法嘿，朋友们！今天咱来聊聊酵母菌培养与分离那些事儿，这可有意思啦！你想想看，酵母菌就像一群小小的精灵，在我们看不见的地方活跃着。

要培养它们呀，就好像给这些小精灵搭个温暖舒适的家。

首先呢，得准备好合适的培养基。

这就好比是给小精灵们准备的美食盛宴。

常用的培养基就有麦芽汁培养基之类的，营养丰富得很呢！把这些培养基调配好，就等着酵母菌们大快朵颐啦。

然后呢，就是接种啦。

这就像是邀请小精灵们来家里做客。

可以从现有的酵母菌培养液中取那么一点点，轻轻地放到培养基上。

哎呀，这可千万得小心，别把小精灵们吓跑咯！接下来，就是要给它们提供适宜的环境啦。

酵母菌喜欢温暖的地方，温度可不能太低啦，不然它们会不高兴的。

还要注意保持一定的湿度，就像我们人也喜欢在舒服的环境里待着不是？等培养了一段时间后，你就会发现培养基上出现了好多酵母菌啦。

那一团团的，不就是小精灵们的聚会嘛！要把它们分离出来呢，也有办法。

可以用稀释涂布平板法呀，把含有酵母菌的培养液稀释后，均匀地涂在平板上。

就好像是把小精灵们均匀地撒在一个大广场上，这样它们就能各自占一块地方啦。

或者还可以用平板划线法呢，用接种环在培养基上划来划去，就像给小精灵们划分地盘一样。

培养和分离酵母菌可不简单呢，这需要我们的耐心和细心。

就好像照顾小婴儿一样，得时刻关注着它们的需求。

你说，这酵母菌是不是很神奇呀？我们通过一些小小的操作，就能让它们在我们的掌控下生长、繁殖、分离。

这难道不是很有成就感的一件事吗？想想看，我们可以通过自己的努力，观察到酵母菌的点点滴滴，了解它们的生活习性，这多有趣呀！所以呀，大家不妨都试试，自己动手培养和分离酵母菌，去探索这个小小的微生物世界。

说不定你会发现更多奇妙的事情呢！就大胆地去尝试吧，别害怕失败，就像我们走路也会摔跤，但总会站起来继续走一样。

让我们一起在酵母菌的世界里畅游吧！。

实验室培养酵母菌的方法
实验室培养酵母菌的方法如下：
1. 样品处理：对种子样品进行表面灭菌处理，并使用无菌研钵进行粉碎，然后将粉末加入到一定量的无菌水中形成原液，一般稀释到10^-6即可。

2. 酵母菌的分离：在无菌条件下，取样品稀释液微升至培养基中，使用无菌涂布器将其接种于培养基中（酵母菌常用培养基包括MEA培养基、PDA培养基、YPD培养基等），每个梯度2-3个平行，28℃培养48-72小时。

