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生物碱的提取与分离、含生物碱的中药实例(一)(总分44,考试时间90分钟)一、最佳选择题1. 降低乌头毒性，主要应A.加酸水使其生物碱成盐 B.加碱水使其生物碱水解 C.加酸使其生物碱羟基酯化 D.加酶使其生物碱水解 E.加水使其生物碱流失2. 苦参生物碱的极性大小顺序为A.苦参碱＞羟基苦参碱＞氧化苦参碱 B.氧化苦参碱＞羟基苦参碱＞苦参碱 C.羟基苦参碱＞苦参碱＞氧化苦参碱 D.氧化苦参碱＞苦参碱＞羟基苦参碱 E.羟基苦参碱＞氧化苦参碱＞苦参碱3. 具有强心作用的生物碱是A.长春碱 B.去甲乌药碱 C.乌头碱 D.苦参碱 E.小檗碱4. 区别莨菪碱与东莨菪碱的反应是A.Vitali反应 B.氯化汞沉淀反应 C.碘化铋钾反应 D.苦味酸沉淀反应 E.铜络盐反应5. 盐酸小檗碱可与下列哪项发生加成反应A.甲醇 B.乙醚 C.丙酮 D.乙醇 E.氯仿6. 阿托品属于A.内消旋体 B.右旋体 C.左旋体 D.外消旋体 E.都不是7. 分离季铵碱的生物碱沉淀试剂为A.碘化汞钾 B.碘化铋钾 C.硅钨酸 D.雷氏铵盐 E.碘-碘化钾8. 分离麻黄碱和伪麻黄碱的是利用A.硫酸盐溶解度 B.草酸盐溶解度 C.硝酸盐溶解度 D.酒石酸盐溶解度 E.磷酸盐溶解度9. 小檗碱由季铵式转变成醇式的条件是A.弱酸性 B.弱碱性 C.强酸性D.强碱性 E.中性10. 用离子交换树脂法分离纯化生物碱时，常选用的离子交换树脂是A.强酸型B.弱酸型C.强碱型D.弱碱型E.中等程度酸型11. 麻黄碱可与下列哪种试剂发生颜色反应A.二硫化碳碱性硫酸铜 B.碘化铋钾 C.硅钨酸 D.碘化汞钾 E.苦味酸12. 不是季铵碱的化合物为A.小檗碱 B.巴马汀 C.黄连碱 D.药根碱 E.粉防己碱13. 分配色谱法分离脂溶性生物碱选作固定相的是A.氨水 B.Ca(OH)2水 C.CaO水 D.甲酰胺 E.二乙胺14. 检识小檗碱常用的显色反应是 A.氯化汞沉淀反应 B.铜络盐反应 C.苦味酸反应 D.Vitali反应 E.漂白粉反应15. 可用于鉴别马钱子碱的反应是A.在酸水中通入Cl2，溶液变为樱红色 B.Vitali反应呈阳性 C.过碘酸氧化，乙酰丙酮缩合反应呈阳性 D.加浓硝酸即呈深红色，继加氯化亚锡溶液即由红色转为紫色 E.加CuSO4-NaOH试剂呈蓝紫色16. 麻黄碱不具备的性质是A.与大多数生物碱沉淀试剂能产生沉淀反应 B.可溶于水 C.可溶于氯仿 D.具有挥发性 E.拟肾上腺素作用17. Vitali反应阳性，氯化汞试剂反应呈白色沉淀的生物碱是A.莨菪碱 B.黄连碱 C.药根碱 D.东莨菪碱 E.阿托品18. 在水中溶解度最大的小檗碱盐是A.硫酸盐 B.酸性硫酸盐 C.磷酸盐 D.盐酸盐 E.枸橼酸盐19. 洋金花中主要生物碱的母核属于A.喹啉 B.异喹啉 C.吲哚 D.莨菪烷 E.喹诺里西啶20. 生物碱酸水提取液常用的处理方法是A.阴离子交换树脂 B.阳离子交换树脂 C.硅胶柱色谱吸附 D.大孔树脂吸附 E.氧化铝柱色谱吸附21. 下列化合物中，毒性最强的萜类生物碱是A.乌头原碱 B.乌头次碱 C.乌头碱 D.去甲乌药碱 E.去甲萨苏林碱22. 提取生物碱盐不选用的溶剂是A.酸水 B.甲醇 C.乙醇 D.水 E.氯仿23. 利用高效液相色谱法分离生物碱时，通常使用的流动相为A.弱酸性 B.弱碱性 C.中性 D.强酸性 E.强碱性24. 临床上使用不当可引起胆碱酯酶活性下降，产生倦怠、乏力、纳差等不良反应的成分为A.小檗碱B.苦参碱C.东莨菪碱D.马钱子碱E.麻黄碱25. 生物碱的薄层色谱和纸色谱法常用的显色剂是 A.碘化汞钾 B.改良碘化铋钾 C.硅钨酸 D.雷氏铵盐 E.碘-碘化钾26. 雷氏盐沉淀反应的介质是A.冷水 B.醇水 C.酸水 D.沸水 E.碱水27. 在酸水溶液中可直接被氯仿提取出来的生物碱是 A.强碱 B.中强碱 C.弱碱 D.酚性碱 E.季铵碱28. 喜树中喜树碱的分离可利用其结构中含有的官能团是 A.酚羟基 B.羧基 C.内酯 D.苯 E.内酰胺环29. 含有酚羟基的生物碱是A.表小檗碱 B.黄连碱 C.巴马丁 D.药根碱 E.甲基黄连碱30. 存在于黄连中的小檗碱属于A.季铵碱 B.酚性季铵碱 C.芳胺碱 D.叔胺碱 E.酚性叔胺碱31. 从CHCl3中分离酚性生物碱常用的碱液是A.Na2CO3B.NaOHC.NH4OHD.NaHCO3E.Ca(OH)232. 中药黄连所含生物碱的主要类型是A.简单异喹啉类 B.吲哚里西啶类 C.喹诺里西啶类 D.原小檗碱类 E.吗啡类33. 分离苦参碱和氧化苦参碱时，常在二者混合物的氯仿溶液中，加入A.丙酮 B.乙醚 C.醋酸乙酯D.乙醇 E.水34. 碱性不同的生物碱混合物的分离可选用A.简单萃取法 B.酸提取碱沉淀法 C.pH梯度萃取法 D.有机溶剂回流法 E.分馏法35. 下列有关莨菪碱的论述，错误的是A.易溶于氯仿 B.难溶于四氯化碳 C.易消旋化 D.可水解 E.难溶于水36. 氧化苦参碱水溶性大于苦参碱的原因是A.呈离子键 B.碱性强 C.呈喹诺里啶类 D.具有酰胺键 E.具有N→O配位键37. 毒性较强的生物碱是A.次乌头碱 B.黄连碱 C.药根碱 D.乌头原碱 E.表小檗碱38. 游离生物碱的提取可选用A.pH8的水 B.pH9的水 C.pH10的水 D.pH11的水 E.pH1的水39. 采用硅胶分配柱层析分离三尖杉生物碱时，固定相多选用A.酸水 B.碱水 C.酸性缓冲液 D.碱性缓冲液 E.水40. 小檗碱属于A.仲胺生物碱 B.叔胺生物碱 C.季铵生物碱 D.酰胺类生物碱 E.两性生物碱41. 能与盐酸生成难溶于水的生物碱盐的是A.伪麻黄碱 B.小檗胺 C.麻黄碱 D.小檗碱 E.粉防己碱42. 含下列生物碱的中药酸水提取液，用氯仿萃取，可萃出的生物碱是A.苦参碱 B.氧化苦参碱 C.秋水仙碱 D.麻黄碱 E.山莨菪碱43. 吸附色谱法分离生物碱常用的吸附剂是A.聚酰胺B.氧化铝 C.硅胶 D.活性炭 E.硅藻土44. 麻黄生物碱主要集中在麻黄的A.根 B.根皮 C.叶 D.茎 E.茎的髓部。
