收稿日期:2001-12-29作者简介:何严萍(1972-),女(傣族),云南文山人,博士生,主要从事药物设计与合成研究;陈芬儿(1959-),男(汉族),江西崇仁人,教授,主要从事有机药物化学研究,Tel :(021)65642021,E 2mail :rfchen @fu 2dan 1edu 1com 。
文章编号:1005-0108(2002)05-0298-07甾体类芳香酶抑制剂的构效关系与研究进展何严萍,陈芬儿(复旦大学化学系,上海200433)摘 要:芳香酶是研究抗乳腺癌药物的新靶酶。
本文从作用机制、构效关系等方面综述了甾体芳香酶抑制剂的研究进展。
关键词:芳香酶;甾体芳香酶抑制剂;抗乳腺癌药物;构效关系中图分类号:R914 文献标识码:A 芳香酶(aromatase ,AR )是微粒体细胞色素P450的一种复合酶,它由血红蛋白P450arom 和还原型辅酶NADPH 组成,是催化生物体内雄激素向雌激素转化的限速酶。
其催化反应分3步进行,首先是AR 中的铁卟啉活化分子氧,将雄激素(雄烯二酮)的19角甲基氧化生成偕二羟基,然后脱水生成192醛基化合物,最后再氧化成甲酸脱去,同时脱去1β2H 使A 环芳构化,从而转化为雌激素[1](见图1)。
Fig 11 The proposed mechanism of the aromatase enzyme 研究表明:有三分之二的乳腺癌是雌激素依赖性的,它们能在雌激素减少后得以消退。
1973年,Schwarsel 首次提出芳构酶抑制剂能特异性导致靶酶失活,阻断芳构化反应,抑制雌激素生成,降低血液中雌激素水平从而达到治疗乳腺癌的目的,并相继报道了一系列抑制AR 活性的化合物。
芳构酶抑制剂作为乳腺癌治疗的一种全新思路引起了相关学者的关注,经近三十年的努力,已开发上市了三代AR 抑制剂,作为治疗乳腺癌的二线或三线药物,在美国、日本等已广泛用于临床。
AR 抑制剂按其结构可分为甾体和非甾体两类,非甾体AR 抑制剂通常是含氮杂环衍生物,杂环上的氮原子通过与AR 上的血红蛋白铁离子配位,占据AR 的活性位置而使酶失活。
第45卷第1期Vol.45 No.12024年3月Mar. 2024宁夏大学学报（自然科学版）Journal of Ningxia University（Natural Science Edition）金刚纂内生真菌Irpex sp.的次生代谢产物研究黄磊，邱仕瑜，鲁松梅，陈世伟，韦霁芮，周敏*（云南民族大学民族药资源化学教育部重点实验室，云南昆明650500）摘要：通过硅胶柱层析和半制备型高效液相色谱等分析方法对金刚纂（Euphorbia neriifolia L.）内生真菌Irpex sp.的液体发酵产物进行提取与分离，共得到9个化合物，分别为IrpexIacte C （1）、IrpexIacte D （2）、5-（4-Oxopentyl）furan-2-carbaldehyde （3）、22-tetraen-3-one （4）、Irlactin L （5）、Irlactin K （6）、Irlactin I （7）、Davotremulane B （8）、（+）-（1R，6S，7S）-Tremul-2-ene-12（11）-lactone （9），其中，3个为呋喃衍生物，5个为倍半萜化合物，1个为甾醇类化合物；化合物3，4，8，9 为首次从耙齿菌属Irpex sp.中分离得到.关键词：金刚纂；内生真菌；Irpex sp.；倍半萜分类号：（中图）TQ041；O65 文献标志码：A植物内生真菌是指在整个生活史或者某一阶段共生或寄生在植物的根、茎、叶、花和果实等组织中，且不会对植物组织产生危害的一类微生物群［1］.植物中的次生代谢产物繁多，有萜类、生物碱和甾体类等化合物，有些对植物自身生长有调节及抗虫害作用等，有些具有抗菌性、抗肿瘤活性及抗疟活性等药理活性［2-3］.大众所熟悉的青蒿素和紫杉醇就是植物的次生代谢产物，但产量非常有限，所以寻求提高植物次生代谢产物产量的途径有重要意义.内生真菌存在于绝大多数植物体中，它们的产物有相当一部分与宿主植物的产物相似甚至相同.研究表明［4-5］，在一些植物内生真菌的次生代谢产物中，存在一定活性成分，因而内生真菌有促进植物有效活性成分合成的作用.金刚纂（Euphorbia neriifolia L.）是大戟属植物，具有止痛消肿、驱虫、清热解毒及泻下通便等药理作用［6-7］.学者从金刚纂的乳汁、根及茎中分离出多种萜类成分［8］.由于植物内生菌与宿主相互依存及互惠，从植物内生真菌中寻找与宿主相似的天然化合物成分，可以促进具有药用价值资源的开发与利用.有关金刚纂内生真菌的次生代谢产物报道很少，将金刚纂内生真菌分离并对其发酵的次生代谢产物进行研究有一定的意义.笔者对大戟属金刚纂中的内生真菌耙齿菌Irpex sp.进行发酵，对其液体发酵次生代谢产物进行提取分离，共得到9个化合物，即IrpexIacte C （1）、IrpexIacte D （2）、5‐（4‐Oxopentyl）furan‐2‐carbaldehyd e （3）、22‐tetraen‐3‐one （4）、Irlactin L （5）、Irlactin K （6）、Irlactin I （7）、Davotre mulane B （8）、（+）‐（1R，6S，7S）‐Tremul‐2‐ene‐12（11）‐lactone （9），其中，3个为呋喃衍生物，5个为倍半萜化合物，1个为甾醇类化合物；化合物3，4，8，9 为首次从耙齿菌属Irpex sp.