脑创伤模型大鼠脑组织中 SBD P145和 SBD P120的水平测定

。６８。　主垦塞旦　丝　蓥查　生　旦筮　鲞箜　期Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｒａｃｔｉｃａ１　Ｎｅｒｖｏｕｓ　Ｄｉ　。ｓ　Ｍａｙ．２０１　５，Ｖ。１．１８　Ｎ。．１０　的手术治疗［Ｊ］．中国矫形外科杂志，２ｏ１０，１２：ｌ　０５６．　［７］周强．颅骨骨折在脑外伤促新骨形成过程中的作用及机制研　究［Ｄ］．第二军医大学，２００９．　［ｉｏ］　［８］　曾明军，朱立新，刘成龙，等．损伤控制骨科策略救治严重多发　伤伴骨折患者疗效分析［Ｊ］．中国现代医学杂志，２０１ｌ，２１（２４）：　３　０３７—３　０４０．　［９］莫宙耘．含ＮＧＦ、ＮＴ一３、ＢＤＮＦ的聚乳酸羟基乙酸（ＰＬＧＡ）　

微球对ＳＤ大鼠坐骨神经损伤修复的实验研究［Ｄ］．中南大学，　２Ｏ１３．　Ｅｐｐｌｅｙ　ＢＬ，Ｓｎｙｄｅｒｓ　ＲＶ，Ｗｉｎｄｅｌｍａｎｎ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｎｅｒｖｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｏｎ　ｃｒａｎｉｏｆａｃｉａｌ　ｏｎｌａｙ　ｂｏｎｅ　ｇｒａｆｔ　ｓｕｒｖｉｖａｌ：ｐｒｅ—　ｌｉｍｉｎａｒｙ　ｆｉｎ出ｎｇｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｒａｎｉｏｆａｅ　Ｓｕｒｇ，１９９２，２（４）：１７４　１８０．　（收稿２０Ｉ４－０７　０６）　

脑创伤模型大鼠脑组织中ＳＢＤＰ１　４　５和ＳＢＤＰ１　２０的水平测定　黄　锐　湖北襄阳市中医院神经外科襄阳４４１０００　

【摘要】　目的检测大鼠重型颅脑损伤模型脑组织中ＳＢＤＰ１４０和ＳＢＤＰ１２０浓度，分析其在创伤急性期释放趋势。方法　随机将７Ｏ只成年雄性ＳＤ大鼠分为对照组（假手术组）ｌＯ只，重型脑损伤组６Ｏ只，于模型制作成功后处死小鼠，制备脑组织　匀浆，所有标本均采用酶联免疫吸附剂测定分析方法进行检测ＳＢＤＰＳ的浓度。结果　ＳＢＤＰ１４５和ＳＢＤＰ１２０浓度，在不同的　时间点上实验组明显高于对照组，ＳＢＤＰ１４５在伤后６　ｈ就能够检测到明显变化，而ＳＢＤＰ１２０直到到伤后７２　ｈ才有明显的升　高。结论创伤性脑损伤脑组织中的ＳＢＤＰＳ与脑损伤的严重性有关。　【关键词】创伤性脑损伤；ＳＢＤＰＳ　【中图分类号】Ｒ一３３２　【文献标识码】Ｂ　【文章编号１　１６７３—５１１０（２０１５）１０—００６８—０２　

ＭＩ—ｓｐｅｃｔｒｉｎ大量存在于在神经元的轴突和突触前末梢，　能够被ｃａｌｐａｉｎ分解为ＳＢＤＰ１５０和ＳＢＤＰ１４５，被ｃａｓｐａｓｅ一３分　解为ＳＢＤＰ１２Ｏ。由于ｃａｌｐａｉｎ和ｃａｓｐａｓｅ一３是脑缺血和脑损　伤发生时促进细胞凋亡坏死的重要因子［　，因此ｓＢＤＰｓ（　ＩＩ—　ｓｐｅｃｔｒｉｎ　ｂｒｅａｋ　ｄｏｗｎ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）可能与颅脑损伤造成的脑细　胞损害存在着联系，可以成为一种脑损伤的标志物。本研究　检测了大鼠重型颅脑损伤ＣＳＦ中ＳＢＤＰ１４５和ＳＢＤＰｌ２０浓　度，分析其在创伤急性期释放趋势。　