苦参生物碱的提取与分离张婷婷制药2班101310402290引言苦参又名苦骨、川参、凤凰爪、牛参、地槐、野槐等，为豆科多年生落叶亚灌木植物舌参根，采挖后去芦头及须根晒干切片入药，全国各地均产，功能主要为清热、燥湿、杀虫等，主治热毒血痢、肠风下血、黄疸、赤白带下、小儿肺炎、急性扁桃体炎等多种炎症和痔漏、疥癞恶疮、皮肤瘙痒、阴疮湿痒等疾病研究得知，苦参的根含有多种生物碱，如氧化苦参碱、羟基苦参碱、甲基野靛碱、臭豆碱、赝靛叶碱、脱氢苦参碱（槐果碱）等多种生物碱及黄酮类化合物因为苦参碱具有多方面的药理作用，如抗肿瘤作用、抗癌作用、抗病毒作用，所以对苦参总碱的提取与分离具有重要的意义苦参总碱的提取方法相对较多，本文中主要侧重论述苦参提取水煎法。
1 苦参碱以及其化学结构1.1苦参碱的基本性质苦参碱系指从豆科植物苦参、苦豆子、山豆根中分离出来的生物碱，是上述3种传统中草的主要活性成分之一，是苦参类生物碱的代表.《中国药典》2010年版一部中，是以苦参碱的含量作为苦参药材的质量控制指标［1］；2005年版一部中，苦参碱的含量也是苦参药材的质量控制指标之一.1.2 苦参碱的化学结构苦参碱是白金雀儿碱的异构体，属于喹喏里西啶类衍生物，由2个喹喏里西啶环骈合而成，有2个氮原子，一个是叔胺氮，一个是酰胺氮，其分子式为C15H24N2O,分子量为245.37.苦参碱有4种形态：α-苦参碱为针状或柱状结晶，熔点为760C;β-苦参碱为斜方晶状，熔点为870 C;γ-苦参碱为液体，沸点为2230Cδ- 苦参碱是柱状结晶，熔点为840 常用的是α- 苦参碱,其结构见图1.苦参碱能溶于水、苯、氯仿、甲醇、乙醇，微溶于石油醚。
图一α-苦参生物碱的结构图[2]2.苦参类生物碱的药理作用近年来发现苦参碱类生物碱在保护中枢神经系统和心血统、抗病毒、抗炎、免疫抑制及抗肿瘤等方面有重要的药理活性和应用前途［4］.2.1 苦参碱的抗肿瘤作用苦参碱类药物对于多种实验性肿瘤均有抑制作用，且多为移植性实体瘤.苦参碱和氧化苦参碱同是苦参中抗癌有效成分，对癌细胞有直接杀伤作用.电镜观察可见肿瘤细胞分裂呈中等抑制，瘤细胞膜和细胞质有明显改变.此外，苦参碱类药物具有毒性低、无抑制骨髓和机体免疫功能的优点.动物实验表明，氧化苦参碱对S -180有显著抑制作用.日本报道它对S -180的治疗指数比丝霉素的治疗指数大7至8倍，临床效果类似于苦参碱.另有发现：苦参碱对P815肿瘤细胞亦有直接毒性作用，能降低P815细胞的3H-TdR掺入值，这从机制上可能说明苦参碱是一种直接细胞代谢抑制剂.2.1.1 对肝癌细胞的作用一定浓度的苦参碱对HepG2细胞的增生有抑制作用[5]，主要为直接杀伤作用，从而影响了HepG2细胞的代谢，使AFP和PCN分裂指数降低，恶性表型消失，肿瘤细胞恶性程度和侵袭力减弱，这说明苦参碱可能成为很好的抗癌药物2.1.2 对胃癌细胞的作用苦参碱在体外对胃癌细胞具有杀伤作用，且在一定剂量和时间范围内呈明显的量效和时效关系,低分化的胃癌细胞AGT对苦参碱更为敏感,苦参碱对胃癌细胞株的外杀伤作用与其诱导胃癌细胞凋亡有关,将苦参碱作用于胃腺癌细胞SGC-7901 48h后，胃癌细胞Bcl-2表达量显著下降,可以推断出苦参碱对胃癌细胞凋亡的诱导作用可能与其影响Bcl-2的表达有关.2.1.3对肺癌细胞的作用实验表明，三参冲剂（主要成分为苦参碱和川芎嗪）对肿瘤细胞与内皮细胞的粘附因子有明显抑制作用，并可明显抑制CD44和CD49粘附因子的表达，从而抑制肿瘤细胞与内皮细胞的粘附，还可减轻内皮细胞的通透性，保护内皮细胞的完整性，阻断了肿瘤细胞与基质的粘附，从而减少了肿瘤转移的形成. 这主要是因为三参冲剂对Tiam-l基因具有一定调控作用.2.2 对中枢神经系统的作用研究发现氧化苦参碱、苦参碱等具有解热镇痛等中枢抑制性作用. 氧化苦参碱能明显抑制小鼠的自主活动，与水合氯醛等中枢抑制剂有协同作用，而对苯丙胺等中枢兴奋剂则有拮抗作用.苦参碱、氧化苦参碱对化学刺激和热刺激所致小鼠的疼痛反应均有明显抑制作用.苦参碱腹腔注射或口服均能抑制酵母菌致小鼠直肠升温作用，而此作用不能被阿托品和羟甲丙基麦角酰胺所拮抗，但可被多巴胺受体拮抗剂氟哌啶醇完全拮抗. 观察并推测苦参碱的解热功能除了对产热过程的直接作用外，还具有多巴胺能样活性.2.3 对心血管系统的作用大量研究表明，苦参碱在强心和抗心率失常方面有显著的作用. 苦参碱和氧化苦参碱均能对抗乌头碱、哇巴因、氯仿- 肾上腺素、氯化钡及冠脉结扎等诱发的动物实验性心率失常，且多为室性心率失常，并且均呈剂量依赖性的正性肌力作用. 实验证明，这几种生物碱都可显著增强离体豚鼠右心室乳头状肌收缩力.苦参碱作为潜在的强心药，一般同时具有增强心肌收缩力、减慢心率和拮抗心率失常的有益作用. 目前临床试用苦参碱和氧化苦参碱，发现对室性期前收缩、频发性期前收缩及阵发性心动过速效果较佳，这说明苦参碱类生物碱在强心和抗心率失常方面有着广阔的前景.2.4 抗病毒、抗炎作用2.4.1 在治疗乙型肝炎中的应用中药苦参碱治疗肝炎在《本草纲目》中已有记载. 中医认为，苦参碱性寒味苦，具有清热利湿、退黄利尿、消炎解毒等作用，可治疗多种疾病. 基础实验和临床研究表明，苦参碱具有多方面的药理作用及临床功能：①抑制胶原纤维增生而具有抗纤维化作用，这可能与其阻断PDGF（血小板源生长因子）和TGF-β1（转化生长因子β1）的作用，抑制储脂细胞增生和胶原合成有关［6］，苦参碱能够保护肝细胞，尤其是膜性结构，降低丙氨酸氨基转移酶、透明质酸、层黏蛋白水平，还可增加胆汁回流，消退黄疸；②抑制网状内皮系统吞噬功能，具有免疫调控作用. 苦参碱有免疫抑制活性，可抑制巨噬细胞胞浆、胞膜的PKC（蛋白激酶c）的活性，有可能成为一种有效的PKC 抑制剂. 实验证明苦参碱体内外均可抑制TNF 和IL-6的分泌，这可能与其抑制PKC 活性有关. 由于TNF 是肝脏炎症损伤中的重要介质，而对于LPS （细菌脂多糖）诱导的小鼠血清及培养的大鼠库普弗细胞的TNF 和IL-6升高，苦参碱都有抑制作用，这有可能是其消除肝脏炎症的机制之一. 