中分离得到.1 仪器与材料DHP-9162电热恒温培养箱（上海一恒科技有限公司）；SHZ-D （Ⅲ）低温冷却液循环泵（河南巩义瑞德仪器设备仪器有限公司）；DRX-400核磁共振波谱仪（德国Bruker 公司）；Hei-VAP-Value Digital 旋转蒸发仪（德国Heidolph 公司）；Agilent-1260 高效液相色谱仪、Eclipse XDB C18半制备色谱柱（美国 Agilent 公司，250 mm × 9.4 mm， 5 μm）.甲醇（分析纯，云南新蓝景化学工业有限公司）；乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇（工业级，云南利妍科技有限公司）、GF254薄层层析硅胶文章编号：0253‐2328（2024）01‐0055‐05收稿日期：2022‐11‐23基金项目：国家自然科学基金资助项目 (31860099)；云南省自然科学基金资助项目 (202001AW07002)作者简介：黄磊（1996—），男，硕士研究生，主要从事天然产物化学研究，（电子信箱）*****************.*通信联系人：周敏（1984—），男，教授，博士，主要从事天然产物化学研究，（电子信箱）*******************.引用格式：黄磊，邱仕瑜，鲁松梅，等.金刚纂内生真菌Irpex sp.的次生代谢产物研究［J］.宁夏大学学报（自然科学版），2024，45（1）：55-59，68.第 45 卷宁夏大学学报（自然科学版）（100 mm × 100 mm，烟台维启化工产品有限公司）；100~200 目柱层析硅胶（上海皓鸿生物医药科技有限公司）.野生金刚纂采自云南省西双版纳傣族自治州，经云南民族大学周敏教授鉴定为大戟科大戟属植物金刚纂（Euphorbia antiquorun）.1‐J6‐4菌株从新鲜的大戟科植物金刚纂的茎部分离得到，由北京擎科生物科技有限公司进行 DNA 分子鉴定，经过基因序列对比鉴定为耙齿属白囊耙齿菌Irpex sp.，其ITS NCBI登记号为MF 101391.该菌株保存在云南民族大学民族药资源化学教育部重点实验室.2 内生真菌的发酵、提取与分离2.1 菌株液体的发酵挑出纯化的1‐J6‐4菌体，置于马铃薯、葡萄糖、琼脂（PDA）培养基中，在28 ℃恒温箱中培养4 d.待菌体长出一定量的菌丝后，挑取菌丝，分别置于盛有200 mL液体马铃薯、葡萄糖（PDB）培养基的500 mL试剂瓶（共计90瓶）中.在28 ℃，160 r/min条件下发酵7 d，待菌体长满瓶底.配制液体PDB培养基（w（马铃薯）=20%，w（葡萄糖）=2%），90瓶培养基共18 L.然后，经120 ℃高温灭菌20 min，冷却.将菌种按接种比例1∶10接种到液体PDB培养基.最后，在28 ℃，160 r/min条件下发酵15 d.2.2 提取与分离取出金刚纂内生真菌液体发酵物，用三层滤网过滤菌体与发酵液，使用φ=95%乙醇超声提取4次，每次超声1 h.浓缩，用V（乙酸乙酯）∶V（水）= 1∶1对菌液进行萃取.将萃取物合并浓缩后得到浸膏11.1 g.最后通过硅胶柱（100~200目）对浸膏进行分离，分别用V（二氯甲烷）∶V（乙酸乙酯）= 1∶0，20∶1，10∶1，5∶1，1∶1，0∶1及V（乙酸乙酯）∶V（甲醇）=10∶1，5∶1，1∶1，0∶1进行梯度洗脱，得到A-J 10个组分：A（0.4 g），B（0.1 g），C（1.8 g）， D （2.5 g）， E（4.0 g），F（0.7 g）， G（0.1 g），H（0.2 g）， I （0.2 g）， J（0.5 g）.分别取少量A-J样品，用甲醇溶解，在12 000 r/min条件下离心分离10 min.取上层清液进行HPLC分析.综合考虑各组分的质量、化学成分的丰富程度、化合物极性的大小以及分离难易等因素，选择对 C，D，E这3个组分进行分离纯化.对 D（2.5 g）通过硅胶柱（100~200目）进行分离，分别使用V（二氯甲烷）∶V（乙酸乙酯）= 1∶0，20∶1，0∶1和纯甲醇进行洗脱，得到D1-D4共4个组分.D1 （506 mg）经半制备高效液相色谱（流动相为80%甲醇、流速为3 mL/min）通过等度洗脱方式纯化得到化合物1（3.3 mg）和化合物2（6 mg）. D2 （324 mg）经半制备高效液相色谱（流动相为65%甲醇、流速为3 mL/min）通过等度洗脱方式纯化得到化合物3 （9.0 mg）.对C（1.8 g）通过硅胶柱（100~200目）进行分离，分别使用V（二氯甲烷）∶V（甲醇）=1∶0，50∶1，30∶1，0∶1进行洗脱，得到 C1-C4共4个组分.C2 （109 mg）经半制备高效液相色谱（流动相为90%甲醇、流速为3 mL/min）通过等度洗脱方式纯化得到化合物4（10.0 mg）.对E（4.0 g）通过硅胶柱（100~200目）进行分离，分别使用V（二氯甲烷）∶V（乙酸乙酯）=1∶0，50∶1，10∶1和纯甲醇进行洗脱，得到E1-E5共5个组分.E2 （604 mg）经半制备高效液相色谱（流动相为75%甲醇，流速为3 mL/min）通过等度洗脱方式纯化得到化合物5（25.3 mg）、化合物6（16.0 mg）.E3 （571 mg）经半制备高效液相色谱（流动相为70%甲醇，流速为3 mL/min）通过等度洗脱方式纯化得到化合物7 （5.0 mg）、化合物8 （2.0 mg）、化合物9 （4.0 mg）.3 结构鉴定化合物1为淡黄色油状物（图1），分子式为C10H14O3.