3. 纯化培养：在平行平板中选取菌株分布均匀、数量适宜的平板，挑取其中的单菌落将其以平板划线方式接种于新的MEA培养基中，28℃培养48-72小时。

然后挑取单菌落接种至新鲜的MEA斜面上与4℃进行保藏。

以上步骤仅供参考，建议咨询专业人士获取更准确的信息。

微生物学大实验实验指导编者：生物技术教研室目录实验一酵母菌的培养与分离‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2实验二酵母菌的鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7实验三酵母菌耐受能力的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19实验四酵母菌发酵工艺条件的优化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22实验五耐高温酵母菌株的诱变选育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24实验六酿酒酵母细胞固定化与酒精发酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27耐高温酒精酵母菌的选育及发酵条件的研究实验一酵母菌的培养与分离一、实验目的学习培养和分离酵母菌的技术和方法二、基本原理大多数酵母菌为腐生,其生活最适pH为－6,常见于含糖分较高的环境中,例如果园土、菜地土及果皮等植物表面;酵母菌生长迅速,易于分离培养,在液体培养基中,酵母菌比霉菌生长得快;利用酵母菌喜欢酸性环境的特点,常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长,然后在固体培养基上用划线法分离之; 三、实验主要内容和要求一本次实验的方案由同学们自己制定,实验包括：1．马铃薯葡萄糖培养基, 乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制;2.菌株的筛选,根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出高产酒精的适宜的酵母菌株;3.酵母菌的分离,要求接种一次, 28-30℃,培养24小时,转接一次,28-30℃,培养24小时,并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌;4.用划线分离法对酵母菌进行纯化,要求每组挑取单个菌落,连续划线分离4代,镜下为单一纯菌株,每组扩繁10支斜面菌种,备用;四、实验的准备1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等;2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂15-20克、蒸馏水1000ml;配制方法：1先将马铃薯去皮,切片,称200克并加蒸馏水1000ml,煮沸半小时,用纱布过滤,补足蒸馏水量至1000ml ,制成20%的马铃薯汁;2在20%的马铃薯汁中加入琼脂,煮沸溶化,补足水分并在115℃条件下高压灭菌20分种;3加入葡萄糖,制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基;3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上,但不加琼脂而加乳酸,按每1000ml培养液中含5ml乳酸的量加入,并分装试管;五、实验设计l、接种：取一小块果皮,不需冲洗,直接接入乳酸马铃薯葡萄糖培养液管中,置28-30℃,培养24小时,可见培养液变混浊;2、培养,用无菌吸管取上述培养后培养液,注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中,置28一30℃再培养24小时或稍长过长则霉菌长出;3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的%美蓝染色液中,混匀后加盖玻片制成水浸片,先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况;活酵母菌可使美蓝还原,从而使菌体不着色,用此方法可判断酵母菌的死活;4、分离：马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板;用划线法分离酵母菌培养液,从而得到单个菌落;挑取单个菌落反复再次划线分离纯化,最终可获得纯培养;六、实验注意事项1.