苦参碱不仅有抗炎、抗肝损伤、改善肝脏微循环、促进肝细胞再生的作用，还有助于胆红素的摄取结合与排泄，起到降酶、退黄作用，并有抑制乙肝病毒复制和免疫抑制作用20世纪80年代以来干扰素被公认为有效的抗病毒药物，但其病毒学指标中HbeAG率约40％, 且停药后易复发. 干扰素主要通过与靶细胞膜上特异受体结合诱导靶细胞产生抗病毒蛋白，从而破坏病毒的mRNA ，抑制病毒复制，但其免疫调节作用弱. 而慢性乙型肝炎患者普遍存在免疫紊乱的情况，不利于乙型肝炎病毒的最终清除. 苦参碱注射液能提高机体免疫力，有清热利湿、利尿退黄、解毒功能，能改善病理性肝炎症状与体征. 干扰素加苦参碱注射液治疗慢性乙型肝炎能起到互补协同作用，能明显提高干扰素的治疗效果，临床无不良反应，值得推广应用.2.4.2 在治疗病毒型心肌炎中的应用陈曙霞等发现苦参碱具有独特的抗柯萨基B组病毒（CVB）的显著作用，体内外实验均证实病毒性心肌炎模型小鼠经苦参碱治疗后存活期明显延长，有的完全治愈，心、肝组织无病变发生，脾脏T 淋巴细胞亚群及NK 细胞活性亦改变.提示苦参碱能抑制LWB 繁殖，而且尚有免疫调节功能［8］. 实验和临床证明苦参碱类生物碱还有多种抗炎作用，其机制不详. 已有临床应用苦参碱静脉滴注治疗病毒性心肌炎的报道.3 苦参碱的提取与分离3.1 传统煎煮法对苦参的提取在苦参中苦参总碱或苦参碱及氧化苦参碱的提取方法中较为常用的有溶剂提取法和离子交换法. 笔者在实验中首先采用了传统的煎煮法：将中药苦参粗粉置适宜煎煮器中，加适量水浸没原料，充分浸泡后加热至沸，保持微沸浸出一定时间. 此法较简便，而且经煎煮后，药中的大部分成分可被不同程度地提出，因此是提取有效成分特别是药物制剂的基本方法.3.1.1 实验仪器包括电子天平、旋转蒸发器、电炉、磁力搅拌器、超声波振荡器等.3.1.2 材料苦参（购于中药市场，批号：20050715）、乙醇（AR）、乙酸乙酯（AR）、HCL（AR）、氯仿（AR）、NaOH、大孔吸附树脂、硅胶G 、纤维素钠、氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0402-200506）3.1.3 苦参提取水煎法首先用植物粉碎机粉碎苦参，并称取苦参粉100g加水1000ml 用电炉煮沸，煎煮1.5h，过滤收集药液. 再加水800ml电炉煮沸煎煮1h，过滤收集药液. 第3次加水600ml电炉煮沸，煎煮30min,过滤收集药液. 弃药渣合并三次药液，用纱布过滤冷却，并于3 000r/ min 离心5min，得上清液，于40C 冰箱冷藏备用. 旋转蒸发仪浓缩药液至50ml左右, 并过大孔吸附树脂（5ml/min）洗脱分离，得流出液，用80%的乙醇对大孔吸附树脂进行洗（2ml/min）再将流出液与洗脱液分别用氯仿、乙酸乙酯溶液萃取3次（8h次），用硅胶薄层层析，经显色鉴定表明流出液含有黄酮、洗脱液含有生物碱. 然后再用荧光显色鉴定，并与标准品对照，发现洗脱液中得到的生物碱至少含有3种.3.1.4 苦参碱的分离方法(1)准备吸附柱. ①取20AB-8树脂用清水浸泡15min;②取中小型柱子，洗净干燥，填入玻璃纤维；③将浸泡好的树脂与水一起转入柱子内，打开阀门排出多余水分；④用80%乙醇、5%盐酸溶液浸泡树脂过夜，再排出. 再第二次将上诉溶液加入柱子，浸泡4h.⑤用清水洗净，直到洗后溶液PH值为5为止；⑥用蒸馏水浸泡待用.2）薄层层析. ①将5g羧甲基纤维素钠加入100ml水溶解煮沸. ②将上诉溶液与硅胶G 以3：1的体积比调匀，并于1050C 下干燥40min. ③取一个载玻片，将干燥后的稠状液体均匀涂抹于上面, 干燥待用. ④在制备好的薄层上画一条基线，于中心点样药品原液数次. ⑤生物碱的展开剂为三氯甲烷、甲醇、氨水混合液，其中三氯甲烷：甲醇：氨水=5滴：0.6滴：6滴；对黄酮的展开剂为三氯甲烷和甲醇混合液，三氯甲烷：甲醇=8.5滴：1.5滴. ⑥用碘化铋钾对生物碱显色，发现有3个有色斑点. ⑦用5%三氯化铁对黄酮显色，发现没有有色斑点.3）让原药液流过吸附柱（速度为5ml/min），再用80%乙醇洗脱（速度为5ml/min），得到2部分溶液（流出液、洗脱液）. 分别对这2部分进行薄层层析，发现都有生物碱的存在. 说明生物碱在树脂上的吸附效果不好，准备调整PH 值及树脂进行再次吸附.4）用旋转蒸发仪对洗脱液进行浓缩，再用氯仿、乙酸乙酯分别进行萃取，得2部分溶液. 再对2部分溶液进行薄层层析，发现氯仿萃取的部分有生物碱的存在，而乙酸乙酯萃取的部分其中虽然有物质的存在，但是既不是黄酮也不是生物碱，需要进一步鉴定分析.3.2 酸水回流法提取苦参碱酸水回流法也是常用于苦参中苦参碱的提取方法，本次实验中采用了HCL 无机酸作为提取剂，用于对比传统煎煮法实验.3.2.1 仪器包括METTL ERAE 240电子天平、RICA 旋转蒸发器、EYELA COOLACE CCA-1100冷凝水循环装置、Waters 2695高效液相色谱仪3.2.2 材料苦参（购于重庆中药饮片厂）、乙醇（AR）、甲醇（HPLC）、乙腈（HPLC）、氯仿（AR）、HCL（AR）、NaOH、苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0413-200506）、氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0402-200506）3.2.3 标准曲线的制作精密称取苦参碱对照品，以无水乙醇溶解，配制成含苦参碱0.492mg/ml 的溶液作为对照品溶液%分别取1，5，9，13，15u以HPLC 测定峰面积［9］，每样进2针取平均值，色谱条件为：Xterra RP185um4.6x150mm柱，柱温200C ，0.8ml/min,220nm,甲醇:水:三乙胺=480:520:0.4以峰面积为纵坐标，苦参碱量（)=）为横坐标，得回归方程：y=-34970.14999+1277796.646x；r=0.9999即苦参碱量在0.492到7.380ug范围内呈现良好的线性关系.3.2.4 酸水回流法提取苦参总碱选用L934,设计实验. 取苦参粉10g,按表1正交试验安排进行提取，以苦参碱得率为指标衡量提取效果. 