１资料和方法　１．１实验动物及分组　健康成年雄性ＳＤ大鼠７Ｏ只（湖北　省实验动物中心提供），体质量２５０～３００　ｇ，随机分为对照组　（假手术组）１０只，实验组（重型脑损伤组）６０只。　１．２大鼠脑挫裂伤模型制作方法　以氯胺酮按照６０　ｍｇ／　腹腔内注射麻醉大鼠后，大鼠脑立体定位仪固定大鼠头　部，剪去顶部皮毛，消毒皮肤后，正中切开顶部头皮，剥离骨　膜显露左顶骨，于中线左侧旁开约３　ｍｍ，前囱后约２　ｍｍ处　用开直径５　ｍｍ圆形骨窗，保持硬膜完整。采用自由落体打　击装置，以４０　ｇ砝码于２５　ｃｍ高处通过金属导杆落下，撞击　置于硬脑膜上的圆锥上致重型脑挫裂伤，骨蜡封闭骨窗，缝　合头皮。　１．３标本制备分别于模型制作成功后６　ｈ、１２　ｈ、２４　ｈ、４８　ｈ、７２　ｈ、１２０　ｈ迅速断头处死小鼠，各时间点处死１Ｏ只，制备　脑组织匀浆，取挫伤的大脑组织（去除小脑和延髓部分），称　重后移入玻璃匀浆管中，加人９倍体积的预冷生理盐水，４℃　条件下充分研碎匀浆，制备１Ｏ　匀浆，离心机４　０００　ｒｐｍ离　心１０　ｍｉｎ，取上清液，一８Ｏ℃冻储存。　１．４检测方法　所有标本均采用酶联免疫吸附剂测定分析　方法ＥＩ　ＳＩＳＡ的方法进行检测，用抗大鼠ＳＢＤＰ１４５、ＳＢ—　ＤＰ１２０单抗分别包被于酶标板上，标准品和样品中的ＳＢ—　ＤＰ１４５、ＳＢＤＰ１２０与单抗结合，加入生物素化的抗人ＳＢ—　ＤＰ１４５、ＳＢＤＰ１　２Ｏ形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化　物酶标记的Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ与生物素结合，加入底物工作液显　蓝色，最后加终止液，在４５Ｏ　ｎｍ处测ＯＤ值，ＳＢＤＰ１４５、ＳＢ—　ＤＰ１２０浓度与０Ｄ值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本　中ＳＢＤＰ１４５、ＳＢＤＰ１２Ｏ浓度。　１．５统计学分析所有数据分析均使用ＳＰＳＳ　１７．０，计量资　料以均数±标准差表示，比较Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ检验，２组或３　组间的数值比较采用Ｋｒｕｓｋａｌ—Ｗａｌｌｉｓ检验，Ｐ＜０．０５差异有　统计学意义。　２　结果　本次研究共包括６Ｏ只重型颅脑损伤大鼠模型作为实验　组，１０只假手术模型作为对照组，实验组所有患者ＳＢＤＰ１４５　和ＳＢＤＰ１２０的平均浓度明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）（表１）。　ＳＢＤＰ１４５的释放方式明显不同于ＳＢＤＰ１２０，ＳＢＤＰ１４５在伤　后６　ｈ就能够检测到明显的变化，而ＳＢＤＰ１２０在伤后在其变　化不明显，直到到伤后７２　ｈ达到峰值（图１）。　