配制培养基时,应注意琼脂的加量,不同规格及批次的琼脂的加量应由实验确定,不能照搬书上的加量;2.对培养基加热时应注意琼脂的糊底与暴沸;3.灭菌锅操作时,首先应注意水一定要加足够,排气要彻底,其次灭菌期间不要离开人,灭菌结束后,关闭电源,拔掉插头,最后放气一定要缓慢,均匀,气放彻底才能开锅,取锅内物品,应小心,防止烫伤;4.接种前应注意无菌工作台的消毒与杀菌,接种时应注意手与接种工具的消毒;七、实验结果的观察及记录小时,观察试管内培养液的情况并作记录,每组转接2支试管;小时,观察试管内培养液的情况,镜检培养液内菌的数量,粗略判断是否为酵母菌并作记录,每人蘸取培养液进行划线分离,并作记录;小时后,观察培养皿内菌的生长的情况,挑取单个菌落进一步划线分离,直到为纯菌落;4.每组转接10支斜面试管,备用;八、实验的延伸自然条件下酿造苹果酒,葡萄酒、猕猴桃酒;七实验报告要求1.实验完毕后,每位同学都应独立作出实验报告,实验报告应类似于小型论文格式;2.实验报告内容包括：1立题意义;2实验设计;3实验步骤详细记录;4对实验结果的分析讨论和总结;5实验延伸;6实验心得体会;附1：果酒的酿制方法—、目的要求了解果酒酿制原理,学习苹果酒酿制技术;二、基本原理果酒是一类营养丰富、含酒精度低的上乘饮料;它是用含一定糖分和水分的果实压汁,经微生物发酵而成;其生化作用,除酒精发酵的主产物外,还有甘油、醋酸、琥珀酸、杂醇油等的形成；同时,陈酿期中,各种酸类与醇类的酯化反应,赋予果酒特殊的香味；果酒中的单宁、色素、果屑微粒及蛋白质包括酵母尸体等的氧化和下沉,使酒液澄清、风味增浓;各种果酒以原料而称名;除坚果外,所有栽培果,野生果均可做酿果酒的原料;本实验以苹果酒为例,学习其酿制方法;三、实验材料1、菌种在7°Be’麦芽汁琼脂斜面培养基上的葡萄酒酵母 ellipsoieleus;2、器材苹果汁培养基,7°Be’麦芽汁培养基,10ml／管、100ml／三角瓶等装量,白糖,食用酒精,亚硫酸,果胶酶,发酵缸,破碎机,果汁分离器等;a.苹果汁培养基粗滤新鲜果汁蔗糖调至13°Be,酸度%以下1000mlK2HPO4 0.1g MgSO4·7H2O 0.1g配好后,加热煮沸3～5分钟,静置10小时以上,过滤、分装,0.7Kg／cm2灭菌20分钟;四、实验步骤一酒母培养1、菌种活化一级种取装有10ml苹果汁或7°Be’麦芽汁培养基1支,按无菌操作法接种葡萄酒酵母菌一环,混匀后置28～30℃下培养2～5天用苹果汁活化菌种时需培养5天以上,镜检酵母繁殖良好,无杂菌即可;2、母发酵剂制备二级种在装有100ml苹果汁培养基的三角瓶中,接1～2ml经活化的葡萄酒酵母菌液,于28℃下培养2～3天,当培养液表面有气泡产生,嗅之有酒香味、取样镜检无杂菌时使用;3、生产发酵剂的制备三级种方法与母发酵剂相同,只是采取更大的容器;一般采用500～1000ml的三角瓶或卡氏罐,盛装占容积1／2～3／5的果汁培养液,灭菌冷却后,按10％接种量接人母发酵剂,在25～28℃下培养24～48小时,待发酵正常,镜检无杂菌方可使用;4、如果使用活性干酵母,添加量为20g/L发酵醪,复水用水量是干酵母重量的5～10倍;复水用水的温度应保持在40℃左右38～43℃,将酵母静置5～10min后搅拌,酵母在水中的时间不能超过30min;然后使酵母溶液缓慢冷却到与将被接种发酵醪的温差小于10℃,然后直接加入发酵醪;二果酒生产工艺流程如下：果胶酶↓苹果→分选除杂下清洗→破碎→压榨→粗果汁→果楂、苹果酸、丹宁↑活化酵母→母发酵剂→生产发酵剂↓蔗糖→发酵→皮渣分离→后发酵→原酒→→换捅除渣→贮存陈酿→配制→贮存→澄清过滤→装瓶→巴氏灭菌→封口→成品;2～3次操作要点：1、分选取成熟苹果,除去腐烂、干疤和伤果;2、清洗清水充分洗涤,除去果皮上的污物、杂质及药剂,以保证原料干净卫生;3、破碎为易于压榨,提高出汁率,需进行破碎;用破碎机破碎至果块粒度0．