实验 酵母RNA的分离及组分鉴定

实验4 酵母RNA的分离及组分鉴定酵母RNA是由酵母细胞合成的核糖核酸，包含了酵母细胞的遗传信息，并参与了细胞的生理代谢过程。

本实验旨在通过离心分离和酸性酚/氯仿法提取，纯化酵母RNA，并通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳等方法对酵母RNA进行组分鉴定。

一、材料与方法1.材料酵母细胞、DTT、Tris、EDTA、NaCl、硝酸、醋酸等。

2.方法1)制备样品a.在液氮中将酵母细胞粉磨成细粉；b.称取10mg酵母细胞粉末加入1ml去离子水中，振荡混匀，制成1mg/ml的酵母细胞悬液。

2)离心分离a.取1ml稀释后的酵母细胞悬液，离心10000rpm/10min，弃去上清液；b.用10μl无菌去离子水重悬沉淀，制成1mg/ml的RNA悬液。

3)RNA的提取和纯化a.取1ml离心沉淀物加入700μl去离子水，混合均匀，加入100μl10%SDS和100μl 酸性酚(pH4.5)混合，振荡15min；b.加入300μl氯仿，振荡混合，离心12,000g/10min；c.取上层水相(约600μl)，加入等量异丙醇混合，振荡；d.离心12,000g/5min，弃去上清液，将胶状RNA沉淀用70%酒精重悬，制成1mg/ml的RNA溶液。

4)鉴定RNAa.测定RNA含量和纯度b.通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA条带。

c.用紫外吸收光谱测定RNA吸收光谱曲线。

5)结果分析a.通过鉴定RNA的吸收峰和电泳图谱来分析RNA组分。

二、实验结果1.酵母RNA提取和纯化效果良好，制得1mg/ml的RNA溶液。

2.根据紫外吸收光谱结果，可以看到RNA在260nm的吸收峰高于280nm，证明纯化后的RNA具有良好的纯度。

3.琼脂糖凝胶电泳显示，RNA溶液中有一个清晰的28S条带和一个模糊的18S条带，证明RNA转录水平较高。

三、讨论和结论通过离心分离和酸性酚/氯仿法提取纯化酵母RNA，可以得到高质量和高纯度的RNA样品。

此外，琼脂糖凝胶电泳和紫外吸收光谱可以对RNA组分和质量进行鉴定，为后续的RNA研究提供了有价值的基础数据。

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告一、实验目的本次实验旨在通过实验方法，对酵母细胞中的核糖核酸进行分离和组分鉴定，了解酵母细胞中核糖核酸的基本特性和组成。

二、实验原理1. 酵母细胞中RNA的基本特性RNA是一种由核苷酸构成的生物大分子，它与DNA类似，但其主要功能是参与蛋白质合成。

RNA包括mRNA、tRNA和rRNA三种类型。

其中mRNA是转录过程中产生的信息分子，tRNA则将氨基酸运输到肽链上进行合成，而rRNA则是构成核糖体的重要组成部分。

2. RNA的提取方法常用的RNA提取方法包括：碱裂解法、有机溶剂提取法、硫酸盐沉淀法等。

其中硫酸盐沉淀法在提取纯度高、效率高等方面表现较好。

3. RNA电泳将提取出来的RNA样品经过琼脂糖凝胶电泳后可以得到不同大小的带状图谱，根据不同大小可以初步判断出样品中含有哪些类型的RNA。

三、实验步骤1. 酵母细胞的培养和收获将酵母菌株接种到含有YPDA培养基的锥形瓶中，在室温下静置培养48小时，直至菌落生长到一定程度。

然后将菌液离心收获，去除上清液。

2. RNA的提取和纯化将离心后的酵母细胞加入10ml Tris-EDTA缓冲液中，加入等体积的酚/氯仿混合液混合均匀，离心分离上清液中的DNA和蛋白质。

再用等体积异丙醇沉淀RNA，在70%乙醇中洗涤，最后用DEPC水重悬RNA。

3. RNA电泳将提取出来的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，经过染色后在紫外线下观察不同大小带状图谱。

四、实验结果与分析通过实验方法得到了纯化后的RNA样品，并进行了琼脂糖凝胶电泳。

实验结果显示，在琼脂糖凝胶电泳中可以看到明显的28S、18S两种大小不同的RNA带，表明样品中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。

五、实验结论通过本次实验，成功地提取出了酵母细胞中的RNA，并进行了琼脂糖凝胶电泳分析。

结果表明，酵母细胞中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。

这为我们深入了解酵母细胞内部核糖核酸的组成和特性提供了基础数据。

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告实验目的，通过实验，掌握酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深对核酸的理解。

