湿法装柱

湿法装柱步骤及注意事项1、除特殊规定要求用干法装柱外，一般选用湿法装柱。

2、湿法装柱的步骤：第一，塞棉花。

取一小块棉花铺平，弄成和层析柱直径一样的圆形，放入层析柱底部，用一根较长的玻璃棒压着棉花，关闭层析柱活塞，加一点洗脱液浸润棉花，赶走棉花中的空气。

第二，拌硅胶。

将硅胶倒入烧杯中，加入适量洗脱液，用玻棒搅拌均匀，多搅一会，确保硅胶全部溶解，赶走硅胶里的气泡。

硅胶用量根据层析柱的大小确定。

拌硅胶时洗脱液可以加多些，可以避免产生气泡。

第三，倒硅胶。

将上述拌好的硅胶沿着玻璃棒倒入层析柱。

倒完后缓慢抽出玻璃棒。

第四，敲柱子。

用橡皮管敲击柱子，赶走层析柱硅胶中的气泡，然后打开活塞，流出洗脱液，让硅胶自然沉降，等到柱子快干时关闭活塞，就可以加样了。

通常如果拌硅胶时加的洗脱液较多，是不会有气泡的。

注意事项：1、棉花不能太大和太厚，置入前要展开至适宜的均匀厚度2、倒入固相（硅胶）时，要缓慢，速度过快会使棉花浮起，且易产生气泡3、打开活塞不要过大，开至流出的液体呈滴状即可4、柱子内部固相最上端一定要保持有洗脱液5、加样前，最好关闭活塞且保持固相最上端有5mm左右洗脱液在缓慢加样6、如果固相为大孔树脂（比如黄芪前处理）时，树脂则需要用95%乙醇浸泡7-10天，将大孔树脂活化装柱看起来很麻烦，其实很简单，只要在操作的时候注意细节就没问题了哈。

以上装柱的步骤是在网上荡的资料，和我在药检所学习的时候，跟老师装柱的步骤方法一样，注意事项也是老师边做边总结出来的，现在终于有机会卖了哈~！@如果你要做桔梗含测，那要注意用的是蒸发光散射检测器哦~！@计算的方法则是用外标二点对数方程法，我将我们这边做的巴戟天含测的检测和计算方法也发给你，帮我看哈子对不对啊~！@巴戟天的含量测定（高校液相色谱法）-----2013年5月15日实际操作培训色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(3：97)为流动相；蒸发光散射检测器检测。

理论板数按耐斯糖峰计算应不低于2000对照品溶液的制备：取耐斯糖对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含0.2mg的溶液，即得供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相50ml，称定重量，沸水浴中加热30分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，放置，取上清液滤过，取续滤液，即得测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得所用的检测器和线性方法：蒸发光散射检测器的原理：首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测蒸发光散射检测器的操作：1接通色谱柱。

1．1接通电源。

1．2打开气体减压阀，调节压力在0.2-0.35Mpa之间。

2．选择最优温度：如果使用的是水性流动相，则初始温度应当设定在40℃，如果使用的是有机流动相(流速为lmL／min)，则初始温度应当设定为35℃。

在方法优化过程中，这些设定值还需视情况变化进一步调整。

3．启动流动相，并稳定一段时间，以保证所有的组件都达到平衡，基线保持稳定。

4．调零和自动调零4．1手动调零：按下AUTO ZERO钮。

5．关机5．1停泵5．2将载气继续通入检测器约几分钟，排干蒸发管和检测单元中的液体。

5．3关闭载气。

5．4关闭检测器电源。

蒸发光散射检测器的注意事项：1．保证实验室有良好的通风条件。

如果使用的流动相中含有挥发性的有机溶剂，则必须保证实验室具备良好的通风条件，避免挥发溶剂在实验室中积累。

2．杜绝明火和火星。

3．检测器必须接安全地线。

保证仪器的所有部件都能够安全接地。

4．检测器的尾气应当排入通风橱或其他类似排气装置。

保证尾气不会泄露到实验室中。

5．载气压力不能超过0.31Mpa（350Kpa）.。

当流动相进入该系统后，应确保载气的稳定供应。

如果载气的中断超出了一定时间范围，则有机溶剂可能会损坏压力传感器和／或光电倍增管。

6．虹吸管应随时装有液体。

7．严禁私自拆开雾化器或接触雾化室中的任何部件。

以免留下污染物，最终会影响检测信号。

8．如果使用的流动相中含有盐，酸或碱，请在关机之前用水或甲醇冲洗该系统，防止盐在仪器中沉积。

外标两点法对数方程:1.为什么要使用外标两点法，却不使用外标一点法或内标法？由于散射光的信号为非线性的，根据ELSd的工作原理，进样质量和ELSD检测响应值（峰面积）一般不呈现良好的线性。