表１　实验组各时间点和对照组ＳＢＤＰ１４５和ＳＢＤＰ１２０的浓度比较　（ｎｇ／ｍＬ）　

图１　实验组各时间点和对照组ＳＢＤＰ１４５　和ＳＢＤＰ１２Ｏ的浓度曲线　

３讨论　目前，在创伤性脑损伤发生早期对创伤的严重性和预后　进行预测，仍没有十分确切的办法，临床中经常应用的一些　措施如ＧＣＳ评分等，虽然应用多年，且经过很多临床试验的　研究检验，但仍有一些局限性。近年来，几种胶质细胞或神　经元合成的蛋白被认为可以作为中枢神经细胞损伤的标记　物，但没有临床应用的充分证据，这些标志物如ＮＳＥ、Ｓ１００、　ＵＣＨ—Ｌ１等，ＮＳＥ被认为可以用来评估脑细胞的损害，但代　谢时间较长，难以评估原发性损伤的程度，且难以区分原发　性和继发性损伤，且受到血细胞溶血的影响。ｓ１（）（）研究较　充分，并且与ＧＣＳ评分和神经影像学表现相关性较高，然而　中国实用神经疾病杂志２０１５年５月第１８卷第ｉ０期　Ｃｈｉ　！！！　ｒｎ　！　翌　！　！！　！！　！！！　：　：　！！：　：　・６９。　其特异性不高，当其他部位出现损伤时其表达仍然增多　。　最近的研究表明ＵＣＨ—Ｉ　１在重型颅脑损伤患者的ＣＳＦ中浓　度明显增高，而且与脑损伤程度ＧＣＳ、ＣＴ、６周内的致死率有　相关叫。　许多研究者认为出现创伤性脑损伤时，ＳＢＤＰＳ可以作为　一种潜在的标志物，Ｂｒｏｐｈｙ等人ｌＥ　进行了脑脊液的动力学　分析，认为在创伤性脑损伤急性期与ｃａｓｐａｓｅ一３相比ｃａｌｐａｉｎ　介导的细胞凋亡可能起更重要的作用。因此ＳＢＤＰＳ不仅在　脑损伤程度方面能够提供重要的信息，而且能够解释脑细胞　凋亡坏死相关的病理损伤机制，本次研究通过ＥＬＩＳＡ的方　法进一步证实在创伤性脑损伤的病理变化过程中，ｃａｌｐａｉｎ和　ｃａｓｐａｓｅ一３介导的蛋白水解作用其重要的作用，而且ＳＢＤＰＳ　表现的表达水平持续的增高的现象对脑损伤的程度的评估　有很大的帮助。Ｆａｒｋａｓ等人的研究中　］，发现脑脊液中的　ＳＢＤＰＳ的浓度在脑外伤患者中明显高于对照组，Ｐｉｎｅｄａ等　的研究也发现在脑脊液中ＳＢＤＰ１４５的释放形式不同于ＳＢ—　ＤＰ１２０，在我们的研究中，ＳＢＤＰ１４５的最大峰值出现在伤后６　ｈ，而持续时间长，降低缓慢，直到伤后５　ｄ，而ＳＢＤＰｌ２０则在　伤后的浓度变化较慢，在伤后３　ｄ到达峰值，这种现象意味　着，在伤后５　ｄ内细胞凋亡和坏死的机制以不同的形式被激　活。ＭＩ—ｓｐｅｃｔｒｉｎ大量存在于轴突和突触前末梢，而轴突是　容易受到机械性损伤的影响，ＭｃＣｒａｃｋｅｎ等的研究表明　Ｊ，　在创伤性脑损伤的患者中，伤后轴突的迟发性损害可能是由　于蛋白水解酶介导的细胞结构的破坏，尽管一定数量的轴索　在创伤发生时已经断离（原发性损伤），但更多的损伤是有继　发性损害造成的，而且是不可逆的。另外的一些学者认为，　这种轴突神经传导作用的改变能够导至一些酶类如ｃａｌｐａｉｎ　和ｃａｓｐａｓｅ　３的释放，而这种改变进～步促进轴突细胞结构　的破坏　，因此ＳＢＤＰＳ也许能够作为一种轴突损害程度的　标志物。总之，脑组织中的ＳＢＤＰＳ与创伤性脑损伤后有明　显的变化，随着研究的不断深入，ＳＢＤＰＳ可能成为一种对创　伤性脑损伤有临床应用价值的标志物。　