实验仪器和试剂，离心机、pH计、琼脂糖凝胶电泳仪、琼脂糖、酵母细胞、蛋白酶K、RNase A、RNase T1、DNase I、酚/氯仿、异丙醇、无水乙醇、三氯乙酸、乙醇、磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、EDTA、蛋白酶K缓冲液、RNase A 缓冲液、RNase T1缓冲液、DNase I缓冲液。

实验步骤：1. 酵母细胞的裂解。

将酵母细胞加入磷酸盐缓冲液中，加入蛋白酶K，用pH计调节至碱性，加入酚/氯仿混合液，离心分离上清液和沉淀。

2. RNA的提取。

将上清液加入异丙醇，离心，取上清液，加入无水乙醇，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。

3. RNA的纯化。

将RNA加入三氯乙酸和乙醇混合液，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。

4. RNA的酶切。

将RNA加入RNase A缓冲液，RNase T1缓冲液和DNase I缓冲液进行酶切反应。

5. RNA的电泳分析。

将酶切后的RNA样品加入琼脂糖凝胶电泳仪中进行电泳分析，观察RNA的组分鉴定。

实验结果：经过琼脂糖凝胶电泳分析，我们观察到了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定结果。

根据不同的迁移率，我们可以清晰地看到RNA在凝胶上的分布情况，从而确定RNA的组成和大小。

实验结论：通过本次实验，我们成功地实现了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定。

通过实验，我们加深了对核酸的理解，掌握了相关的实验技术和方法。

实验总结：本次实验不仅是对课堂知识的巩固和实践，也是对科学研究方法的探索和运用。

通过实验，我们不仅学到了理论知识，更加深了对实验技术和方法的理解和掌握。

在今后的学习和科研工作中，我们将继续努力，不断提高实验技术水平，为科学研究做出更大的贡献。

以上就是本次酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验的报告内容，谢谢阅读。

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告目录1. 实验目的1.1 研究背景1.2 实验目的2. 实验原理2.1 酵母核糖核酸2.2 分离技术3. 实验步骤3.1 样品制备3.2 离心分离3.3 纯化提取3.4 鉴定分析4. 实验结果与讨论5. 实验结论6. 参考文献1. 实验目的1.1 研究背景在细胞内，核糖核酸（RNA）是一种重要的核酸分子，其功能涉及到基因的转录和翻译。

酵母细胞中的RNA有着重要的生物学功能，因此进行酵母核RNA的分离与组分鉴定具有一定的研究意义。

1.2 实验目的通过实验，掌握酵母核RNA的分离技术，了解其基本组成和结构特点，为后续RNA在生物学领域的应用提供基础支持。

2. 实验原理2.1 酵母核糖核酸酵母核RNA是一种由核糖核酸组成的RNA，主要参与酵母细胞内的基因表达和蛋白质合成过程。

2.2 分离技术本实验将采用离心分离和纯化提取的方法，通过差速离心将细胞裂解液中的酵母核RNA和其他细胞组分进行分离，再利用纯化技术进行酵母核RNA的提取。

3. 实验步骤3.1 样品制备准备酵母细胞样品，通过适当的处理方法制备得到待分离的样品。

3.2 离心分离采用差速离心技术，以不同细胞组分的密度差异进行分离，获得含有酵母核RNA的分离物。

3.3 纯化提取通过特定的纯化方法，将酵母核RNA从其他细胞组分中纯化提取出来，得到较纯的酵母核RNA溶液。

3.4 鉴定分析对分离得到的酵母核RNA样品进行各种分析技术，如凝胶电泳和质谱分析，确定其组分、纯度和结构特点。

4. 实验结果与讨论根据实验结果进行数据分析，探讨实验过程中出现的现象和可能的问题，进一步加深对酵母核RNA的理解。

5. 实验结论总结实验过程中取得的重要发现和结论，反思实验方法的可行性和局限性，为未来相关研究提供借鉴。

6. 参考文献列出本实验报告涉及的参考文献，方便读者进一步了解酵母核RNA分离及组分鉴定的相关知识。

实验三酵母RNA的提取、测定及组成成分的分析Ⅰ酵母RNA的提取——浓盐法【目的和要求】了解用浓盐法提纯RNA的基本原理和方法【基本原理】核酸是一类不稳定的生物大分子，在制备过程中很容易发生降解。

