免疫学原理-第08章 抗体 课堂

• 肥大细胞：参与I型超敏反应 • 嗜碱性粒细胞：参与I型超敏反应 • 嗜酸性粒细胞：抗寄生虫免疫
要点
掌握：固有免疫的概念 掌握：DC、NK、γδ T 、B2细胞的概念 掌握：固有免疫应答与适应性免疫应答的特点比较
NK细胞
• 自然杀伤细胞（natural killer，NK） • 主要分布于外周血、脾脏 • NK细胞不表达T、B细胞的抗原识别受体及其它标志 • 标记：CD56+、 CD16+、TCR-、BCR• NK细胞特点：无需抗原致敏，能自发杀伤某些肿瘤细
胞和病毒感染的细胞，无MHC的限制性。
NK细胞的识别受体：
抑制性受体（killer-cell inhibitory receptor, KIR)，其配体 为MHC I类分子或MHC I类分子与自身抗原肽组成的复合体。 抑制性受体与配体的结合会抑制NK细胞活化。
激活性受体（killer-cell activated receptor, KAR)，广泛识 别结合于自身组织细胞、病毒感染细胞和某些肿瘤细胞表面 的糖类配体。
是巨噬细胞处理和提呈抗原所不能缺少的免疫分子。
重要功能：
吞噬杀伤作用 参与和促进炎症反应 杀伤靶细胞 加工、递呈抗原 免疫调节
在机体防御和来源于细菌等感染性微生物的免疫应答中 发挥重要的作用
吞噬！
吞噬杀伤作用
吞 噬 杀 伤 作 用
加工、递呈抗原
树突状细胞（dend有免疫细胞
吞噬细胞（单个核细胞和中性粒细胞） DC NK细胞 NK T细胞 γδ T细胞 B-1细胞
中性粒细胞（小吞噬细胞）
• 存在部位：血液、炎症部位（全身），是白细 胞中数量最多的一种。
• 功能基础：溶酶体，过氧化物酶及杀菌物质。 • 作用：趋化作用

关于分子大小的要求这一点并不绝对，如人们已 发现砷酸、酪氨酸、赖氨酸取代的2，4－二硝基苯 及胰岛素(分子量约为1500)等小分子量的化合物也 具有免疫原性。
第八章免疫分析(一)
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(3)抗原的免疫原性还与免疫原的分子表层基团有关， 对蛋白质抗原。它还与氨基酸的组成相关。例如， 多聚赖氨酸无免疫原性，在其外层接上一层丙氨酸 或甘氨酸，它仍无免疫原性，但若外层接的是酪氨 酸，则它会表现出免疫原性．由此可见，带芳香环 氨基酸，或者说结构较为复杂的氨基酸对免疫原性 有重要的贡献。

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8.1.2 抗体
抗体是一类统称为免疫球蛋白(Immunoglobulin， 简写为Ig)的蛋白质。是机体免疫力的一类重要物 质基础，也是医学中用于疾病诊断、治疗、预防和 研究发病机理的极为重要的试剂及制剂。抗体的性 能对免疫分析是至关重要的。
第八章免疫分析(一)
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IgG 分子的基本结构
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8. 1.1 抗原
在免疫分析中抗原往往作为被分析的对象出现， 对它的了解包括与抗体制备相关的性质及抗原标 记两个方面。
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基本概念
能引起动物机体特异性免疫应答的化学物质叫 抗原(Antigen, Ag)，通过这种免疫应答所产生的， 能够与抗原发生特异性反应的蛋白质就是抗体 (Antibody, Ab) 。 抗 原 具 有 免 疫 原 性 (Immunogenicity)和抗原性(Antigenicity)两种特性。
通过二抗上结合不同的特异基团或蛋白，如荧光 试剂、辣根过氧化酶等，可以很方便地实现对一抗 结合对象进行分析。
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固相免疫分离