试验流程如下：工艺液回流提取→HCL 水溶合并回流溶液→过滤→滤液用10%NaOH调节，使PH值为10到11 →过滤→滤液浓缩至小体积→以氯仿进行4段萃取（氯仿用量分别为用量体积的1倍、1/2倍、1/2倍、1/2倍）→合并氯仿层→蒸干→无水乙醇定容至25ml→测定苦参碱得率.4 未来展望近年来有关苦参类生物碱的药理研究工作已取得了很大进展，而临床上主要用于治疗肝炎的居多，对其他方面疾病的应用基本上还处于试验阶段. 在药物来源方面，我国以提取或提取后还原转化制备的工艺最为成熟，而合成方面虽然也有研究，但合成成本较高. 出于资源保护和经济效益考虑，由于中草药提取液苦参碱含量低，分离提纯麻烦，通过人工化学合成这类生物碱及其衍生物是非常必要的.参考文献：[1] 中华人民共和国国家药典委员会. 中国药典（Ι部）[M]北京：化学工业出版社，2000.[2] 刘文雅，刘汉清. 苦参碱的药理研究进展［J］. 中华实用中医杂志，2006（4）：473-475.[3] 刘北忠，蒋纪恺. 苦参碱与人类红血病细胞株K 562的结构特征研究［C］// 第五届西南三省一市生化学术会论文文集. 成都：［出版社不详］，1997.[4] 李弟，潘显道. 苦参碱类生物碱研究进展［J］. 医学研究通讯，2000(1)65-66.[5]司维柯，肖元. 苦参碱对人肝癌细胞HepG2的形态影响和相关增殖因素的变化［J］. 第三军医大学学报，2000，22（6），[6]张俊平，张珉. 苦参碱体内外抗大鼠肝纤维化的作用［J］.中国药理学报，2001,22(2),186.[7] 林文，张俊平. 苦参碱对细菌脂多糖诱导大鼠枯否细胞释放肿瘤坏死因子及白细胞介素-6的影响［J］. 药学报,1997,32(2):186.[8] 陈曙霞. 苦参抗柯萨基B 组病毒的初步研究［J］. 上海第二医科大学学报，1991,11(2):140-142.。
粉防己生物碱的提取分离和鉴别粉防己为植物防己科粉防己Stephania tetrandrd S.Moore的根，又名汉防己，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱，主要是汉防己甲素和汉防已乙素。
汉防己生物碱具有降低血压及镇痛的作用，临床上除用作治疗高血压、心绞痛、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌、扩冠和解热抗炎的作用。
一、实验目的1．掌握生物碱的提取原理和实验操作方法；2．掌握生物碱的基本鉴别法；3．掌握生物碱结构与一般性质的关系；4．熟悉用柱层析分离纯化生物碱单体的方法。
二、仪器与试药（一）仪器RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵分液漏斗（250mL）HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（1000mL）ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）蒸发皿小玻璃蒸发器玻璃层析柱（2.0cmⅹ40cm）（二）试药粉防己乙醇盐酸氯仿无水硫酸钠滤纸丙酮中性三氧化二铝无水硫酸钠甲醇浓氨水硅胶G 凡士林脱脂棉漏斗 CMC-Na改良碘化铋钾试液汉防已甲素和汉防已乙素对照品丙酮苦味酸碘化汞钾试液雷氏铵盐试液三、主要成分的结构和性质汉防已根中总生物碱含量为1～3%，主要为汉防已甲素，含量约1～2%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.4%；以及其它数种微量生物碱。
轮环藤酚碱四、实验原理：1．提取：利用游离的伯、仲、叔胺生物碱具有亲脂性，能溶于乙醇的性质，用乙醇提取总生物碱；2．分离：利用水溶性生物碱（季铵类生物碱）易溶于水而难溶于有机溶剂的性质进行二者的分离；3．粉防己甲、乙素的分离：利用甲、乙素在结构上的不同（二者极性大小不同）用氧化铝柱层析来分离甲、乙素。
五、生物碱的提取分离1．总生物碱的提取、亲脂性与亲水性生物碱的分离95%乙醇300mL水浴回流提取1小时，过滤NOCH3OROCH3OCH3ONCH3CH3H HR=CH3R=H汉防己甲素汉防己乙素ONOHOCH3CH3OHOOHCH3同法提取0.5小时，过滤5～10mL浓缩物2%盐酸转移至蒸发皿中充分搅拌，残渣做生物碱反应，将滤液放在分液漏斗中先加入50mL氯仿，pH至9-10，振摇萃取，静置分层后，分出氯仿层30mL萃取1次2次，每次20mL，分出氯仿层20g无水硫酸钠，密闭，（上交）加入丙酮适量（共15mL，少量多次），水浴加热溶解，趁热倒入蒸发皿丙酮液加入中性三氧化二铝3g拌匀，水浴上小心蒸干含生物碱的三氧化二铝颗粒2．低压柱层析分离汉防已甲素和乙素低压柱层析在低压下（0.5-3kg/cm2，一般0.3-1.2 kg/cm2）采用颗粒直径介于经典柱层析（100-200μm）和HPLC（37μm）之间的薄层层析用硅胶（或氧化铝）H或G（50-75μm）作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法。
粉防己中生物碱的提取分离工艺流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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1. 选择优质的粉防己植物，一般选取茎和叶部进行提取。
实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定1 实验目的1.1生物碱的一般提取方法。
1.2 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定2 实验原理2.1 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。
基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取。