因此，要使制得的核酸尽可能保持其在生物体内的天然状态，制备核酸必须采取温和的条件，例如避免过酸碱，避免剧烈的搅拌，防止核酸降解酶类的作用。

由于RNA种类较多，所以制备方法也各异。

工业上制备RNA一般选用成本较低、适宜于大规模操作的稀碱法和浓盐法。

稀碱法是用1%NaOH溶液，将细胞壁溶解，用酸中和，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质与核酸分离，然后除去菌体，将pH调至RNA的等电点(pH2.5)，使RNA沉淀出来。

稀碱法的优点是抽提时间短，但RNA在此条件下不稳定，容易分解。

浓盐法是用10%NaCL溶液改变细胞膜的通透性，使核酸从细胞内释放出来。

用浓盐法提取RNA，则就注意掌握温度，避免在20～70℃之间停留时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率。

利用加热至90～100℃，使蛋白质变性，破坏该酶类，有利于RNA的提取。

若要提取接近天然状态RNA，可采用苯酚法或氯仿-异戊醇法去蛋白，然后用乙醇沉淀RNA。

离心收集。

本实验采用浓盐法（10% NaCL）【操作方法】1．提取称取干酵母粉2g于50mL三角瓶内。

加10% Nacl溶液10mL，搅拌均匀，然后于沸水浴中提取半小时。

2．分离将上述提取液取出，用自来水冷却，分装在离心管内，以3500r/min离心10min，使提取液与菌体残渣等分离。

3．沉淀RNA将离心得到的上清液倾于50mL烧杯内，并置于放有冰块250mL烧杯中冷却。

待溶液冷至10℃以下时，在搅拌下小心地用6mol/L HCL溶液调节pH至2.0～2.5。

随着pH值的下降，溶液中白色沉淀逐渐增加，到等电点时沉淀量最多（注意严格控制pH值）。

调好后继续于冰浴中静置10min，使沉淀充分，颗粒变大。

生物化学实验报告-酵母RNA的提取与鉴定实验五酵母RNA的提取与鉴定一、实验目的1.掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。

2.了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。

二、实验原理1.酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。

2.RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。

3.用碱液提取的RNA有不同程度的降解三、实验仪器1.离心机2.水浴锅3.电炉4.烧杯5.量筒四、实验试剂1.干酵母粉2.0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。

3.乙酸4.95%乙醇5.无水乙醚6.10%硫酸7.氨水9.5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。

1.苔黑酚-三氯化铁溶液：将100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加入100mgFeCl3.6H2O。

临用时配制。

五、实验步骤1.RNA的提取：（1）称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~10ml氢氧化钠）。

然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH 试纸检验），离心10-15分钟（4000r.p.m）。

（2）取上清液，加入2倍体积的95%乙醇，边加边搅，加毕，静止，待完全沉淀，过滤。

（3）滤渣先用95%乙醇洗2次，每次约5毫升，再用无水乙醚洗2次，每次也约5ml。

（4）洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。

乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA，可鉴定。

2.鉴定：（1）取上述RNA约0.5g，加10%硫酸5ml,加热至沸1—2分钟，将RNA水解。

（2）取水解液0.5ml，加入苔黑酚-三氯化铁溶液1ml，加热至沸1分钟，观察颜色变化。

（3）水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生絮状嘌呤银化合物。

六、实验结果加热至沸1分钟后，溶液变成绿色；产生絮状嘌呤银化合物沉淀七、实验分析实验注意事项1.过滤时,洗涤不能带水,否则沉淀粘在滤纸上取不下来。

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告引言：酵母核糖核酸（RNA）是一种重要的生物分子，具有多种功能。

通过对酵母RNA的分离和组分鉴定实验，我们可以更好地了解其结构和功能。

本实验旨在通过一系列实验步骤，从酵母细胞中分离出RNA，并对其进行组分鉴定。

实验材料和方法：1. 酵母细胞培养液2. 细胞裂解液3. 高速离心机4. RNase酶5. RNA提取试剂盒6. 紫外可见光分光光度计实验步骤：1. 酵母细胞的培养和收获：将酵母细胞培养液置于适宜的培养条件下，培养至细胞密度达到一定程度后，用离心机将细胞沉淀下来。