经HR‐ESI‐MS分析得出m/z= 183.200 4 ［M‐H］+，1H‐NMR （CDCl3， 400 MHz，δH）：9.58 （1H，s，H‐6），7.21 （1H，d，J= 3.6 Hz，H‐4），6.47 （1H，d，J= 3.5 Hz，H‐3），6.24 （3H，q，J = 8 Hz， H‐8）， 4.77 （1H， dd，J = 7.5， 5.8 Hz，H‐1′），1.85 （2H，m，H‐2′），1.38 （2H，m，H‐3′）， 1.33 （2H， m， H‐4′）， 0.91 （3H， t，J = 7.0 Hz， H‐2′）；13C‐NMR （100 MHz， CDCl3，δC）：152.1 （C‐2）， 108.5 （C‐3）， 125.2 （C‐4）， 164.9 （C‐5）， 177.6 （C‐6）， 66.1 （C‐1′）， 35.5 （C‐2′），27.4 （C‐3′）， 22.4 （C‐4′）， 14.0 （C‐5′）.以上数据与文献［9］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物1为IrpexIacte C.化合物2为淡黄色油状物，分子式为C12H16O4.经HR‐ESI‐MS分析得出m/z=225.186 2 ［M‐H］+，1H‐NMR （CDCl3，400 MHz，δH）：7.23 （1H，d，J= 3.5 Hz，H‐3′），6.24 （1H，d，J= 3.6 Hz，H‐4″），4.84 （1H，q，J= 6.9 Hz，H‐2），2.74 （2H，t，J= 7.6 Hz，H‐1″），2.50 （2H，t，J= 7.2 Hz， H‐3″）， 2.14 （3H， s， H‐5″）， 2.02~1.9356第 1 期黄磊等：金刚纂内生真菌Irpex sp.的次生代谢产物研究（2H ， m ， H‐2″）， 1.47 （3H ， d ， J = 6.9 Hz ， H‐3）；13C ‐NMR （100 MHz ， CDCl 3，δC ）： 191.3 （C ‐1），69.8 （C ‐2）， 22.3 （C ‐3）， 149.9 （C ‐2′）， 122.9 （C ‐3′）， 109.1 （C ‐4′）， 163.0 （C ‐5′）， 27.6 （C‐1″），22.7 （C‐2″）， 42.5 （C‐3″）， 209.8 （C‐4″）， 30.2 （C‐5″）.以上数据与文献［9］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物2为IrpexIacte D.化合物3为无色油状物，分子式为C 10H 12O 3. 经HR ‐ESI‐MS 分析得出m /z=181.157 6 ［M ‐H ］+， 1H ‐NMR （CDCl 3， 400 MHz ，δH ）： 9.52 （1H ， s ，H ‐1）， 7.17 （1H ， d ， J = 3.5 Hz ， H ‐3）， 6.26 （1H ， d ， J = 3.5 Hz ， H‐4）， 2.75 （2H ， t ， J = 7.5 Hz ， H‐6）， 2.50 （2H ， t ， J = 7.2 Hz ， H‐8）， 2.14 （3H ， s ， H ‐10）， 1.99 （2H ， m ， H ‐7）； 13C ‐NMR （100 MHz ， CDCl 3， δC ）： 177.2 （C ‐1）， 152.1 （C‐2）， 123.6 （C‐3）， 109.2 （C‐4）， 163.0 （C‐5）， 27.7 （C ‐6）， 21.7 （C ‐7），42.5 （C ‐8）， 208.0 （C‐9）， 30.2 （C‐10）.以上数据与文献［10］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物3为5‐（4‐Oxopentyl ）furan‐2‐carbaldehyde.化合物4为无色油状物，分子式为C 29H 42O. 经HR‐ESI‐MS 分析得出 m /z =407.134 2 ［M ‐H ］+， 1H ‐NMR （CDCl 3， 400 MHz ，δH ）： 6.60 （1H ， d ，J = 9.5 Hz ， H ‐6）， 6.02 （1H ， d ， J = 9.5 Hz ， H ‐7）， 5.73 （1H ， s ， H ‐4）， 5.26 （1H ， dd ， J = 15.1， 7.0 Hz ， H ‐23）， 5.19 （1H ， dd ， J = 15.3， 7.7 Hz ， H ‐22）， 2.54 （2H ， m ， H ‐2）， 2.37 （2H ， m ， H ‐15）， 2.13 （1H ， m ， H ‐9）， 2.09 （1H ， m ， H‐20）， 2.03 （2H ， m ， H‐1）， 1.77 （H ， m ， H‐24），1.72 （1H ， m ， H ‐11A ）， 1.65 （1H ， m ，H ‐11B ）， 1.69 （1H ， m ， H ‐12A ）， 1.25 （1H ， m ， H ‐12B ）， 1.76 （1H ， m ， H ‐16A ）， 1.53 （1H ， m ， H ‐16B ）， 1.48（1H ， m ， H ‐25）， 1.24 （1H ， m ， H ‐17）， 1.22 （2H ， m ， H ‐28）， 1.07 （3H ， d ， J = 6.2 Hz ， H‐21）， 0.98 （3H ， s ， H‐19）， 