常用的提取方法包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。
2.2 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。
因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。
一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法；挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏法；易升华的生物碱用升华法提取得到单体。
由不同沸点组成的液体生物碱总碱，往往可通过常压或减压分馏分离。
如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱，石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来。
许多生物碱的盐比游离碱更易于结晶。
因此，可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离，之后再转变成游离碱。
3 实验材料材料：汉防己4实验步骤4.1 生物碱的提取分离4.1.1 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离100g0.5%H2SO4液渗漉（注一）倍量V/V）pH9~10，静置，抽滤泥黄色沉淀（水溶性季铵碱及水溶性杂质）将沉淀与静砂拌匀（注二）80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至提尽生物碱（注三）回收乙醚（注四）乙醚提取物用95%乙醇40~60ml回流热溶后倾入500ml水中，加30gNaCl盐析水溶上加热至凝结，静置抽滤白色沉淀（亲脂性叔铵总碱，以汉防己甲素、乙素为主）注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。
提取和纯化植物中的生物碱植物中含有丰富的化学成分，其中一类重要的成分就是生物碱。
生物碱是一种具有特定生物活性的有机化合物，常见于一些中草药和其他多种植物中。
提取和纯化植物中的生物碱是一个重要的研究领域，它对于药物研发和天然产物化学合成具有重要意义。
本文将介绍提取和纯化植物中的生物碱的方法和应用。
第一节：生物碱的提取方法植物中的生物碱含量很低，通常需要进行提取和富集才能得到足够的样品供研究。
以下是几种常用的提取方法：1. 浸提法浸提法是最简单和常见的提取方法之一。
将待提取的植物材料浸泡在有机溶剂中，常用的溶剂包括乙醇、甲醇和醚类等。
通过加热、搅拌或超声波等手段，促使植物中的生物碱溶解到溶剂中，然后通过过滤或离心等操作，得到含有生物碱的提取液。
2. 水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法适用于提取热稳定的生物碱。
将植物材料放入蒸馏器中，通过向蒸馏器中注入蒸汽，使细胞内的生物碱挥发到蒸汽中，然后经过冷凝收集，即可得到纯净的生物碱提取物。
3. 超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种高效的提取方法。
通过利用超声波的机械波动和热效应，加速生物碱从植物细胞中的释放和迁移。
该方法可以显著缩短提取时间，提高提取效率。
第二节：生物碱的纯化方法提取到的生物碱通常是含有多种组分的混合物，需要进行纯化才能得到纯净的生物碱样品。
以下是几种常用的纯化方法：1. 薄层色谱法薄层色谱法是一种常用的生物碱分离和纯化方法。
通过将提取液溶解在一定溶剂中，涂抹在硅胶或其他吸附材料覆盖的玻璃板上，然后将玻璃板放入柱中与一定溶剂进行柱层析，利用样品中的生物碱与吸附材料之间的物理和化学相互作用差异，实现生物碱的分离和纯化。
2. 液相色谱法液相色谱法是一种基于不同化学性质的生物碱分离和纯化方法。
通过将提取物溶解在适当的溶剂中，然后在柱中填充拥有特定物理和化学性质的固定相，利用样品中的生物碱与固定相之间的相互作用差异，实现生物碱的分离和纯化。
3. 结晶法结晶法是一种常用的纯化方法。
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实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定1 实验目的1.1生物碱的一般提取方法。
1.2 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定2 实验原理2.1 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。
基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取。
常用的提取方法包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。
2.2 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。
因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。
一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法；挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏法；易升华的生物碱用升华法提取得到单体。
由不同沸点组成的液体生物碱总碱，往往可通过常压或减压分馏分离。
如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱，石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来。
许多生物碱的盐比游离碱更易于结晶。