４　参考文献　［１］Ｐｉｎｅｄａ　ＪＡ，Ｉ　ｅｗｉｓ　ＳＢ，Ｖａｌａｄｋａ，ｅｔ　ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｏｆ　ａｌ—　ｐｈａｌＩ—ｓｐｅｃｔｒｉｎ　ｂｒｅａｋ　ｄｏｗｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｉｎ　ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａ１　ｆｌｕｉｄ　ａｆｔｅｒ　ｓｅｖｅｒｅ　ｔｒａｕｍａｔｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ，２００７，２４（３）：　３５４—３６６．　Ｅ２］Ｐａｐａ　Ｌ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ　Ｇ，Ｏｌｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｕｓｅ　ｏｆ　ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ　ｆｏｒ　ｄｉａｇｎｏ—　ｓｉｓ　ａｎｄ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｒａｕｍａｔｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｅｘｐｅｒｔ　Ｏｐｉｎ　Ｍｅｄ　Ｄｉａｇｎ，２００８，２８（７）：１—９．　［３］Ｐａｐａ　Ｌ，Ａｋｉｎｙｉ，Ｌｉｕ　Ｍｃ，ｅｔ　ａ１．Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ　Ｃ—ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅ　ｉｓ　ａ　ｎｏｖｅ１　ｂｉｏｍａｒｋｅｒ　ｉｎ　ｈｕｍａｎｓ　ｆｏｒ　ｓｅｖｅｒｅ　ｔｒａｕｍａｔｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ　［刀．Ｃｒｉｔ　Ｃａｒｅ　Ｍｅｄ，２００９，３８（１２）：１３８—１４４．　ｒ４］Ｆａｒｋａｓ　Ｏ，Ｐｏｌｇａｒ　Ｂ，Ｓｚｅｋｅｒｅｓ—Ｂａｒｔｈｏ，ｅｔ　ａ１．Ｓｐｅｃｔｒｉｎ　ｂｒｅａｋ　ｄｏｗｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ　ｆｌｕｉｄ　ｉｎ　ｓｅｖｅｒｅ　ｈｅａｄ　ｉｎｊｕｒｙ—‘ｐｒｅｌｉｍ。。　ｉｎａｒｙ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｎｅｕｒｏｅｈｉｒ　Ｗｉｅｎ，２００５，１　４７８（４）：　

８５５—８６１．　Ｉｓ］　ＭｃＣｒａｃｋｅｎ　Ｅ，Ｈｕｎｔｅｒ　ＡＪ，Ｐａｔｅ１　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｃａｌｐａｉｎ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　

ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｂｒｅａｋ　ｄｏｗｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｒｐｕｓ　ｃａｌｌｏｓｕｍ　ｏｆ　ｈｅａｄ—　ｉｎｊｕｒｅｄ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ，１　９９９，１６９（３）：７４９—７６１．　［６］Ｐｏｖｌｉｓｈｏｃｋ　ＪＴ，Ｃｈｒｉｓｔｍａｎ　Ｃ、ｖＪ．Ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｒａｕｍａｔｉ—　ｃａｌｌｙ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｘｏｎａｌ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ　ａｎｉｍａｌｓ　ａｎｄ　ｈｕｍａｎｓ：ａ　ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ｔｈｏｕｇｈｔｓＥＪ］．Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ，１９９５，１２４（９）：５５５　５６４．　（收稿２Ｏｌ４－０７－２３）