0.95 （3H ， s ， H‐18）， 0.93 （3H ， d ， J = 6.9 Hz ， H ‐26）， 0.92 （3H ， d ， J = 7.3 Hz ， H ‐27）， 0.83 （3H ， t ， J = 6.2 Hz ， H ‐29）； 13C ‐NMR （100 MHz ， CDCl 3，δC ）： 34.3 （C ‐1）， 19.0 （C ‐2）， 199.8 （C ‐3）， 123.0 （C ‐4）， 164.7 （C ‐5）， 124.5 （C ‐6）， 134.2 （C ‐7）， 124.6 （C ‐8）， 44.5 （C ‐9）， 36.9 （C ‐10）， 25.5 （C ‐11）， 34.2 （C ‐12）， 44.1 （C ‐13）， 156.3 （C ‐14）， 35.7 （C‐15）， 27.8 （C‐16）， 55.9 （C‐17）， 16.8 （C‐18）， 19.1 （C ‐19）， 39.4 （C ‐20）， 21.4 （C ‐21）， 132.7 （C ‐22）， 135.1 （C ‐23）， 43.0 （C ‐24）， 33.2 （C‐25）， 19.8 （C‐26）， 20.1 （C‐27）， 29.8 （C‐28）， 17.8 （C‐29）.以上数据与文献［11］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物4为22‐tetraen‐3‐one.化合物5为淡黄色油状物，分子式为C 15H 20O 4.经HR‐ESI‐MS 分析得出 m /z=265.160 9 ［M‐H ］+， 1H ‐NMR （CDCl 3， 400 MHz ，δH ）： 4.68 （1H ， d ，J = 17.9 Hz ， H ‐11A ）， 4.38 （1H ， d ， J = 17.9 Hz ， H ‐11B ）， 4.58 （1H ， d ， J = 9.0 Hz ， H ‐4）， 3.28 （1H ， s ， H ‐10）， 2.60 （1H ， m ， H ‐7）， 1.90 （1H ， m ， H ‐6）， 1.83 （2H ， m ， H ‐5）， 1.80 （1H ， m ， H ‐8A ）， 1.66 （1H ， dd ， J = 13.8， 9.1 Hz ， H ‐8B ）， 1.17 （3H ， s ， H ‐15）， 1.09 （3H ， s ， H ‐14）， 0.95 （3H ， d ， J = 6.7 Hz ， H ‐13） ；7894561O OHO 1234562'5'3'4'1'2O 1234'5'2'2''5''3''4''1''OHO 1'O 3'3OO 12345698710O图 1 金刚纂内生真菌Irpex sp. 次生代谢产物的化学结构57第 45 卷宁夏大学学报（自然科学版）13C‐NMR （100 MHz，CDCl3，δC）：67.6 （C‐1），156.3 （C‐2），129.3 （C‐3），66.5 （C‐4），36.0 （C‐5）， 29.1 （C‐6）， 47.7 （C‐7），43.8 （C‐8）， 38.3 （C‐9）， 77.9 （C‐10）， 70.1 （C‐11）， 174.6 （C‐12），19.9 （C‐13）， 24.7 （C‐14）， 27.1 （C‐15）.以上数据与文献［12］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物5为Irlactin L.化合物6为淡黄色油状物，分子式为C15H20O3.经HR‐ESI‐MS分析得出m/z=249.024 4 ［M‐H］+，1H‐NMR （CDCl3，400 MHz，δH）：5.91 （1H，s，H‐10）， 4.95 （1H， d，J = 15.9 Hz， H‐11A）， 4.77 （1H，m，H‐11B），4.79 （1H，m，H‐4），3.14 （1H， dd，J = 7.5， 7.6 Hz， H‐7）， 2.22 （1H， m，H‐5A），1.99 （1H，m，H‐5B），2.02 （1H，m，H‐6）， 1.85 （1H， dd，J = 7.8， 12.6 Hz， H‐8A），1.59 （1H， dd，J = 10.0， 12.5 Hz， H‐8B）， 1.15 （3H， s， H‐15）， 1.07 （3H， s， H‐14）， 0.98 （3H，d，J= 7.3 Hz，H‐13）；13C‐NMR （100 MHz，CDCl3，δC）：134.2 （C‐1），151.5 （C‐2），126.0 （C‐3），65.6 （C‐4），39.6 （C‐5），32.0 （C‐6），51.8 （C‐7），43.8 （C‐8），44.6 （C‐9），147.5 （C‐10），70.0 （C‐11），175.7 （C‐12），13.7 （C‐13）， 27.0 （C‐14）， 28.8 （C‐15）.以上数据与文献［13］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物6为Irlactin K.化合物7为淡黄色油状物，分子式为C15H22O3.