结构光显微镜(SIM)ppt课件

【实验•探究】练习使用显微镜 二、双目显微镜的操作提示 2.对光调光
1
打开开关，载物台降到最低处、 低倍物镜对准通光孔。
2
调节两个目镜间距离以适应瞳距， 用光源调节旋钮调节视野亮度。
【实验•探究】练习使用显微镜 3.调焦观察
把玻片标本放在载物台上， 1 压片夹压住并正对通光孔。
顺时针转动粗准焦螺旋，使 2 载物台上升至玻片标本尽量
【实验•探究】练习使用显微镜
方法步骤： 1.取镜和安放
取镜：一只手握住镜臂 一只手托镜座放在前胸
安放：显微镜镜座距实验台 边缘大约7厘米
装好目镜和物镜
【实验•探究】练习使用显微镜 一、单目显微镜的操作提示
2.对光调光 转动转换器
低倍镜对准通光孔
大光圈对准通光孔
注视目镜
转动反光镜
2厘米
出现明亮圆形视野
【实验•探究】练习使用显微镜
3.调焦观察
1 玻片正面朝上
2 压片夹压住并正对通光孔
顺时针转动粗准焦螺旋下降 3 镜筒（侧面观察物镜）
4
左眼看目镜，逆时针转动粗 准焦螺旋（镜筒缓慢上升）
5 看见物象微调细准焦螺旋 （使图像变清晰）
⑥如需用更高倍数的物镜 观察，应将要观察的部位 移至中央，再转动转换器 转换物镜，用细准焦螺旋 调焦后观察。
没有螺纹
有螺纹
目镜
物镜
物镜 目镜焦螺旋：使镜筒大幅度升降。
逆时针旋转上升镜筒； 顺时针旋转下降镜筒。
细准焦螺旋：使镜筒小幅度升降。
逆时针旋转上升镜筒； 顺时针旋转下降镜筒。
2.显微镜的机械部分
通光孔：使光线通过
压片夹：固定玻 片标本
转换器：安放和转换物 镜镜头

认识显微镜
1
2
目镜
• 作用：放大物像 • 镜头上标放大倍数
3
镜筒• 安放目镜4Fra bibliotek转换器
• 安放和转换物镜
5
物镜
• 放大物像 • 镜头上标放大倍数 • 低倍物镜较短
6
载物台
• 安放玻片标本 • 有通光孔
7
通光孔
• 使光线通过
8
压片夹
• 固定玻片标本
9
遮光器
• 有大小不同的光圈， 调节穿过通光孔的 光线
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巩固练习：
1.使用显微镜时，取镜要用右手___握_镜__臂____，左手 _托_住__镜__座____，放在自己实验台的偏_左__的位置， 然后安装好__目__镜______。
2.对光时，转动转换器，使_低___倍镜对准 __通_光__孔____，转动遮光器，使一个较大的 ___光__圈___也对准_通__光__孔_____。用_左___眼朝 _目__镜____里注视，_右___眼睁开，然后用手调节 _反__光__镜____，直到看到白亮的视野为止。
试一试：1、比较反光镜两面的差异 2、转换遮光器上的不同光圈，看看视野亮度的变化24
三、安放装片
把所要观察的 玻片标本放在 载物台上，用 压片夹压住， 标本要正对通 光孔
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四、调焦
转动粗准焦螺旋， 顺时针旋转，使镜筒缓 缓下降，直到物镜接近 玻片标本为止
注意：此时眼 睛一定要看着 物镜！
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左眼向目镜内 看，同时逆时针方 向转动粗焦螺旋， 使镜筒缓缓上升直 到看清物像为止。 再略微转动细准焦 螺旋，使看到的物
8
9 10
11 12
1
1目镜
2粗准焦螺旋 2 3细准焦螺旋

距离。
结构光照明技术简介
结构光照明简介
结构光照明技术（structured illumination microscopy，SIM ）
是指将两个高频信号叠加得到低频信号，然后利用低频信号
和已知的一个高频信号还原出未知的高频信号的方法，可以
实现精细结构的高精度检测。
吴美瑞，结构光照明荧光显微成像系统研究，2014
结构光照明原理
那么，为什么要将高频信号转换成低频信号
呢？这种转换又如何实现呢？
我们先来看看转换方法：
根据显微镜成像公式有
()
Ԧ = ()⨂
Ԧ
式中()是样品成的像，
Ԧ
()是样品出射
Ԧ
光的强度分布函数， 是显微镜的点扩散
函数。
吴美瑞，结构光照明荧光显微成像系统研究，2014
结构光照明原理
结构光照明不改变 ，它通过改变入射
光的结构使得 包含由高频信息合成的
低频信息，之后对获得的信号进行反推获得
原高频信息，从而得到清晰的样品图像提高
显微镜的分辨率。
吴美瑞等；激光与光电子学进展，2015，52：01003
结构光照明实例
线粒体
人血管内皮细胞
图片来源于尼康网站
结构光照明的优缺点
优点：
1、SIM具有所需激发光强度小的优点，使SIM更不易导致荧光
剂被漂白或者产生活性氧而损伤细胞样品；
2、SIM还具有结构简单，成像速度快的优势；
3、SIM也可以与与去卷积技术、DIC（微分干涉差）等技术联
用进一步提高分辨率。
Hale Waihona Puke 缺点：SIM的分辨率仍比较低，与STED、STORM等技术相比仍有一段
结构光照明原理

2.转换高倍镜之前要先将观察对象移至视野 中央，该如何移动?
偏哪往哪移
3.高倍镜下可否再次调节粗准焦螺旋？
不可以
4.低倍镜和高倍镜下的视野有何区别?
高倍镜
物象 看到的细 视眼亮 视眼范 物镜与载玻
大小 胞数目 度 围 片的距离
大
少
暗小
近
低倍镜 小
多
亮大
远
将目镜由5×换为10×，理论上 还能看到几个细胞?
哪个视野需要更加明亮？
移动装片 移动目镜 移动物镜
难点分析
装片移动规律：偏哪往哪移 目镜与物镜的识别，及镜头的长短与放大
倍数的关系 显微镜的放大倍数=目镜倍数×物镜倍数 放大倍数指的是长度或宽度，而不是体积
或面积 污点位置的判断方法
作业：
1.完成学案1-5题； 2.预习第二节剩余内容， 完成学案上相应的内容。
发明者 放大倍数 观察水平 光学显微镜 列文虎克 ≤1500倍 个体或细胞 电子显微镜 卢斯卡 上百万倍 细胞内部超微结构
亚显微结构
1. 单 筒 光 学 显 微 镜 结 构
2.显微镜的使用
取镜
安放
对光
压片 ）
观察（先低倍镜再高倍物
3.使用中的注意事项 1.对光时可以调节哪些结构?
光圈和反光镜
移动装片移动目镜移动物镜难点分析目镜与物镜的识别及镜头的长短与放大倍数的关系放大倍数指的是长度或宽度而不是体积或面积污点位置的判断方法作业
第2节 细胞的多样性和统一性
学习目标: 1．光学显微镜的结构和使用方法 2．真核细胞和原核细胞的区别和联系
双目光学显微镜
单筒光学显微镜
பைடு நூலகம்
大型电子显微镜
显微结构