药用植物内生菌的分离和鉴定
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贵州白苞蒿抗肿瘤、抗氧化内生真菌的筛选与鉴定白苞蒿Artemisia lactiflora是一种重要的药用植物。
对已分离获得的54株白苞蒿内生真菌粗提物分别采用MTT法和DPPH法进行体外抗肿瘤和抗氧化活性筛选,并采用分子生物学方法对筛选出的活性内生真菌进行鉴定。
结果显示,共计10株(18.5%)白苞蒿内生真菌粗提物对人骨髓白血病细胞系(HL-60)、人乳腺癌细胞系(MCF-7)和人前列腺癌细胞系(PC-3)生长的抑制活性较好,其中以链格孢属GYBH47菌株粗提物的抗肿瘤活性最佳,对3种肿瘤细胞株的生长均有抑制作用;共计2株(3.7%)白苞蒿内生真菌粗提物的抗氧化活性较好,其中,拟茎点霉属GYBH42菌株粗提物同时具有抗氧化活性和细胞毒活性。
表明贵州白苞蒿内生真菌是寻找有价值的生物活性成分的潜在资源,其生物活性成分值得进一步研究和开发。
标签:白苞蒿;内生真菌;细胞毒活性;抗氧化活性;分子鉴定1 材料1.1 内生真菌贵州白苞蒿内生真菌54株,由本实验室分别自贵州省贵阳、毕节和威宁地区白苞蒿的根、茎和叶中分离获得,保存于贵州大学西南药用生物资源教育部工程研究中心药用真菌实验室。
1.2 肿瘤细胞HL-60(人白血病细胞)、MCF-7(人乳腺癌细胞)和COLO205(人结肠癌细胞)均购于南京凯基生物技术有限公司。
1.3 试剂试药阿霉素购于美国Sigma公司,DPPH自由基购于日本和光纯株式会社,Vit E购于中国食品药品检定研究院,真菌基因组DNA快速抽提试剂盒、Master Mix、异丙醇和真菌 5.8S rDNA通用引物ITS1(TCCGTAGGTGAACCTGCGG),ITS4(TCCTCCGCTTATTGATATGC)均购于生工生物工程(上海)有限公司。
乙酸乙酯(EtOAc)、二甲基亚砜(DMSO)、乙醇等试剂购于贵州鼎国生物技术有限公司,均为分析纯。
1.4 培养基马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基用于活化菌种;马铃薯葡萄糖液体(PDB)培养基用于培养种子液;查氏(Czapek′s)培养基用于菌株鉴定;肿瘤细胞株采用RPMI 1640培养,使用前加入10%胎牛血清。
红树植物内生真菌的分离鉴定及抗菌活性菌株的筛选陈昭华;伍菱;杨秋明;王骥妍;朱敏佳;杜希萍【摘要】本文对厦门集美红树植物无瓣海桑(Sonneratia apetala),海马齿(Sesuvium portulacastrum)和秋茄(Kandelia candel)的多个部位进行内生真菌的分离和形态鉴定,并采用菌饼法对分离到的内生真菌进行抗菌活性筛选.结果显示,从3种红树植物的根、茎、叶中分离得到25株内生真菌,分别隶属8个类群,以链格孢属和曲霉属为主,分别占菌株总数的28.0%和24.0%;有19株菌株对至少一种指示菌有抑制作用,占菌株总数的76.0%.研究结果表明,红树植物来源的内生真菌数量多,种属丰富,同时具有良好的抗菌活性,是研究抗菌活性化合物的重要资源.【期刊名称】《激光生物学报》【年(卷),期】2013(022)003【总页数】4页(P263-266)【关键词】红树植物;内生真菌;分离鉴定;抗菌活性【作者】陈昭华;伍菱;杨秋明;王骥妍;朱敏佳;杜希萍【作者单位】集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;福建省食品微生物与酶工程重点实验室,福建厦门361021;福建省高校食品微生物与酶工程技术研究中心,福建厦门361021;厦门市食品与生物工程技术研究中心,福建厦门361021【正文语种】中文【中图分类】Q939内生真菌(endophyte)是指生活于健康植物组织内部、不引发植物产生明显病症的一类真菌。
不但对促进宿主植物的生长发育,增强抗逆性起到重要作用,而且许多内生真菌能产生与宿主相同或相似的生物活性物质[1-2]。
目前已从植物内生真菌中发现多种具有抗肿瘤、抗病毒、降血糖、抗菌、杀虫、免疫抑制、酶抑制剂或激活剂等活性代谢产物,在医药业、农业的生物防治方面都显示出重要的应用价值[3-6]。
科技成果——农业内生菌资源分离鉴定技术成果简介植物内生菌(endophyte)是指能定殖在健康植物组织内,并与植物建立了和谐联合关系的一类微生物。
植物内生菌的研究已逐步成为生命科学领域一个新的研究热点,受到国内外植物学家和微生物学家的关注。
研究已经证实,内生菌在植物体内不仅积极地生存着,而且还能产生多种生物学作用,如固氮、促进植物生长和对病虫害的防治等作用。
人们注意到植物-内生菌这种和谐共生,互利共栖的生命形式,可能是未来生态型农业发展的一条重要思路。
所以,在“资源节约型,环境友好型”产业已逐渐成为国内外公认主流发展方向的今天,开展植物内生菌的研究不仅对植物微生物学科的研究对农业可持续发展也有重要的实践意义。
选择有研究和应用价值的模式植物和内生菌种是进行内生菌研究的先决条件,从农村地区一些重要作物(包括主要蔬菜)中分离多种内生菌是本项研究的首要工作。
随着这些大量植物内生菌资源的分离,植物内生菌研究就可以进一步深入。