因此，可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离，之后再转变成游离碱。
3 实验材料材料：汉防己4实验步骤4.1 生物碱的提取分离4.1.1 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离100g0.5%H2SO4液渗漉（注一）倍量V/V）pH9~10，静置，抽滤泥黄色沉淀（水溶性季铵碱及水溶性杂质）将沉淀与静砂拌匀（注二）80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至提尽生物碱（注三）回收乙醚（注四）乙醚提取物用95%乙醇40~60ml回流热溶后倾入500ml水中，加30gNaCl盐析水溶上加热至凝结，静置抽滤白色沉淀（亲脂性叔铵总碱，以汉防己甲素、乙素为主）注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。
第27卷第3期No.3Vol.27固原师专学报(自然科学)Journal of Guyuan Teachers College(Natural Science)2006年5月May.2006生物碱的提取与分离马爱瑛1,2(1宁夏大学生命科学学院, 宁夏银川750021;2西北第二民族学院, 宁夏银川750021)摘 要:生物碱是一类广泛存在于植物中的碱性含氮化合物,是许多药用植物的有效成分之一,其药用价值已经受到人们的广泛关注.生物碱的提取与分离方法也在不断地改进和发展中,本文综述了近年来,不同的提取和分离方法在生物碱提取分离中的应用和进展.随着人们对生物碱药用价值的认识提高,生物碱的提取与分离方法将更加高效、迅速、完善.关键词:生物碱;提取;分离中图分类号:TQ283 文献标识码:A 文章编号:1001—0491(2006)03—0025—06生物碱一般是指存在于植物中的碱性含氮化合物,大多数具有含氮杂环,有旋光性和明显的生理效应[1].19世纪初,是人类研究最早最多的一类天然有机化合物.生物碱绝大多数分布在植物界,且大多数分布在双子叶植物中,如豆科、毛莨科等.生物碱在植物中的分布往往集中在某一部分或某一器官,如黄柏的树皮,三颗针的根皮.另外,植物在不同的生长阶段所含生物碱的量与种类也可能有差异[2].所以人们可以根据植物的生长规律在有效成分含量最多的年限与季节采收其要用部分.生物碱大多数具有天然的生理活性,是多种中草药及要用植物的有效成分,研究生物碱的提取,具有十分重要意义.1 生物碱的存在形式和性质[3]生物碱常为无色固体、味苦.只有少数生物碱如烟碱、毒芹碱在常温下为液体.生物碱大多数具有旋光性,自然界存在的多是左旋体.左旋体和右旋的生理作用往往差别很大,一般具有疗效的是左旋体.游离状态的生物碱根据溶解性能分为亲脂性生物碱和水溶性生物碱两大娄.亲脂性生物碱数目较多,绝大多数叔胺碱和仲胺碱都属于这一类.它们易溶于苯、乙醚、氯仿、卤代烷烃等极性较低的有机溶剂,在丙酮、乙醇等亲水性有机溶剂中也有较好的溶解度,而在水中溶解度较小或几乎不溶.水溶性生物碱主要有季铵型生物碱,数目较少,它们易溶于水、酸水和碱水,在甲醇和正丁醇等极性大的有机溶剂中可溶解,但不溶于无极性或极性低的有机溶剂.具碱性的生物碱能和酸相结合生成盐.生物碱盐易溶于水,难溶或不溶于亲脂性有机溶剂,但可以溶于甲醇或乙醇.2 生物碱的药用价值2.1抗肿瘤作用洋紫荆的氯仿萃取物对K562细胞具有明显的诱导凋亡活性,进一步追踪分离得到4个具有活性收稿日期:2006—03—29作者简介:马爱瑛(1978—),女,宁夏银川人.62固原师专学报(自然科学) 2006年5月 的生物碱[4].同时苦参碱对肿瘤细胞与内皮细胞的粘附具有明显的抑制作用可以抑制肿瘤的扩散[5].钱学敏[6]等人研究发现,一定浓度的氧化苦参碱有抑制人肝癌细胞SMMC7721增殖的作用.而苦参碱能有效抑制人成纤维肉瘤(H T1080)细胞的增殖,IC50值为350μg/ml[7].从雷公藤中分得一个新的倍半萜生物碱,药理实验表明该生物碱有免疫抑制活性,并对白血病细胞有抑制作用[16]2.2 作用于心血管从茜草科钩藤植物滇钩藤中分得的四氢鸭木碱具有舒张血管平滑肌的作用,其对兔胸主动脉平滑肌收缩的抑制百分率达53%以上[8].苦参总碱对兔、大鼠等动物的心脏有明显的抑制作用,可使心肌收缩力减弱、心输出量减少等[9].2.3 作用于神经系统附子生物碱也有较强的镇痛作用[10].苦参碱类生物碱具有镇静镇痛、解热降温等中枢抑制性作用,能明显抑制小鼠的自主活动[11].蛇足石杉所含生物碱石杉碱甲和石杉碱乙具有很强的抑制胆碱酯酶活性,临床试验石杉碱甲对治疗重症肌无力和早老性痴呆有显著疗效,已被国际上列为第二代的乙酰胆碱酯酶抑制剂之一[12].2.4 抗菌消炎作用川贝母醇提物对金黄色葡萄球菌和大肠菌有明显抑制作用.贝母碱对卡他球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、克雷佰氏肺炎杆菌有抑制作用,去氢贝母碱和鄂贝定碱对卡他球菌、金黄色葡萄球菌有菌活性,且鄂贝定碱作用最强[13].黄连小檗碱可用于治疗流行性脑脊髓炎、大叶肺炎、肺脓肿、滴虫性阴道炎、皮肤感染性炎症等[14].聂毅,张洪林采用微量量热法研究证实川乌生物碱液和石斛生物碱液对金黄色葡萄球菌的代谢作用都有抑制,随药物浓度的增加生长速率常数线性降低,说明两种萜类生物碱的结构与它们的生物活性有着一定的联系.乌生物碱液对金黄色葡萄球菌代谢作用的最佳用药浓度为0. 3336mg/ml,石斛生物碱液对金黄色葡萄球菌代谢作用的最佳用药浓度为7.237mg/ml,川乌生物碱对金黄色葡萄球菌的抑制效果优于石斛生物碱[15].2.5 其他昆明山海棠所含的总碱能治疗类风湿性关节炎.从菊叶三七中分得菊三七碱具有抗疾作用.苦参生物碱具有较好的抗过敏作用,过敏性鼻炎、皮炎、湿疹、荨麻疹等具有明显疗效[17].3 生物碱的提取与分离3.1 溶剂提取法3.1.1 水提取法(以水作溶剂)直接以水作为溶剂,此法操作简便,成本较低,但提取次数多,水用量大.