结核病 分子生物学检验方法
结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，其传播途径主要为空气飞沫传播。结核病在全球范围内仍然是一个严重的公共卫生问题，因此早期的诊断和治疗非常重要。分子生物学检验方法是一种快速、准确的结核病诊断方法，本文将对其进行详细介绍。
分子生物学检验方法是通过检测结核分枝杆菌的核酸来诊断结核病。与传统的培养分离方法相比，分子生物学检验方法具有更高的灵敏度和特异性。目前常用的分子生物学检验方法包括聚合酶链反应（PCR）和核酸杂交技术。
PCR是一种通过体外扩增目标DNA序列的技术，它可以将微量的目标DNA扩增至足够的数量进行检测。在结核病的分子生物学检验中，PCR可以通过扩增结核分枝杆菌的特异性基因序列来检测其存在。常用的靶基因包括IS6110、16S rRNA和hsp65等。IS6110是结核分枝杆菌特有的序列，在结核分枝杆菌中存在多个拷贝，因此可以提高检测的灵敏度。16S rRNA和hsp65是结核分枝杆菌的保守基因，通过扩增这些基因可以进一步确认结核分枝杆菌的存在。
核酸杂交技术是一种通过标记的探针与目标核酸序列的互补配对来检测目标核酸的方法。在结核病的分子生物学检验中，核酸杂交技术可以通过将结核分枝杆菌的核酸序列与标记的探针进行杂交来检测结核分枝杆菌的存在。常用的核酸杂交技术包括荧光原位杂交（FISH）和线性探针杂交（LPA）等。FISH是一种将荧光标记的探针与靶细胞中的核酸序列进行杂交的方法，通过观察荧光信号的强度和位置可以判断结核分枝杆菌的存在。LPA是一种将线性标记的探针与目标核酸序列进行杂交的方法，通过检测标记的探针与目标核酸序列的杂交产物可以判断结核分枝杆菌的存在。
分子生物学检验方法在结核病的诊断中具有许多优点。首先，分子生物学检验方法可以快速获得结果，通常在几小时内就可以完成检测。其次，分子生物学检验方法具有高度的灵敏度和特异性，可以检测到非常低浓度的结核分枝杆菌。此外，分子生物学检验方法还可以对结核分枝杆菌的耐药性进行检测，从而指导临床上的治疗选择。
结核分枝杆菌特异性细胞因子 (IFN-γ、
IL-2)联合检测在肺外结核诊断中的临床价值
【摘要】 目的：分析结核分枝杆菌特异性细胞因子(IFN-γ、IL-2)联合检测（双因子检测）在肺外结核诊断中的临床应用价值。 方法：对本院2020年11月-2021年9月入院的63例临床诊断为肺外结核的患者以及52例非结核患者进行双因子联合检测、 -干扰素释放试验（T-spot检测）以及PPD检测，对结果进行分析。 结果：对入组的115例患者行双因子联合检测、T-spot检测及PPD检测，对检测结果进行分析得，双因子并联检测、串联检测、T-spot检测和PPD检测灵敏度分别为95.2%、84.1%、93.7%和95.2%；双因子并联检测、串联检测、T-spot检测和PPD检测特异性分别为94.2%、100.0%、98.1%和40.4%。双因子并联检测灵敏度高于T-spot检测，串联检测特异性高于T-spot检测和PPD检测。结论：在肺外结核的诊断中，双因子并联检测的灵敏度高于T-spot检测，使用双阳性为阳性指标的串联检测的特异性高于T=spot和PPD检测。双因子检测在传统 -干扰素释放试验基础上增加了对IL-2的检测，实现了对肺外结核感染的特异性检出，在肺外结核的诊断上有非常重要的临床价值。
【关键词】肺外结核，IFN-γ，IL-2，双因子
结核病是全世界十大死亡原因之一，根据2020年WHO发布的全球结核病报告显示，中国作为全球的30个结核病高负担国家之一，2019年结核病发病率为58/10万人，且新发患者数达到83.3万1,2, 其中很大一部分是肺外结核的患者，相比于肺内结核这一部分患者极易被忽略，是不可忽视的结核病传染源。
目前临床上有关肺外结核的诊断方式大多具有一定的局限性。主要诊断方式包括患者患处组织以及穿刺物的抗酸染色以及结核分枝杆菌培养，结核菌素试验，针对结核分枝杆菌的抗体检测法，荧光定量PCR法，和γ干扰素释放试验等3-7。其中抗酸染色法与结核分枝杆菌培养方法由于患者患处部位组织难取得，且穿刺法对患者会有创伤伤害，取材有一定困难，均存在耗时长的问题，尤其抗酸染色有人为影响的因素。γ干扰素释放试验采集患者外周静脉血进行检测，对刺激后产生分泌γ干扰素的外周血单个核细胞进行定量检测，通过数量来判断患者是否感染了结核分枝杆菌，并且相比结核菌素试验、抗体检测等诊断方法具有更高的灵敏度，但是γ干扰素释放试验结果仅提示结核感染，不能区分活动性结核与潜伏感染，其阳性结果不能确定有活动性结核，因为在我国结核潜伏感染人群较多，其阳性预测值不足5,8。因此一种取材简便，方便快速，准确高效的方法是目前临床诊断肺外结核所需要的。