经HR‐ESI‐MS分析得出m/z=251.102 2 ［M‐H］+，1H‐NMR （CDCl3，400 MHz，δH ）：4.76 （1H，m，H‐4），4.69 （2H，s，H‐11），2.92 （1H，dd，J= 9.7，19.4 Hz，H‐1），2.23 （1H，m，H‐7），2.16 （1H， m， H‐6）， 2.09 （1H， m， H‐5A）， 1.69 （1H，m， H‐5B）， 1.73 （1H， m， H‐10A）， 1.43 （1H， m，H‐10B），1.48 （2H，m，H‐8），1.04 （3H，s，H‐14）， 1.03 （3H， s， H‐15）， 0.96 （3H， d，J = 6.6 Hz，H‐13）；13C‐NMR （100 MHz，CDCl3，δC）：37.5 （C‐1），167.1 （C‐2），128.8 （C‐3），65.8 （C‐4）， 42.8 （C‐5）， 29.4 （C‐6）， 48.0 （C‐7）， 43.2 （C‐8）， 37.8 （C‐9）， 44.2 （C‐10）， 71.2 （C‐11），175.2 （C‐12）， 15.5 （C‐13）， 31.0 （C‐14）， 30.4 （C‐15）.以上数据与文献［14］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物7为Irlactin I.化合物8为淡黄色油状物，分子式为C15H22O4.经HR‐ESI‐MS分析得出m/z=267.121 1 ［M‐H］+，1H‐NMR （CDCl3，400 MHz，δH）：2.81 （1H，dd，J=9.3，19.7Hz，H‐1），2.73 （1H，dd，J=3.8，16.4，H‐4a），2.44 （1H，dd，J=5.8，13.6 Hz，H‐4b）， 3.83 （1H，s， H‐5）， 2.10 （1H， s， H‐6），2.43 （1H， m， H‐7）， 1.36 （1H， m， H‐8a）， 1.60 （1H，t，J=9.7 Hz，H‐8b），1.74 （2H，dd，J= 7.9， 13.1 Hz， H‐9），4.61 （2H， m， H‐11）， 1.01 （1H， d，J =7.0 Hz， H‐13）， 1.06 （3H， s， H‐14），3.41 （2H， s， H‐15）；13C‐NMR （100 MHz， CDCl3，δC）：37.7 （C‐1），164.0 （C‐2），122.9 （C‐3），28.6 （C‐4），72.9 （C‐5），40.0 （C‐6），40.7 （C‐7），40.1 （C‐8），41.6 （C‐9），38.8 （C‐10），70.6 （C‐11）， 175.1 （C‐12）， 11.7 （C‐13）， 26.3 （C‐14）， 71.6 （C‐15）.以上数据与文献［15］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物8为Davotremulane B.化合物9为淡黄色油状物，分子式为C15H22O3.经HR‐ESI‐MS分析得出m/z=251.098 5 ［M‐H］+，1H‐NMR （CDCl3，400 MHz，δH）：2.33 （1H，m，H‐4A），2.61 （1H，m，H‐4B），1.51 （1H，m，H‐5A）， 1.49 （1H， m， H‐5B）， 2.16 （1H， m， H‐6），2.33 （1H，m，H‐7），1.59 （2H，m，H‐8），1.73 （1H，d，J= 6.5 Hz，H‐10A），1.78 （1H，m，H‐10B）， 4.82 （1H， tt，J = 9.2， 18.3 Hz， H‐11A），4.63 （1H， ddd，J = 1.3， 2.6， 17.0 Hz， H‐11B），0.93 （3H，d，J= 7.2 Hz，H‐13），1.14 （3H，s，H‐14）， 1.00 （3H， s， H‐15）；13C‐NMR （100 MHz，CDCl3，δC）：81.4 （C‐1），167.6 （C‐2），124.2 （C‐3）， 23.2 （C‐4）， 27.8 （C‐5）， 32.9 （C‐6）， 57.6 （C‐7）， 40.3 （C‐8）， 36.9 （C‐9）， 54.7 （C‐10）， 72.3 （C‐11）， 177.0 （C‐12）， 22.8 （C‐13）， 31.0 （C‐14），30.4 （C‐15）.以上数据与文献［16］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物9为（+）‐（1R，6S，7S）‐Tremul‐2‐ene‐12（11）‐lactone.4 抑菌活性的测定以氨苄青霉素钠为阳性对照品，测定化合物1-化合物9对金黄色葡萄球菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）的抑菌活性.以叶枯唑为阳性对照品，测定化合物1-化合物9对烟草野火病菌（Pseudomonas syringae pv.Tabaci）、烟草青枯菌（Ralstonia solanacearum）的抑菌活性.阴性对照均为LB液体培养基.将上述4种供试菌株进行活化，选择对数生长期的实验菌种，并稀释至质量浓度为1×108 CFU/mL.取一定质量的化合物1-化合物9（质量分别为2.5，2.5，3.0，1.5，15.0，7.0，1.0，1.0，1.0 mg），用1 mL58第 1 期黄磊等：金刚纂内生真菌Irpex sp.的次生代谢产物研究氘代DMSO溶解.采用二倍稀释法，用LB液体培养基将上述溶液稀释成6个梯度，每个梯度设3个复孔（50 μL菌液-50 μL化合物溶液），加于96孔板.