如蒙药忠论—5汤提取[18]就是一个很好的例子.3.1.2 酸水提取法水溶液提取法对于那些碱性较弱不能直接溶解于水的生物碱提取,就可采用偏酸性的水溶液,使生物碱与酸作用生成盐而得到提取.具有碱性的生物碱在植物体中多以盐的形式存在,而弱碱性或中性生物碱则以不稳定的盐或游离碱的形式存在.故常用0.5%～1%的乙酸、盐酸等为溶剂.蝙蝠葛粗总碱的提取,可采用0.5%硫酸溶液提取,再利用大多数游离的生物碱难溶于水的性质,采用碱水沉淀法制得粗总碱,然后采用苯回流连续提取的方法,萃取出脂溶性部分,再利用蝙蝠葛酚性生物碱可溶于一定生物碱的性质,用50%氢氧化钠萃取出总酚性生物碱[19];采用此工艺制得的总碱为淡黄色粉未,经6次小试和6次放大制备酚性总碱取得率稳定到粗总碱的35%左右[20].3.1.3 醇提法游离生物碱及其盐类一般都能溶于甲醇和乙醇,因此用它们作为生物碱的提取溶剂,应用较为普遍,甲醇极性比乙醇极性大,对生物碱的溶解性能比乙醇好,它的沸点也比乙醇低,但对视神经的毒性很大,所以除实验室有时用甲醇为生物碱提取溶剂外,多数用乙醇为溶剂,有时也用稀乙醇(60%～80%)作溶剂,通常采用酸水-碱化-亲脂性溶剂萃取的方法反复进行.血脂康原料药溶于80%乙醇液40mL 回流提取、浓缩.用浓HCL 酸化过滤调P H 至2.用氨水使生物碱盐还原为生物碱,再用乙醚萃取两次.经分离后,将脂溶性和水溶性生物碱盐分别溶于水.在200～800nm 范围用紫外分光光度计扫描分别在300nm 、200nm 和210nm 左右均有吸收,证实提取物确为生物碱[21].通过实验证明,取不同浓度的醇液提取生物碱,其提取效率不同,如提取荷叶生物碱时,据文献报道[22],用95%乙醇在86℃的温度下回流,1.5h 为好.又如取不同药用部位的含生物碱类成分中药材分别采用水醇法、醇水法提取,结果表明:水醇法对根及根茎类药材的提取适用;含淀粉料较多的块根、块茎类药材水煎时易使淀粉糊化,影响成分浸出,以选醇水法为宜[23].3.1.4 亲脂性有机溶剂提取法大多数生物碱是脂溶性的,所以可以用亲脂性有机溶剂提取.常用溶剂有:氯仿、二氯、甲烷、苯.如华北乌头中生物碱的提取,将华北乌头根及花粉碎过3号筛,分别用10%Na 2CO 3溶液湿润,加苯冷浸1周,过滤,滤液用液25%HCL 提取,将盐酸捉取液碱化至P H =10,用氯仿提取即得乌头碱[24].但是亲脂性有机溶剂提取法一般不适用于植物中生物碱的系统分离研究,只适用于药用生物碱的提取.3.2 渗漉-薄膜蒸发连续提取法渗漉-薄膜蒸发连续提取法适用于在所选提取溶剂中溶解度不大及遇热不稳定的生物碱的提取.此法的提取装置是由渗漉提取器、薄膜蒸发器及气液分离器等组成,是渗漉提取、浓缩及溶剂挥收同时进行.根据延胡索乙素受热、受光易氧化变质的性质,实验显示将渗漉、回流两种提取方法进行了比较,并将不同浓度乙醇渗漉的结果进行了比较,结果认为以65%或80%乙醇渗漉的提取效果为佳[25].3.3 超声波提取法超声波提取法一般作为生物碱的辅助提取法,单纯采用超声波提取法不多见.李慧等[26]使用超声波辅助浸提北草乌生物碱,大大提高生物碱的提取收率,缩短浸提时间,并且能很好地保持生物碱的特性和品质满意的效果.但由于超声浸出时间较长,同时超声技术对器壁的薄厚及容器放置位置要求较高,否则影响浸出效果.因此随着微波炉的普及使用,将微波技术应用于药材浸出是一种省时便捷,值得推广的方法.3.4 色谱分离法3.4.1 硅胶柱色谱分离法硅胶柱色谱分离法主要是利用二氧化硅作为填料,是较为常用的柱色谱分离方法.硅胶是中性无色颗粒,其性能稳定.硅胶层析柱适用范围广,既能用于非极性生物碱也能用于极性生物碱,且成本低,操作方便,是常见的生物碱的分离方法.谢凤指等利用硅胶柱色谱和薄层色谱方法对广西九里香的95%乙醇提取物进行分离,得到咔巴唑生物碱和广西九里香碱[27].有报道用硅胶柱色谱分离从海南青牛胆中分离得到2种季铵型生物碱:海南青牛胆碱与巴马汀碱[28].3.4.2 大孔树脂分离法大孔树脂是一类有机高聚物吸附剂,是一种非凝胶型,注有致孔剂,不含交换基团,有含空隙结构的“纯聚合物”.其平均孔径在30～100A ,具有比表面积大,吸附容量大,选择性好,再生处理方便,吸附速度快等特点,特别适合于从水溶液中分离化合物[29].它的吸附作用与表面吸附、表面电性或形成氢键等有关[30],近年来在中草药有效成分的提取分离中受到普遍重视.罗集鹏[31]用大孔吸附树脂对黄连药材72 第27卷 第3期 马爱瑛:生物碱的提取与分离82固原师专学报(自然科学) 2006年5月 及其制剂中小檗碱进行富集,并用H PL C进行定量分析,结果表明D101型大孔吸附树脂对醛式或醇式小檗碱具有良好的吸附性能,且不宜被弱碱性水解吸附,含0.5%硫酸的5%甲醇解吸附能力较强.在左金丸中吴茱萸生物碱成份对小檗碱的富集和高效液相色谱分离均没有明显影响.以上说明大孔吸附树脂对水溶性生物碱有很好地富集作用,且不受其它脂溶性成份的影响.如秦学功等[32]开发了一种高效实用的提取分离苦豆子生物碱技术即用大孔树脂直接从苦豆杆浸取液中吸附分离生物碱,经实验证明此方法吸附快、解吸易、液体流动性好、树脂寿命长,具有良好的工业化前景.在对黄柏中总生物碱的提取纯化条件的优化研究显示,提取最佳工艺为醇提取,大孔树脂吸附纯化法,其重现性好,产率高[33].杨桦等,采用大孔吸附树脂比较并筛选乌头类总生物碱的提取分离最佳工艺条件.将川乌水提取液制备成8ml/g浓缩液,上柱,测定总生物碱含量.该方法可以分离出样品85%以上的乌头类生物碱,同时除去浸膏总量82%的水溶性固体杂质.为提高中药复方制剂中有效成分的含量,缩小服用剂量具有重要的意义[34].3.4.3 高速逆流色谱分离法高速逆流色谱分离法是一种新的分离技术,它对生物碱的分离和制备具有很大的优势,特别是对进样量较大的样品具有独特的优点,其应用前景越来越引人注目.高速逆流色谱分离法具有两大突出优点:(1)线圈中固定相不需要载体,因而清除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象;(2)特别运用于制备性的分离,每次进样体积较大,进样量也较多.