cloned enzyme donor immunoassay
酶放大免疫分析技术 示意图
克隆酶供体免疫分析示意图
克隆β-D半乳糖苷酶的两种片段： 酶受体（EA）和酶供体（ED）
二、异相酶免疫测定
与均相不同 之处
需分离游离与结合的酶标记物
分类：液相酶免疫测定 固相酶免疫测定
Ag+Ab-E
AgAb-E+Ab-E
物、激素等）
1、已知抗体包 被于载体表面
1、已知抗体包 被于载体表面
+
竞争法测抗原
-
E
E
E
3、加酶作用 的底物不显色 或显色弱
E
E
E
2、加待检物 抗原与酶标抗 原竞争与抗体 结合
2、加待测物 和酶标抗原， 酶标抗原与抗 体结合
E
E
3、加酶作用 的底物显色
ELISA检测抗体的方法
间接法
方法
用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标的抗人IgG（抗 抗体或二抗）加底物显色。
底物显色
1、固相化抗人 IgM 2、加待测物 特异性IgM与 非特异性IgM 和抗人IgM结合
1、固相化抗人 IgM
2、加待测物 只有非特异性IgM 和抗人IgM结合
3、加特异性 抗原，与特异 性抗体结合
E E E
3、加特异性抗 原，不能与非 特异性IgM结合
+
E
E
4、加酶标抗体 与特异性抗原结 合，加底物显色
原理
酶标记物与相应的抗原或抗体结合后， 标记酶的活性会发生改变，不用分离结合 和游离酶标记物，通过测定标记酶的活性 的改变，而确定抗原或抗体的含量。
均相酶免疫测定
最具代表性的两种技术

第八章免疫学应用从免疫学诞生伊始，应用性就成为其突兀的特征之一。

疫苗、抗血清、血清学诊断方法在临床医学中的广泛应用即为明证。

随着现代免疫学的发展，所提供的理论、技术、方法在临床医学领域内应用的广度与深度亦与日俱增。

其应用的范围大致可分为免疫诊断、免疫治疗、免疫预防三大领域。

第一节免疫诊断免疫诊断通常包含两重含义，一是指对具有免疫活性（抗原、抗体活性）物质的定性、定量测定；二是指对免疫系统的构成成分（免疫细胞、免疫分子）的数量、状态变化的测定。

前者主要应用各种体外抗原抗体反应检测方法去加以测定；后者则可通过分子生物学、细胞生物学的检测手段加以测定。

相对于其他类型的实验室诊断方法，免疫诊断具有特异性强、敏感性高、简便易行等特点。

一、抗原抗体的检测（一）体外抗原抗体反应的特点在经典的以肉眼观察为主的凝集反应、沉淀反应中，其反应特点主要表现为特异性、可逆性和适合比例性。

1. 特异性抗原抗体反应本质上是抗原决定簇与抗体超变区两者在化学结构与空间构型上的互补结合。

这种互补结合呈现高度特异性，如同锁匙。

但大分子蛋白常可携有多个抗原决定簇，如果两种不同的抗原分子表面恰恰具有相同或空间结构类似的抗原决定簇，则可出现交叉反应。

2. 可逆性抗原抗体结合依赖空间结构互补和诸如电荷引力、电子云引力、氢键、疏水键等弱作用力。

仅为分子表面的结合，呈可逆性。

其结合反应速度与分解反应速度的比值称平衡常数，以K表示。

K值反映了抗原抗体结合的牢固程度，所以抗体亲和力通常以K值表示。

3. 适合比例性以肉眼观察结果的凝集反应、沉淀反应往往要求抗原抗体之间有合适的比例关系方能出现可见的结果。

其原因是呈二价结合能力的抗体与呈多价结合能力的抗原只有在比例关系合适时方能形成足够大的沉淀物析出。

如果抗体数量远多于抗原（抗体过剩），称为“前带现象”；而抗原数量远多于抗体（抗原过剩），称为“后带现象”；均可影响结果的观察。

（二）体外抗原抗体反应的检测方法体外抗原抗体反应的检测通常是指以已知抗原（抗体）测定未知抗体（抗原），其方式主要包括凝集反应（agglutination）、沉淀反应（precipitation）、溶血反应、中和反应等经典的血清学试验和晚近发展起来的免疫标记技术。