金黄色葡萄球菌和大肠杆菌在37 ℃培养，烟草野火病菌和烟草青枯菌在28 ℃培养，培养时间均为12~24 h.用酶标仪在595 nm处测量各混合溶液的光密度D，每个实验平行测定3次.化合物的抑菌活性强弱用最小抑菌质量浓度（ρ），即100%抑制细菌生长时的质量浓度表示（表1）.5 讨论对金刚纂（Euphorbia neriifolia L.）内生真菌Irpex sp.液体发酵次生代谢产物进行提取与分离，共得到9个化合物：IrpexIacte C （1）、IrpexIacte D （2）、5‐（4‐Oxopentyl）furan‐2‐carbaldehyde （3）、22‐tetraen‐3‐one （4）、Irlactin L （5）、Irlactin K （6）、Irlactin I （7）、Davotremulane B （8）、（+）‐（1R，6S，7S）‐Tremul‐2‐ene‐12（11）‐lactone （9），其中，3个为呋喃衍生物、1个为甾醇类化合物、5个为倍半萜化合物；化合物3，4，8，9 为首次从耙齿菌属Irpex sp.中分离得到.对分离得到的化合物进行体外抗菌活性测定，结果显示，除了化合物6外，其他8个化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、烟草野火病菌和烟草青枯菌均有一定的抑制作用，这为药用植物内生菌的研究及耙齿属Irpex sp.的研究提供了参考.参考文献：［1］ZHAO J， SHAN T， MOU Y， et al. Plant-derived bio‐active compounds produced by endophytic fungi［J］.Mini Rev Med Chem， 2011， 11（2）： 159-168.［2］WEI Guangfei，DONG Linlin，YANG Juan，et al.Integrated metabolomic and transcriptomic analysesrevealed the distribution of saponins in Panax notogin⁃seng［J］.Acta Pharm Sin B， 2018，8（3）： 458-465.［3］解举民，刘雅然，陈梦迪，等.青蒿素药理功能研究进展［J］.中医药学报，2022，50（8）：96-100.［4］杜慧娟，王伯初，米鹏程，等.药用植物内生真菌的分离及抗菌活性的初步研究［J］.氨基酸和生物资源，2008，30（1）： 61-64.［5］张祺玲，杨宇红，谭周进，等.植物内生菌的功能研究进展［J］.生物技术通报，2010（7）： 28-34.［6］桑已曙，史海明，贾靓，等.金刚纂的化学成分［J］.中国天然药物，2005，3（1）： 31-33.［7］李云芳，田学军，杨光忠，等.金刚纂化学成分研究［J］.华东师范大学学报（自然科学版），2008，42（3）：396-399.［8］陈玉，田学军，李云芳，等.金刚纂萜类成分研究［J］.药学学报，2009，44（10）： 1118-1122.［9］DUAN Xiaoxiang，QIN Dan，SONG Hongchuan，et al.Irpexlacte A-D，four new bioactive metabolites ofendophytic fungus Irpexlacteus DR10-1 from the water‐logging tolerant plant Distylium chinense［J］.Phytoch‐mistry Letters， 2019， 32： 151-156.［10］HE Dongbing，BAI Xue，MA Yuhan，et al.One new nucleoside and three furanpentanone derivativesfrom the aerial part of Rubia cordifolia L［J］. Phyto‐chmistry Letters， 2021， 41： 125-128.［11］IBRAHIM S R M， ELKHAYAT E S， MOHAMEDG A，et al.Aspernolides F and G，new butyrolac‐tones from the endophytic fungus Aspergillus terreus［J］. Phytochemistry Letters， 2015， 14： 84-90.［12］DING Jianhai，LI Zhenghui，FENG Tao，et al.Two new sesquiterpenes from cultures of the fungusIrpex lacteus［J］.Journal of Asian Natural Prod‐ucts Research，2020.https：///10.1080/10286020.2020.1737857.［13］DING Jianhai，LI Zhenghui，FENG Tao，et al. A Sesquiterpene Lactone from Irpex lacteus［J］.Chem‐istry of Natural Compounds， 2020， 56：403-405.［14］DING Jianhai，LI Zhenghui，FENG Tao，et al.Tremulane sesquiterpenes from cultures of the basidio‐mycete Irpex lacteus［J］.Fitoterapia，2018，125：245-248.