5cm3左右,并除去果籽;4、压榨分离破碎后立即进行压榨分离;分离出的果汁中不得夹带果肉,同时需添加适量苹果酸调整含量要求果汁总酸含量为5g／L,并加入～0.15g／L的果胶酶,促进果胶分解,使果汁澄清并提高酒的风味;由于苹果汁易被自身含有的多酚氧化酶氧化,故需加SO2还原剂抑制酶活性,同时SO2也具有杀菌、防腐和澄清果汁作用;SO2来源,除工厂应用液态SO2外,实验室常加入亚硫酸钠Na2SO3和偏重亚硫酸钾K2S2O5,其用量为果汁量的％即可;5、前发酵取澄清果汁放入经干热灭菌的发酵缸中,装量占缸容积的4／5,按3～5％的接种量接入酵母生产发酵剂进行发酵,保持品温在18～22℃之间,最高勿超过25℃,发酵应在7～12天内结束;一般苹果汁糖分约为11％,经发酵后,酒精含量约达6％以上,前发酵结束后,原酒酒度应大于8％V,残糖＜20g／L,总酸苹果酸＞5g／L;6、后发酵前发酵结束后,迅速将酒液与皮渣分离,酒汁转入经干热灭菌的发酵缸中,进行后发酵,使残糖继续分解;期间,控制品温在18～22℃之间,不要超过25℃,时间1个月,即得原酒;要求残糖含量小于2g／L以下,挥发酸以醋酸计小于0.6g／L,总酸以苹果酸计大于5g／L;7、换桶除渣为使已澄清的原酒与其酒脚沉淀物及时分离,以免酒脚产生异味而影响酒质,故需进行换桶缸;换桶次数新酒每年换三次;8、贮存陈酿应满桶贮存;陈酿即酒的老熟,经长期密闭贮存,可使酒质澄清、风味醇厚;贮存室温8～16℃,存期半年以上;9、配制原酒贮存半年后可开始配制;配制时,按工艺规定将不同原酒按一定配比相混,然后添加适量的糖、酒精、继续贮存半年以上;10、澄清过滤可采用冷冻法使其澄清,即于-4℃左右存放7天,然后冷过滤;澄清后的酒置-5～-7℃下冷冻3天不发生混浊沉淀,或暴露空气中氧化4天不变混浊即为合格;11、装瓶灭菌装瓶后需进行巴氏灭菌,即在63℃下处理15分钟,冷却后封口保存;五、实验报告1、简述苹果酒的酿制法;2、二氧化硫在果酒酿制中的作用是什么六、思考题1、酵母菌酿酒的原理是什么2、果酒酿制中为何要加入果胶酶实验二酵母菌的鉴定酒精生产中所用酵母菌在微生物学中的分类依据是什么微生物学的类别分门、纲、目、科、属、种,生产酒精用酵母菌属于微生物中的真菌门、子囊菌纲、原子囊菌亚纲、内孢霉目、内孢霉科、啤酒酵母属、卡尔斯伯酵母属等;酵母菌的分类依据是根据它的形态特征、生理生化反应特征来确定的;在分类前将菌体细胞进行分离纯化,得到由单细胞长成的菌落,然后再进行形态特征和生理生化鉴定;一形态特征的鉴定把酵母菌接种到麦芽汁固体培养基上,让它长成菌落,观察其菌落的形态、颜色、质地、边缘、表面等特征;把它再接种到液体麦芽汁培养基中,观察是否能产生醭、试管或培养仪器表面壁上能否形成菌环,培养液中是否产生沉淀、混浊程度等;另外,还要取样在显微镜下观察其单细胞的形态、大小、能否形成孢子、孢子的大小以及繁殖方式等;二生理生化特征的鉴定酵母菌的生理生化特征主要表现为发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖等糖类的能力;同时,还需测定利用其它碳水化合物、同化酒精、耐酒精,利用硝酸盐还是硫酸盐,发酵产酸、产醋、耐温、耐酸、抗重金属离子、抗杂菌性等的能力;最后,根据以上得出的形态特征和生理生化特征,查阅有关资料,把具有相同特征的一类酵母菌,就可以归属于某一属;怎样鉴定酵母菌在液体培养基中的培养特征将酵母菌种接种于米曲汁或麦芽汁液体培养基中,放于恒温培养箱内以28—30℃保温培养18—24、24—48、48—72小时,取出观察各个时期液体培养基表面有无白色浮膜物-醭的存在,各个不同时期培养基中有无沉淀或沉淀的多少、有无混浊和混浊程度、试管或其它培养器壁上有无菌环形成,最后取出各个不同时期的样液,注入酵母细胞计数器--血球计中,放置显微镜下观察单个细胞的形态变化情况、液泡的大小、细胞数增加的多少以及培养基中pH值的变化情况等,并测定其酒精和二氧化碳的生产量;然后根据不同的反应情况,作好详细的原始记录,便于以后培养菌种时比较和参考;酵母菌生理生化试验一、酵母菌糖发酵试验一实验目的了解鉴别酵母菌的实验方法;二实验原理酵母菌在厌氧条件下能分解糖类,产生各种有机酸、气体和其它产物;酵母菌种类不同对各种糖类的发酵能力各异;因此,这是鉴别酵母菌种类的一项重要依据;酸的产生可根据培养基中溴甲酚紫由紫变黄或溴麝香草酚蓝由蓝变黄指标剂颜色的改变来确定;产气可由发酵管气泡的产生予以证实;三材料糖发酵基础液,%溴甲酚紫或%溴麝香草酚蓝溶液,葡萄糖、乳糖、半乳糖和麦芽糖,啤酒酵母斜面菌种;四实验内容1、糖发酵基础液配制好后,按培养液容量的1%加入糖,分装于杜氏发酵管中培养液的高度约为4-5厘米,再在试管内加入倒置的小玻管约×－厘米一支;每种糖设三个重复管,<121℃>高压灭菌15分钟;2、将酵母分别接入上述各发酵管中,置<30℃>下培养48-72小时,另以不接种者作对照3、如产酸则培养液pH值下降而变黄色；如产气,则必先产酸,并在杜氏小管顶端出现气泡;4、结果记录;以“”表示产酸,“<0”>表示产气,“＋”表示产酸产气,“－”表示无变化,“碱”表示产碱;二、酵母菌碳源同化试验一实验目的了解酵母菌对各种碳源的利用情况;二实验原理碳是酵母菌细胞的重要组成成分,约占酵母菌体重量的50%,为酵母菌生命活动提供所需的能量和组成其结构的物质;酵母菌对各种碳源的利用,因种类不同而异;这是酵母菌分类鉴定的一个重要依据;三材料无碳基础培养基,啤酒酵母斜面菌种,%的葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖溶液; 