结核杆菌特异性细胞免疫反应检测(酶联免疫法)临床应用探讨
摘要】目的：探究结核杆菌特异性细胞免疫反应检测(酶联免疫法)临床应用探讨。方法：选取2016年5月到2018年5月间到我院传染科收治的结核病患者45例作为研究对象，将其作为疾病组，另选取同期健康体检人员45名作为对照组，参与本实验的人员均采用结核杆菌特异性细胞免疫反应检测(酶联免疫法)和结核菌特异性抗体检测，对比两种检测方式的诊断准确率、灵敏度和特异度。结果：结核杆菌特异性细胞免疫反应检测的诊断准确率、灵敏度、特异度与结核菌特异性抗体检测结果相比，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：结核杆菌特异性细胞免疫反应检测(酶联免疫法)临床应用效果显著，具有较高的诊断准确率、特异度和灵敏度，该种检查方法值得在临床中广泛推广。
【关键词】结核病；结核杆菌；结核杆菌特异性细胞免疫反应检测
[ 中图分类号 ]R2 [ 文献标号 ]A [ 文章编号 ]2095-7165（2018）24-0034-01
结核病属于一种传染性疾病，我国是结核病高发国家，流行病学统计显示，我国每年结核病患者新增病例大约在150万左右，如何防控结核病已经成为我国社会所重点关注的问题，结核病的爆发将会给社会造成较大的负担，使社会公共卫生受到威胁。想要提高结核病防治效率，关键在于如何高效快速诊断结核病。临床诊断结核病的方法有很多种，例如，γ-干扰素释放试验法：即常用的酶联免疫吸附法以及酶联斑点法，已经取得了较好的临床效[1]。本文主要探究结核杆菌特异性细胞免疫反应检测(酶联免疫法)临床应用效果，报告如下。
1资料与方法
1.1标本来源
将45例我院于2016年1月到2018年1月间接诊的结核病患者进行研究，并将其作为疾病组，另选取45名同期健康体检人员进行对照研究，将其作为对照组，全部患者均采用。疾病组患者中，男性患者为25例，女性患者为20例，患者的年龄为18-58岁，平均年龄为（38.64±3.57）岁，其中伴有空洞的患者为14例，健康组体检人员中，男性患者为24例，女性患者为21例，患者的年龄为19-59岁，平均年龄为（39.06±3.69）岁，两组患者年龄、性别等上述一般资料比较，差异性不显著，统计学意义不存在（P＞0.05）。
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检测分泌r—干扰素T细胞对诊断儿童结核的意义
作者：包丽丽等
来源：《中国医学创新》2013年第17期
【摘要】 目的：探讨分泌r-IFN的结核杆菌特异性T细胞检测对儿童结核感染的诊断意义。方法：用流式细胞术胞内细胞因子（cytokine flow cytometry，CFC）检测法，对结核病患儿41例、潜伏结核感染（latent tuberculosis infection，LTBI）75例、健康儿童20例，测其外周血中分泌r-干扰素（IFN-r）的结核杆菌特异性CD4+T淋巴细胞；同时行结核菌素皮试（TST）和结核抗体检测。结果：（1）CFC检测，41例结核病患儿90.24%阳性，9.76%阴性；健康组1例阳性，说明该检测方法特异性为95%。（2）结核病组CFC阳性率90.24%，TST阳性率70.73%，结核抗体阳性率56.10%，与CFC比较差异均有统计学意义（P
【关键词】 特异性T细胞； 流式细胞术； 结核； 儿童； 诊断
结核菌素皮试（TST）是诊断儿童结核病传统的免疫学诊断方法，但其敏感性和特异性受诸多因素的影响：如非结核分枝杆菌感染有交叉阳性；急性粟粒性肺结核、结核性脑膜炎（TMB）患者可为假阴性反应。培养结核杆菌是诊断结核的金标准，但需要时间长，且阳性率低。因此，寻找新的特异性高、敏感性强、快速的结核感染诊断方法成为儿科医生关注的热点。
Mahairas等在1996年发现的一段存在结核分枝杆菌中名为“RD1”的基因序列[1]，该序列编码产生两种蛋白：早期分泌型抗原靶蛋白（ESAT-6）和培养滤过蛋白10（CFP-10），这两种蛋白作为特异性抗原可刺激机体特异性T细胞产生IFN-r。体外检测IFN-r释放的方法，逐渐成为结核病早期诊断研究的新方向。
本实验通过建立流式细胞术胞内细胞因子检测法（cytokine flow cytometry CFC），检测结核病组、潜伏结核感染组、健康对照组三组外周血分泌r-干扰素（IFN-r）的结核杆菌特异性CD4+T细胞比例。同时将CFC检测法结果与TST、结核抗体结果进行对比分析，探讨CFC检测分泌IFN-r的结核杆菌特异性T细胞在儿童结核病及潜伏结核感染中的诊断价值。