［15］GUO Zhiyong， LI Xueshuang， ZHANG Liang， et al.Cytotoxic tremulanes and 5，6-secotremulanes，fournew sesquiterpenoids from a plant-associated fungusX1-2［J］.Natural Product Research，2016，30（22）：2582-2589.［16］WU Xiuli， LIN Sheng， ZHU Chenggen， et al. Homo-and heptanor-sterols and tremulane sesquiterpenesfrom cultures of Phellinus igniarius［J］. Journal of Natu‐ral Products， 2010， 73（7）：1294-1300.表1 化合物1-化合物9的抑菌活性样品化合物1化合物2化合物3化合物4化合物5化合物6化合物7化合物8化合物9ρ/（mg·mL-1）烟草野火病菌1.25>1.25>1.50>0.75>7.50>3.50>0.50>0.50>0.50烟草青枯菌1.251.251.50> 0.75> 7.50> 3.50> 0.50> 0.50> 0.50金黄色葡萄球菌0.625~1.250.625~1.250.750~1.50>0.757.50>3.500.25~0.500.25~0.500.50大肠杆菌>1.251.251.500.753.75~7.50>3.50>0.500.500.50（下转第68页）59第 45 卷宁夏大学学报（自然科学版）Gene Cloning and Sequence Analysis of P80 Lipoprotein from Four Strains of Mycoplasma synoviaeTian Xingmiao 1， Guo Lei 2， Wang Jianlin 1， Dai Shasha 1， Si Duoduo 1， Gong Zhenxing 1， Li Jidong 1*（1. School of Agriculture ， Ningxia University ， Yinchuan 750021， China ；2. Ningxia Xiaoming Agriculture and Animal Husbandry Co.， Ltd.， Yinchuan 750011， China ）Abstract: To investigate the function and diversity within the P80 lipoprotein family of Mycoplasma synoviae （MS ）， genes encoding P80-1， P80-2， and P80-3 proteins were amplified from four MS isolates using PCR and sequenced. Bioinformatics methods were applied to analyze the protein sequences of the P80 family lipopro‐teins ， identify their conserved structural domains and antigenic epitopes ， and predict their functions. The results indicated that the P80 family lipoproteins were basic ， hydrophilic ， stable proteins ， with a strong hydro‐phobic region at the N -terminus ； only the P80-2 protein had a transmembrane helix region. The positions of the signal peptides and hydrophobic regions of the P80 family lipoproteins are consistent ； the three P80 proteins share 12 conserved structural domains and have 2 to 4 distinct structural domains ； there are 31 to 32 antigenic epitope sites ； their secondary structures are primarily composed of α-helices and random coils ； and the tertiary structure predictions show that the P80-1 protein may function as an ABC transporter ， the P80-2 protein as a periplasmic binding protein type II ， and the P80-3 protein is associated with cell adhesion functions. These find‐ings provide a reference for