四实验内容1、液体试管法1每管加无碳基础培养基5毫升,加被测试的某种碳源,并以葡萄糖作为对照;2接入啤酒酵母,<28℃>下培养1-2周,观察结果;2、生长图谱法1无碳培养基内加入2%的水洗琼脂,融化后冷却至45<-50℃>,到至平板;2接种新鲜培养的啤酒酵母于1毫升无菌生理盐水内,搅匀后倒入上述未凝平板内,摇匀待凝;3皿底用特种蜡笔写上被测试各种碳源的标记;4用不锈钢匙,按标记加入相应的米粒大小的碳源,并以葡萄糖作对照;5<28℃>下培养24-48小时后观察结果;3、结果观察1液体试管中是否形成醭,环岛等;2生长图谱中测量菌落大小,说明对碳源的利用情况;三、酵母菌氮源同化试验一实验目的了解酵母菌对各种氮源的利用情况;二实验原理酵母菌蛋白酶不分泌于菌体外,故酵母菌对复杂的蛋白质不能利用,酵母菌对一些较简单的含氮化合物的利用程度也不一致;三材料无氮基础培养基,啤酒酵母斜面菌,%的蛋白胨、硫酸铵、硝酸铵和尿素溶液;四实验内容1、液体试管法方法同二,以被测试的氮源代替碳源,不加任何氮源作空白对照;2、生长图谱法方法同二,以被测试的氮源代替碳源,不加任何氮化物作空白对照;3、结果观察1液体试管中溶液pH值的变化;2生长图谱中测量形成菌落的大小,说明对各种氮源的利用情况;四、酵母菌生长曲线的测定试验一实验目的掌握单细胞微生物群体生长曲线的几种测定方法;二实验原理酵母菌属于单细胞真核型微生物,把一定数量的酵母菌接种于的液体培养基中,在适宜的温度下培养时,它的生长过程具有一定的规律性;在其生长过程中,定时取样测定酵母菌细胞数量,然后以酵母菌细胞数的对数作纵坐标,生长时间作横坐标,绘制所得的曲线叫生长曲线;此生长曲线大致可划分为四个阶段：调整期、对数生长期、稳定期和衰退期;三材料酵母菌增殖培养基,苹果酒酵母斜面菌种;四实验内容1、将培养24小时左右的酵母斜面菌种,用无菌水洗下菌苔,以3000转/分的速率离心,得菌体;将酵母菌体沉淀物再用无菌水洗2-3次后,制备酵母菌悬液细胞数量约106左右/毫升,测数备用;2、取上述菌悬液1毫升于盛有清亮的酵母增殖培养液的试管中,<25℃>下培养,以此为起始时间,记录起始溶液的细胞数;并在培养1,2,4,6,8,9,10,11,12,14,16,20,22,24小时时分别取样检测酵母菌细胞数量;3、酵母菌细胞数量的检测方法①：活菌计数法;此法是将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后,取一定量体积在毫升之间的稀释液涂布于盛有固体培养基的培养皿内,在<25℃>下培养24小时左右,计算培养皿内菌落数就可测出溶液中活菌数量;方法②：血球计数板计数法;此法是先将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后,使菌落数约为105-106个/毫升,取一滴稀释液滴于血球计数板内,在显微镜下直接计算细胞总数;4、绘制生长曲线以酵母菌细胞数的对数作为纵坐标,以培养时间作为横坐标,画出酵母菌的生长曲线;并分析酵母菌群体的生长规律;五、实验结果的观察及记录见表1－2六、思考题1. 为什么碘液反映无色糖化即可结束2. 煮沸强度对麦芽汁质量有什么影响附1麦芽汁培养基的制备：麦芽汁制备俗称糖化;所谓糖化是指将麦芽和辅料中高分子贮藏物质如蛋白质、淀粉、半纤维素等机器分解中间产物通过麦芽中各种水解酶类或外加酶制剂作用降解为低分子物质并溶于水的过程;溶解于水的各种干物质称为浸出物,糖化后未经过滤的料液称为糖化醪,过滤后的清夜称为麦芽汁,麦芽汁中浸出物含量和原料干物质之比质量分数称为无水浸出率;方法一1取50g麦芽,在EBC标准磨上粉碎；2将已经粉碎好的麦芽粉放入已称重的糖化杯中,加200mL46℃水,不断搅拌并在46℃水浴中保温30min；3使醪液以1℃/ min速率升温到70℃;此时杯内加入100mL70℃水,保持恒温;45min后用玻璃棒取麦芽汁1滴,置于白滴板上,再加碘液1滴,混合后观察碘液颜色变化;直到碘液呈纯黄色不再变色,停止保温,糖化结束;5在10~15min内急剧冷却到室温；6冲洗搅玻璃棒拌器,擦干糖化杯外壁,加水使其内容物准确称量为450g；7用玻璃棒搅拌糖化杯,并注于漏斗中进行过滤,即获得麦芽汁;方法二称取市售麦芽粉或大麦经浸泡、发芽、干燥、粉碎的麦芽粉,按每Kg麦芽粉加入60—65℃温热水—4kg;于55—60℃保温糖化3-4小时,用碘液检查,然后4层纱布过滤,过滤液中加鸡蛋白加水20 mL,调匀之生出丰富的泡沫为止,然后倒在糖化液中搅拌煮沸后用4层纱布过滤,即得到澄清、透明的麦芽汁,灭菌后方可备用;附2 酵母菌鉴定常用培养基1.