因为信号相应值与物质质量的对数呈线性关系，如果对进样质量和峰面积分别取常用对数后，两者呈现良好的线性关系，但是它是一条不经过原点的直线，所以在含量测定时必须使用外标两点法，通常称作外标两点法对数方程。

（比如：黄芪、桔梗、伊贝母、浙贝母、湖北贝母、巴戟天、路路通等）2.外标两点法的进样量与公式：进两针不同体积的对照品,将进样量和对应的峰面积取对数后，由两点确定方程，方法是将两组数值代入直线方程：y=ax+b，即可求出式中的a和b常数值。

再将求出的a和b代入公式：IgA=aIgC+b，即可求出对数方程。

巴戟天含量测定【巴戟天检验数据及计算方法】对照品信息：批号：111891-201202来源：中国食品药品检定研究院含量：90.2%配制的对照溶液浓度：C=0.1939mg/ml进样量：10ul、20ul各两针样品信息：巴戟天：样品m1=0.5017g；样品m2=0.5092g巴戟肉：样品m1=0.5066g；样品m2=0.5065g进样量：各10ul检测色谱数据信息：对照品数据：耐斯糖（10ul）：A1-1=463966A1-2=473208A(10ul)=468587耐斯糖（20ul）：A1-1=1030680A1-2=1044172A(20ul)=1037426巴戟天样品数据：样品1（10ul）：A1-1=781928A1-2=808600A(10ul)=795264样品2（10ul）：A1-1=867842A1-2=893228A(10ul)=880535巴戟肉样品数据：样品1（10ul ）：A 1-1=720121A 1-2=699719A (10ul)=709920样品2（10ul ）：A 1-1=867842A 1-2=893228A (10ul)=880535数据处理：利用对照品溶液两针进样量的对数值和所得峰面积的对数值呈线性的关系，把两组数据带入方程y=ax+b 中，求得a 和b ，然后带入供试品峰面积的对数值，求得供试品进样量的对数值，对其求反对数得供试品进样量。

方程中x 、y 值均为进样量和峰面积取对数（lg ）后的数值。

对照品：进样量耐斯糖（10ul ）：取对数x 对=lg (0.1938×10)=0.2876进样量耐斯糖（20ul ）：取对数x 对=lg (0.1938×20)=0.5886峰面积量耐斯糖（10ul ）：取对数y 对=lg (468587)=5.6708峰面积量耐斯糖（20ul ）：取对数y 对=lg (1037426)=6.0160根据“数据处理”中求得的x 、y 值，通过Excel 图表中的XY 散点图，以（0.2876，5.6708）、(0.5886,6.0160)两点，求得方程如下：a=1.1468b=5.341样品含量求解：一、巴戟天样品：样品1：lg 峰面积=1.1468×lg进样量+5.341即lg 峰面积=1.1468×lg（C 1×10）+5.341C 1=arc 【(lg 峰面积-5.341)/1.1468】/10=arc 【(lg 795264-5.341)/1.1468】/10=0.3075mg/ml含量%=0.3075×50×10-3×11.9%)-(15017.01 ×100%=3.48%样品2：lg 峰面积=1.1468×lg 进样量+5.341即lg 峰面积=1.1468×lg（C 2×10）+5.341C 2=arc 【(lg 峰面积-5.341)/1.1468】/10=arc 【(lg 880535-5.341)/1.1468】/10=0.3361mg/ml 含量%=0.3361×50×10-3×11.9%)-(15092.01⨯×100%=3.75%按干燥品计算，巴戟天样品最终含量：3.6%二、巴戟肉样品：样品1：lg 峰面积=1.1468×lg进样量+5.341即lg 峰面积=1.1468×lg（C 1×10）+5.341C 1=arc 【(lg 峰面积-5.341)/1.1468】/10=arc 【(lg 709920-5.341)/1.1468】/10=0.2785mg/mll含量%=0.2785×50×10-3×12.4%)-(15066.01⨯×100%=3.14%样品2：lg 峰面积=1.1468×lg进样量+5.341即lg 峰面积=1.1468×lg（C 2×10）+5.341C 2=arc 【(lg 峰面积-5.341)/1.1468】/10=arc 【(lg 880535-5.341)/1.1468】/10=0.3361mg/ml含量%=0.3361×50×10-3×12.4%)-(15065.01⨯×100%=3.79%按干燥品计算，巴戟肉样品最终含量：3.5%。