目前,运用高速逆流色谱分离法来分离提纯生物碱的实例也有不少,比如张天佑等[35]以氯仿—甲醇—磷酸二氢钠缓冲液(23mmol/L,p H5.6)(体积比4¬3¬2)为溶剂系统,上相为固定相,下相为移动相,从茶叶的总生物碱中分离得到了咖啡碱和茶碱.可用高速逆流色谱分离法分离得到黄柏中的生物碱[36].3.5 膜提取法膜提取分离是一门高新技术,它对中草药提取浓缩、生物碱的提取分离及其他有效成分的提取分离具有不存在相转换、操作条件温和、提取分离效率高、不必添加化学试剂、不损坏热敏感物质、可极大的减少提取二序的优点,具有传统法无可比拟的优势[37].金万勤等采用A12O3陶瓷微滤膜澄清枳实、苦参水提液,并以有效成分的得率及固形物的含量与醇沉淀法作对比研究.研究表明,微滤的澄清除杂效果和有效成分的保留率与醇沉淀法基本相近,但微滤操作简单,膜的清洗方便,常温下进行,生产周期短,省去了大量乙醇试剂及浓缩蒸发过程.微滤法可替代传统的醇沉淀法澄清枳实水煎液.另一方面,与有机高分子膜相比,由于无机陶瓷膜具有耐高温、耐酸碱及有机溶剂,采用陶瓷膜对中药水煎液进行澄清处理时,煎煮液无需冷却可直接过滤,减少了生产环节[38].3.6 超临界萃取法超临界萃取法是20世纪80年代发展起来的一项新的提取分离技术.利用超临界流体为萃取剂,从液体或固体中萃取出待测组分.利用超临界流体是介于气体和液体之间的流体,同时具有气体和液体的双重特性.利用其在临界点附近体系温度和压力的微小变化,使物质溶解度发生几个数量级的突变特性来实现其对物质的提取分离.通过改变压力或温度来改变超临界萃取的性质,达到选择性地提取各种类型的化合物的目的[39].繁多的超临界萃取法种类中以二氧化碳最为常用.超临界二氧化碳具有超临界温度低,可在常温下操作,对大部分物质呈化学惰性,有效地防止热敏性和化学不稳定性成分的高温破坏和氧化;无色、无味、无毒,不残留于萃取物上,无溶剂污染,价廉易得,且易制成高纯度气体,不易燃烧,使用安全;从提取到分离一步完成,操作费用低;选择性好,通过调节温度和压力,可有针对性地萃取有效成分等特点.如采用超临界二氧化碳萃取技术提取亚东乌头总生物碱证明了超临界二氧化碳萃取在收率和含量上都比传统方法高[40].因而超临界二氧化碳技术在中草药有效成分的超临界流体萃取中应用较多[41、42、43].超临界二氧化碳极性小,适用于非极性或极性小的化合物的提取,但对极性物质的溶解度很低,常需要加入夹带剂,使其在改善或维持选择性的同时提高待萃取成分的溶解度,从而提高萃取效果,常用的夹带剂大多为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等有机溶剂,此外水、有机酸、有机碱等也可用作夹带剂.夹带剂的加入方式有静态加入和动态加入两种[44],具体采用何种方式视情况而定.J anicot等[45]以CO2—CH3O H—H20(质量比70∶24∶6)为夹带剂,在20M Pa、45℃的条件下,20min后就可从罂粟茎中提取出可因、吗啡、蒂巴因等5种生物碱.Kevin等[46]在萃取士的宁时,则两种方式相结合,先以甲醇为夹带剂静态萃取,而后动态加入夹带剂氯仿进行萃取,萃取效率高于单独使用甲醇或氯仿为夹带剂的效果.与常规溶剂法相比,效率相当,但有机溶剂法会产生大量的有害物氯甲烷,而SFE法更为方便、安全,并且基本无有害物质产生.夹带剂的使用提高了有效成分在溶剂中的溶解度,拓宽了萃取范围,提高了萃取效率.所以在CO2SFE系统中加入适量的有机溶剂作为夹带剂以增加CO2的溶解力不失为一种好的方法.4 小结根据生物碱提取分离的特点,综合上述提取方法可以看出溶剂提取法占主导地位,应用广泛,但存有不足.伴随着科学技术的不断进步和发展,人们将发现更多新的生物碱,生物碱独特效能也将不断发掘并得到广泛应用.为了最大限度的发挥生物碱的临床应用,优化生物碱的提取工艺,使中药走向现代化将成为人们努力的目标.生物碱提取与分离的方法将得到更加深入地研究和开发.参考文献: [1]南京大学化学系有机化学教研室编.有机化学(下册)[M].高等教育出版社,1988:329.[2]全国中等卫生学校统编教材《中草药化学》编写组.中草药化学[M].江苏科学技术出版社,1980:44-45.[3]肖崇厚.中药化学[M].上海科学技术出版社, 1994.[4]赵燕燕,崔承彬,蔡兵等.洋紫荆中生物碱类抗瘤活性成分的研究[J].中国药物化学杂志,2004,3(14):169 -171.[5]林洪生,李树奇等.三参冲剂对肺癌转移中内皮细胞及粘附因子的影响[J].中国肿瘤,1999,8(12):574-576.[6]钱学敏,李继强,罗鸿予等.氧化苦参碱抑制SMMC-7721细胞增殖的研究[J].上海第二军医大学学报,2002,22(6):512-514.[7]姜孟臣,陈虹,张敏.苦参碱对人H T1080细胞系增殖抑制的体外研究[J].武警医学院学报,2002,11(2): 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people.And t he Met hods of ext racting and separating have been improved and developed con2 tinuously.The application and develop ment of different met hods for extracting and separating of Alka2 loids,in recent years,were stated in t his paper,wit h more and more recognition of t hd medicine value of Alkaloids,t hd met hods of ext racting and separating will become more efficient,rapid and perfect.Key wor ds:Alkaloids;ext raction;separation(责任编辑 蔺勇) 03固原师专学报(自然科学) 2006年5月 。