酵母菌生孢培养基1麦氏琼脂葡萄糖 1gKCL 1.8g酵母浸膏 2.5g醋酸钠 8.2g琼脂 12g蒸馏水 1000ml115℃灭菌20min2胡萝卜培养基将葫萝卜切成的6~7cm的长条,下后上薄,装入培养管中,加水1ml,杀菌,即成;3Gorodkowa氏培养基消化蛋白 1g葡萄糖 0.1g氯化钠 0.5g琼脂 1.2g水 100ml2.12.5％豆芽汁培养基黄豆芽125g加1L,煮沸半小时,过滤后补足水至1L;115℃灭菌30min3.0.6％酵母浸汁加60g干酵母粉于1L水中,必要时加入一些蛋清以澄清滤液,121℃灭菌15min,趁热用双层滤纸过滤；115℃灭菌15min;4.同化碳源基础培养基NH4%,％,%,酵母膏％,水洗琼脂2％;115℃灭菌15min同化碳源液体培养基NH4%,KH2PO4,%,%.%,酵母膏％,糖或其它碳源％;用蒸馏水配,培养基过滤后分装小试管,每管3 ml, 115℃灭菌20min;5. 同化氮源基础培养基葡萄糖2％,％,%,酵母膏％,水洗琼脂2％;用蒸馏水配,培养基过滤后分装大试管,每管20 ml, 115℃灭菌15min;附3酵母各属检索表一 1.生子囊孢子简称孢子,营养细胞芽殖二;2. 生子囊孢子,营养细胞裂殖或兼有芽殖三;3.不生子囊孢子,但生掷孢子营养细胞芽殖四4.不生子囊孢子及掷孢子五二营养细胞芽殖,生子囊孢子1.除芽生细胞外,有真菌丝……………………………………1拟内孢霉属Endomycopsis;2.无真菌丝1营养细胞多边芽殖A2营养细胞两极芽殖BA1.孢子圆卵形,光面,无凸线Ⅰ2. 孢子半圆形,光面,无凸线Ⅱ3. 孢子痣面Ⅲ4. 孢子有凸线Ⅳ5. 孢子长条形Ⅴ6.生袋状子囊,孢子多到16个,圆形………………………2油脂酵母属LipomycesⅠ1. 孢子1～4个,圆,卵形,光面,无凸线；营养细胞多边芽殖,圆形,卵形,长形;……………………………………………………………3酵母菌属Saccharomycesa孢子生成时,子囊有二营养细胞结合而成;………结合酵母亚属Zygosaccharomycesb孢子生成时,子囊生试探接合枝,但无二细胞结合现象…孢子圆酵母亚属Torulaspora c孢子生成时,子囊直接有营养细胞变成,无试探枝及结合现象……………酵母菌亚属Saccharomyces2.孢子1～4个,光面,无凸线；圆卵形,但营养细胞两极芽殖,为柠檬形………………………………………………4类酵母属SaccharomycodesⅡ孢子为半圆形或肾形1. 孢子为半圆形,多角形,或兼有圆形的…………………………5毕氏酵母属Pichiaa孢子生成时,子囊有二营养细胞结合而成;………接合毕氏酵母亚属Zygopichiab孢子生成时,子囊有营养细胞直接变成………………………毕氏酵母亚属Pichia2. 孢子为肾形………………………………………………………a孢子生成时,子囊有二营养细胞结合而成;……接合肾孢酵母亚属Zygofabosporab孢子生成时,子囊有营养细胞直接变成………………肾孢酵母亚属FabosporaⅢ孢子痣面1. 孢子痣面,无凸线；营养细胞多边芽殖……7德巴利酵母属Debaryomyces2. 孢子痣面,无凸线,子囊由接合子的芽子而成,营养细胞两极芽殖……8纳酵母属Nadsonia3.孢子痣面,圆或卵形,中腰有凸线；营养细胞多边芽殖,…………9施氏酵母属SchwanniomycesⅣ孢子有凸线1. .孢子痣面,圆或卵形,中腰有凸线…………………………………………施氏酵母属2. .孢子光面,圆或卵形,中腰有凸线,使整个形体如土星状………10魏氏酵母属Williopsisa孢子生成时,子囊有二营养细胞结合而成………………接合魏氏酵母亚属Zygowilliopsisb孢子生成时,子囊直接由营养细胞变成…………………魏氏酵母亚属Williopsis3. 孢子光面,凸线生在一边,使孢子形如草帽,营养细胞多边芽殖……11汉氏酵母属Hansenulaa孢子生成时,子囊有二营养细胞结合而成……接合汉氏酵母亚属Zygohansenulab孢子生成时,子囊直接由营养细胞直接生成………汉氏酵母亚属Hansenula4. 孢子光面,凸线生于一边,使孢子形如草帽,营养细胞两极芽殖,…………………………………………………………………12孢子柠檬形酵母属HanseniasporaⅤ孢子长条,梭形或鞭形;1. 