本人目前已得到一批有重要植物促生作用的细菌及其培养技术,可以转化为工业化生产。
技术水平目前,国际上关于这些内生菌的生物学作用及在农业生产中的应用,属于应用性研究,包括固氮作用或菌肥、作物抗病抗逆、果蔬抗菌保鲜等;我们已对手头内生菌与宿主植物的相互作用机制这一的核心问题进行了深入系统的研究,从根本上对内生菌做出恰当评价,为解释其生物学作用及实际应用提供依据。
本项目负责人从事内生菌研究十余年,技术水平高,成熟。
市场前景由于内生细菌具有在应用与环境微生物学研究中的重要价值,而其在资源节约型,环境友好型现代农业中的应用已逐渐成为国内外公认主要发展方向。
内生菌与植物的联合作用机制是当前国际上内生菌研究中最受关注的问题。
本项研究,一方面可以从农村地区重要作物分离鉴定的具有多种生物学作用的内生菌,具有自主知识产权和自主创新性的独特优势,为其进一步应用于农业生产,减少或替代化肥和农药的施用;另一方面,本项研究有助于揭示内生细菌和宿主植物联合运作机制。
厚朴内生真菌的研究(Ⅰ):菌种分离及其鉴定【关键词】厚朴;内生真菌;多样性摘要:从两个不同来源的厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils.的茎中,分离获得内生真菌48株,经显微形态观察,鉴定为1纲、3目、6科、16属。
不同来源的厚朴内生真菌的种群、数量及分布部位存在显著差异。
关键词:厚朴;内生真菌;多样性Study on Endophytic Fungi in Magnolia officinalis Rehd. et Wils.(Ⅰ):Isolation and Identification of Endophytic FungiAbstract:48 strains of endophytic fungi were isolated from the stem of Magnolia officinalis Rehd. et Wils. They were morphologically identified belonging to 16 genera, 6 families, 3 orders and 1 class. The result of the experiment has shown that quantity, species and distributing of the endophytes varied in Magnolia officinalis Rehd. et Wils. of different habitat.Key words:Magnolia officinalis Rehd. et Wils.; Endophytic fungi; Diversity厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils. 是著名的川产道地药材, 属国家二级保护的珍惜濒危药用植物。
用于湿滞伤中,脘痞吐泻,食积气滞,腹胀便秘,痰饮咳喘等病症[1]。
植物内生真菌的分类鉴定方法植物内生真菌是一类普遍存在于自然界中的真菌,它们可以在植物根部、茎部或叶部内生生长,与植物形成共生关系。
植物内生真菌对于植物的生长和发育具有重要影响,可以提高植物的抗病性和耐逆性,促进植物的营养吸收和生长发育。
因此,对植物内生真菌进行分类鉴定具有重要的研究价值和实际应用价值。
植物内生真菌的分类鉴定方法主要包括形态学方法、分子生物学方法、生理生化检测方法和生态学方法等。
1.形态学方法形态学方法是最早被运用于真菌分类鉴定的方法之一,它主要依据菌丝形态、孢子形态等特征来判定真菌的分类,包括显微镜观察、培养、染色和制备特定部位切片等技术。
在植物内生真菌的分类鉴定中,形态学方法仍然是一个十分有效的方法,可以通过观察和比较不同内生真菌的形态差异,对其进行分类和鉴定。
例如,通过菌丝颜色、分枝形态和分枝密度的变化等形态特征,可以分辨不同内生真菌的区别。
2.分子生物学方法分子生物学方法是近年来在真菌分类鉴定中得到广泛应用的方法之一,它主要利用分子生物学技术对真菌的DNA序列进行分析,从而判定其分类和亲缘关系。
在植物内生真菌分类鉴定中,分子生物学方法可以通过分析其ITS序列、LSU序列、SSU序列等核酸序列的变化,从而对不同内生真菌进行分类和鉴定。
例如,可以通过PCR扩增和直接测序技术,获得不同内生真菌的ITS序列和其他核酸序列,从而进行系统进化分析和分类鉴定。
3.生理生化检测方法生理生化检测方法是通过对内生真菌的代谢产物、亲和性和生理生化过程等进行分析,从而对其分类和鉴定。
这种方法需要对内生真菌进行培养,然后测定其代谢产物,检测其生长速度、形态变化等生理生化特征,可以通过分析这些特征来判定内生真菌的分类和亲缘关系。
例如,可以通过分析内生真菌的抗生素、荧光素、色素等代谢产物的类型和数量来推断其分类和鉴定。
生态学方法主要是通过采集和调查内生真菌所存在的环境和条件,从而判定其分类和亲缘关系。
这种方法需要在自然环境中采集内生真菌,通过对其存在环境的调查和分析来推断内生真菌的分类和亲缘关系。