further research into the function of the MS P80 family lipoproteins ， as well as insights into MS pathogenic mechanisms ， pathogen diagnosis ， and vaccine development.Key words: Mycoplasma synoviae ； P80 family lipoproteins ； gene cloning ； sequence analysis（责任编辑、校对 高继红）Study on the Secondary Metabolites of Endophytic Fungus Irpex sp. fromEuphorbia neriifolia L.Huang Lei ， Qiu Shiyu ， Lu Songmei ， Chen Shiwei ， Wei Jirui ， Zhou Min *（Key Laboratory of Chemistry in Ethnic Medicinal Resource ， State Ethnic Affairs Commission and Ministry of Education ，Yunnan Minzu University ， Kunming 650500， China ）Abstract: Through analytical methods such as silica gel column chromatography and semi -preparative high performance liquid chromatography ， the liquid fermentation products of the endophytic fungus Irpex sp. from Euphorbia neriifolia L. were extracted and separated ， yielding nine compounds. These were identified as Irpexlacte C （1）， Irpexlacte D （2）， 5-（4-Oxopentyl ）furan -2-carbaldehyde （3）， 22-tetraen -3-one （4）， Irlactin L （5）， Irlactin K （6）， Irlactin I （7）， Davotremulane B （8）， and （+）-（1R ，6S ，7S ）-Tremul -2-ene -12（11）-lactone （9）， among which three were furan derivatives ， five were sesquiterpenes ， and one was a sterol compound. Compounds 3， 4， 8， and 9 were isolated from the genus Irpex sp. for the first time.Key words: Euphorbia neriifolia L .； Irpex sp.； sesquiterpenoids（责任编辑、校对 高继红）（上接第59页）68。
内生真菌Penicillium polonicum次生代谢产物研究选用PDB培养基发酵菌株，对内生真菌Penicillium polonicum次生代谢产物进行化学成分研究。
结合运用凝胶SephadexLH-20 柱色谱、反相柱色谱和制备HPLC 等多种色谱技术的方法从菌液的乙酸乙酯萃取物中分离鉴定了6个化合物，采用波谱学方法鉴定其结构分别为[3，5-二羟基-2-（7-羟基-辛酰）]-苯乙酸乙酯（1），（3，5-二羟基-2-辛酰）-苯乙酸乙酯（2），（5，7-二羟基-9-庚基）-异苯二氢吡喃-3-酮（3），3-（羟甲基）-4-（1E ）-1-丙烯-1-基-（1R，2S，5R，6S）-7-氧双环[4.1.0]庚-3-烯-2，5-二醇（4），（E）-2-甲氧基-3-（1-丙烯基）苯酚（5），对羟基苯乙醇（6）。
标签：PDB培养基；内生真菌Penicillium polonicum；次生代谢产物目前，内生真菌的研究受到了广泛关注，从中寻找活性成分日益成为研究热点。
研究表明，内生真菌次级代谢产物的种类繁多，包括生物碱类、甾体类、萜类、苯并吡喃和苯并呋喃类、香豆素和异香豆素类、醌类、黄酮类、酚和酚酸类、内酯类、脂肪族化合物、氨基酸和肽类等，而且药理活性广泛，主要表现为抗肿瘤、抗菌、抗病毒、杀虫、抗结核、抗氧化等作用[1-2]。
此外，目前已经从植物内生真菌这一丰富资源中分离并鉴定了诸多有价值的生理活性物质，如紫杉醇、赤霉素、喜树碱、长春新碱等[3]；表明从植物内生真菌代谢产物中寻找有效的药物分子来替代对植物资源开采的可能性。
豆科仪花属包括2种植物，即仪花Lysidicie rhodostegia Hance和短萼仪花L. brevicalyx Wei。
本课题组曾对仪花L. rhodostegia ——单刀根的化学成分进行了较为系统的研究，从中分离得到间苯三酚、二苯乙烯、黄酮类等酚类成分。
同时，本课题组亦从单刀根中分离得到一系列内生真菌，其中内生真菌Penicillium polonicum 菌株显示对多种肿瘤细胞（人结肠癌细胞，人肝癌细胞，人肺癌细胞和人卵巢癌细胞等）均具有抑制活性，IC50范围在2.04～3.95 mg·L-1。