一个子囊中只有一个孢子…………………………13单孢酵母属Monosporellu2. 孢子2～8个,长条带鞭毛,如鞭子……………………14鞭子酵母属Nematospora3.孢子无鞭毛………………………………………………15蝇肠酵母属Coccidiasous B营养细胞,两极芽殖,柠檬形;1. 孢子生成时,营养细胞直接变成子囊…………………4类酵母属Saccharomycodes2. 孢子上有凸线,使之成草帽形………………12孢子柠檬形酵母属Hanseniaspora3. 孢子痣面,子囊由接合子的芽子而成…………………………8纳酵母属Nadsonia 三营养细胞裂殖,或兼及芽殖,生子囊孢子;1.由真菌丝Ⅱ2.假菌丝发达Ⅱ无真菌丝ⅠⅠ只有裂生子,无真菌丝;1. 孢子圆形卵形…………………………………16裂殖酵母属Schizosaccharamyces2. 孢子肾形…………………………………………………………17北港酵母属Ⅱ有真菌丝1. 有真菌丝,只裂殖生裂生子……………………………………18内孢霉endomyces2.有真菌丝,芽殖兼及裂殖………………………………1拟内孢霉属Endomycopsis;四生掷孢子1. 掷孢子肾形,不对称,菌落红色或红………………19掷孢酵母属Sporobolomyces2. 掷孢子圆形或卵圆形,菌落无色或浅黄色…………………20布尔酵母属Bullera;五不生子囊孢子或掷孢子1. 芽殖细胞及假菌丝外生真菌丝且分裂生裂生子……21芽裂酵母属Trichosporon2. 芽殖细胞,假菌丝及真菌丝可能有,但无裂生子Ⅰ;Ⅰ1. 普通假菌丝甚发达,真菌丝可能有………………………22假丝酵母属Candida2. 无真菌丝,假菌丝原始型或无Ⅱ;Ⅱ1. 生类胡萝卜素………………………………23红酵母属Rhodotorrula2. 无类胡萝卜素Ⅲ;Ⅲ1. 两极芽殖,普通细胞常为柠檬形…………………24无孢柠檬形酵母属Kloeckera2. 三角芽殖,营养细胞常为三角形………………………25三角酵母属Trigonopsis3.营养细胞瓶形,芽殖,子母细胞基部甚宽,生横膜……26瓶形酵母属Pityrosporum4. 营养细胞一端为尖穹窿状,含糖培养基中生大量的酸…………27瓶形酵母属Brettanomyces5. 营养细胞圆形或卵圆形Ⅳ;Ⅳ1. 生荚膜及淀粉样物质,不发酵………………………28隐球酵母属Cryptococcus;2. 无淀粉样………………………………………………29圆酵母属Torulopsis;酵母菌亚属各种检索表Ⅰ1. 只发酵葡萄糖包括果糖及甘露糖及半乳糖：a细胞圆形,子囊孢子一个,…………………………………单孢子酵母b细胞圆形,子囊孢子2或多个………………………………大连酵母c细胞卵形………………………………………………球形酵母;Ⅱ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖及蔗糖………………………………2. 发酵糖类不同Ⅲ;Ⅲ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖及棉子糖：a同化麦芽糖……………………………………………水果酵母b不同化麦芽糖……………………………………………少孢酵母2. 发酵糖类不同ⅣⅣ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖及麦芽糖………………………………意大利酵母S. italicus2. 发酵糖类不同Ⅴ;Ⅴ1. 只发酵葡萄糖、蔗糖及麦芽糖………………………………异质酵母S. heterogenicus2. 发酵糖类不同Ⅵ;Ⅵ1. 只发酵葡萄糖、蔗糖及棉子糖………………………………舍氏酵母S. chevalieri2. 发酵糖类不同Ⅶ;Ⅶ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖及麦芽糖………………………士泰因酵母S. Steineri2. 发酵糖类不同Ⅷ;Ⅷ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖、棉子糖及蜜二糖…………微球酵母S. microellipsodes2. 发酵糖类不同Ⅸ;Ⅸ1. 只发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及棉子糖：a细胞圆形……………………………………………………卵形酵母b细胞卵到长形………………………………………………白氏酵母 ;2. 发酵糖类不同Ⅹ;。