蒲公英内生真菌分离纯化及其形态学鉴定作者:赵秋丁海娥党苗苗陈思张道顺从炳超来源:《农产品加工·下》2019年第07期摘要:蒲公英是一种传统的植物同源医药和食品,具有良好的抗菌和消炎作用。
蒲公英提取物含有各种具有抗菌活性的化合物,而内生真菌产生相同或相似的代谢物作为宿主植物,它可以打开抗菌化合物的开发和利用新的方式。
药用植物蒲公英可以培养多种内生真菌。
因此,以新鲜根、茎和叶,无昆虫的蒲公英为材料,对其内生真菌及形态学等方面进行了初步研究。
结果表明,运用组织切块法,从蒲公英的植物组织中分离出14种内生真菌;采用平板划线法分离纯化蒲公英根、茎、叶培养的内生真菌;观察、分离和纯化内生真菌的形态学鉴定。
关键词:蒲公英;内生真菌;形态学鉴定中图分类号:TQ461; ; ; 文献标志码:A; ; doi:10.16693/ki.1671-9646(X).2019.07.049Abstract:Dandelion is a traditional plant homology of medicine and food. It has good antibacterial and anti-inflammatory function. The dandelion extracts contains compounds with multiple antibacterial activity,while the endophytic fungi can produce the same or similar metabolites with the host plant. The medicinal plant dandelion can cultivate a variety of endophytic fungi. Therefore,this topic selected the roots,stems and leaves of fresh and insect-free dandelion as materials,and the preliminary research on endophytic fungi and morphology,the main ways and results were as follows:14 endophytic fungi were isolated from dandelion plant tissues by issue dicing;Endophytic fungi cultured from dandelion roots,stems and leaves were isolated and purified by flat scribe;morphological identification of endophytic fungi isolated and purified.Key words:Taraxacum mongolicum Hand-Mazz;endophytic fungi;morphological identification0; ;引言近年來,已经成为生物制药有效途径之一的是将生物活性成分从天然产物中提取出来[1-2]。
中草药日本鸢尾内生真菌的分离及其初步鉴定作者:李盼武才琪王庆林来源:《湖南中医药大学学报》2019年第02期〔摘要〕目的分析日本鸢尾(Iris japonica)内生真菌的类群分布。
方法通过菌落形态特征、显微镜下的孢子观察及基于ITS序列分析的分子生物学鉴定分析日本鸢尾各部位内生真菌的类群组成。
结果从日本鸢尾的根茎叶中共分离得到5种内生真菌。
根中分离得到的内生真菌为橘青霉(Penicillium citrinum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),茎中为小新壳梭孢菌(Neofusicoccum parvum),葉中为橘青霉(Penicillium citrinum)、肉色隔孢伏革菌(Peniophora incarnata)、首都叶点霉(Phyllosticta capitalensis)。
结论自日本鸢尾分离获得5种内生真菌,其分布具有一定的组织特异性,可为药用植物内生真菌的开发和利用提供一定基础。
〔关键词〕日本鸢尾;内生真菌;分离;鉴定〔中图分类号〕R284;R372; ; ; 〔文献标志码〕A; ; ; ;〔文章编号〕doi:10.3969/j.issn.1674-070X.2019.02.011内生真菌是指一类生活在植物组织内部而不使宿主植物产生明显病害症状的真菌[1-2]。
植物内生真菌以其丰富的多样性和复杂性,作为微生物资源宝库之一,具有巨大的潜能,而且具有生物活性化合物的比例明显比土壤来源的微生物高[3],因此,植物内生真菌的分离、鉴定、生物活性物质、次级代谢产物活性的研究近年来已经成为国内外学者研究的热点[4-7]。
日本鸢尾(Iris japonica Thunb)是天门冬目鸢尾科的草本植物,又名蝴蝶花、白花射干,原产地是中国、日本和韩国,其性寒、味苦,具有清热解毒、消痰、利咽的功能,在临床上对治疗咽喉炎有很好的疗效,特别用于治疗喉头痉挛水肿效果尤好,此外,与其他中药配伍对感冒、气管炎、慢性胃炎、肝炎都有一定疗效,因此,该植物具有较好的应用前景[8]。