酵母菌的培养与分离实验目的】学习培养和分离酵母菌的技术和方法【实验原理】大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5一6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。

酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。

利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长），然后在固体培养基上用划线法分离之。

【实验材料和用具】1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。

2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂（15-20克）、蒸馏水（1000ml）。

配制方法：（1）先将马铃薯去皮，切片，称200克并加蒸馏水1000ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至1000ml ，制成20%的马铃薯汁。

（2）在20%的马铃薯汁中加入琼脂，煮沸溶化，补足水分并在115摄氏度条件下高压灭菌20分种。

（3）加入葡萄糖，制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。

3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，但不加琼脂而加乳酸，按每1000ml培养液中含5ml乳酸的量加入，并分装试管。

【实验步骤】l、接种：取一小块果皮，不需冲洗，直接接入乳酸马铃薯葡萄糖培养液管中，置28一30℃，培养24小时，可见培养液变混浊。

2、培养，用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml，注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，置28一30℃再培养24小时或稍长(过长则霉菌长出)。

3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。

活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。

4、分离：马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板。

用划线法分离酵母菌培养液，从而得到单个菌落。

挑取单个菌落反复再次划线分离纯化，最终可获得纯培养。

制作酵母菌过程
酵母菌制作过程主要包括以下步骤：
1. 酵母菌种植：从食品厂或研究机构购买酵母菌培养基，选用适合的菌种进行预培养，使其活跃起来。

2. 加入基质：将预培养好的酵母菌加入基质中进行进一步培养。

基质可以选用糖水、面粉、麦芽等材料，也可以直接用酒、酸奶等天然发酵物作为基质。

3. 发酵：将加有酵母菌和基质的发酵罐保持在适宜的温度和湿度下，让其进行发酵。

通常发酵时间为1-2天。

4. 分离纯化：将发酵液离心分离，去除杂质，得到纯化后的酵母菌。

这一步可以使用离心机、过滤器等工具进行操作。

5. 干燥：将纯化后的酵母菌通过喷雾、真空干燥等方法进行干燥处理，制成酵母粉。

6. 包装：将酵母粉包装好，贴上标签，进行存储和销售。

以上就是制作酵母菌的主要步骤。

不同的酵母菌制作过程有所差异，但基本上都是以上几个步骤的组合使用。

从土壤中分离提纯高效的酵母菌主要内容：利用各种微生物实验技术，从土壤中分离并提纯酵母菌，再通过检测酵母菌发酵速率，从而筛选出高效的酵母菌。

关键词：分离提纯高效酵母菌在土壤中分离酵母菌，因此土壤的采样地点在果树下较好。

采集好土壤，将土壤配制成10^-2悬液，主要方法是称取1g土壤，放入三角瓶，迅速倒入99ml无菌水，震荡5-10min即成所需的土壤悬液。

1.由于土壤中酵母菌含量较低，因此在分离前要先进行富集培养24h。

2.接下来是配制培养基，由于要分离的是酵母菌，配制马丁氏培养基。

3.对培养基进行灭菌放入高压蒸汽灭菌锅115℃/30min4.取出后待50℃以下是加入链霉素，每一百克三毫升5.队超净台消毒，点燃酒精灯6.在酒精灯旁倒平板。

7.接种，画线。

8.放入26℃保温箱3-4d。

9.取生长较好的六个菌落分别接入0.05mol/L4ml的六个试管中，编号1-6。

10.3d后检测葡萄糖含量。

11.配置新制的氢氧化铜0.5mol/L50ml12.将强氧化铜分别放入六个试管中每个4ml。

摇匀加热。

13. 5min后比较六个试管的颜色深浅。

编号颜色1褐色'++褐色+2褐色'--3褐色-4褐色+5褐色6结论：三号试管的颜色最浅，所含葡萄糖最少，所以三号试管的酵母菌效率最高。

结果讨论：实验比较成功，但是培养基的菌株较少，这可能和富集培养的时间太短有关系，忘了设置对照试验。

选取高校教务军，可以重复做这个实验，选出比较高效的酵母菌。

注意:1.注意培养基的灭菌2.注意紫外线只能在无人的时候开启3.注意接种环要灼烧彻底4.注意在培养箱中放培养技师要倒置5.注意统一变量。