2. 细胞裂解：将细胞裂解液加入细胞沉淀中，充分裂解细胞膜，释放出内部的细胞器和分子。

3. RNA提取：使用RNA提取试剂盒，按照说明书的步骤进行RNA的提取。

这一步骤主要是通过化学方法将RNA分离出来。

4. RNase酶处理：为了去除可能存在的DNA和蛋白质的污染物，可以使用RNase酶对提取的RNA进行处理。

5. 紫外可见光分光光度计测定：使用紫外可见光分光光度计对提取的RNA溶液进行测定，以确定RNA的浓度和纯度。

结果与讨论：通过以上的实验步骤，我们成功地从酵母细胞中分离出了RNA，并对其进行了组分鉴定。

在RNase酶处理后，我们发现RNA的纯度得到了明显的提高。

通过紫外可见光分光光度计的测定，我们确定了RNA的浓度。

酵母RNA的组分鉴定是一个复杂而重要的过程。

通过进一步的实验，我们可以对RNA进行凝胶电泳分析，以确定RNA的大小和分子量。

此外，我们还可以使用逆转录酶和聚合酶链反应（RT-PCR）等技术，对RNA进行进一步的研究，以了解其在基因表达调控中的作用。

结论：通过本实验，我们成功地从酵母细胞中分离出了RNA，并对其进行了组分鉴定。

这为我们进一步研究RNA的结构和功能奠定了基础。

酵母RNA在生物学研究中具有重要的意义，对于深入了解细胞的基因表达调控机制具有重要的参考价值。

酵母RNA的提取一、实验目的1、掌握酵母RNA提取的方法。

2、了解核酸的组成。

3、掌握鉴定核酸组分的方法和操作。

二、实验原理三、实验步骤1、用托盘天平称1g干酵母于研钵中，加入少许石英砂，再加入2ml 0.04mol/LNaOH溶液，在研钵中充分研磨至少5min。

2、再加4ml 0.04mol/LNaOH溶液于匀浆液中，混匀后，将匀浆液转移到大试管中，再用4ml 0.04mol/LNaOH溶液洗涤研钵，洗涤液并入匀浆液中。

3、将大试管小心在沸水浴中加热30min，冷却后倒入离心管中，与另一组同学的离心管在托盘天平上平衡，然后两组的离心管对称地放入离心机中，2000r/min下离心15min。

4、吸取10ml酸性乙醇溶液于小烧杯中，将离心管上清液小心倒入小烧杯中，边倒入边搅拌，直到RNA沉淀完全。

5、将小烧杯中的液体倒入2个干净的离心管，平衡、离心（2000r/min）3min。

6、弃去两离心管上清液，各离心管中加入95%乙醇2.5ml，振荡、混匀、平衡、离心（2000r/min）3min。

7、弃去两离心管上清液，各离心管加入3ml 1.5mol/L硫酸，混匀、倒入同一个大试管中，贴上标签，放在试管架上，备用。

8、将水解液在沸水浴中加热至少10min，使沉淀RNA充分水解。

9、取一支试管A，加入1ml 0.1mol/L硝酸银溶液，再逐滴加入浓氨水至沉淀消失，然后加入1ml水解液放置片刻，观察有无白色嘌呤碱的银化合物沉淀。

10、另取一支试管B，加入水解液1ml，三氯化铁浓盐酸溶液2ml和地衣酚乙醇溶液0.2ml（约4滴），混匀，用试管夹夹好后放到沸水浴中3~5min，注意观察溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。

11、再取一支试管C，加入水解液1ml和定磷试剂1ml，混匀，在沸水浴中加热，注意观察溶液颜色的变化，溶液变蓝，说明磷酸存在。

注意事项：离心一定要平衡对称放入离心机中，离心机达到设置转速时才能离开。

※实验六酵母RNA的分离及组分鉴定【实验目的】了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。

【实验原理】酵母核酸种RNA含量较多。

RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀。

由此即得到RNA的粗制品。

核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。

加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。

鉴定依据：磷酸与定磷试剂反应产生蓝色物质。

核糖与苔黑酚作用产生绿色物质。

嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤碱银化合物沉淀。

【实验器材】150ml锥形瓶、水浴、量筒、漏斗及抽虑瓶、吸管7、滴管8、试管及试管架9、烧杯、离心机、漏斗【试剂和材料】1、0.04 mol/L氢氧化钠溶液；2、酸性乙醇溶液：将0.3毫升浓盐酸加入30毫升乙醇中；3、95%乙醇；4、乙醚；5、1.5 mol/L硫酸溶液；6、浓氨水；7、0.1 mol/L硝酸银溶液；8、三氯化铁浓盐酸溶液：将2 ml 10%三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入到400ml浓盐酸中；9、苔黑酚（地衣酚）乙醇溶液：溶解6 g苔黑酚于100 ml 95%乙醇中（可在冰箱中保存一个月）；10、定磷试剂：（1）17%硫酸溶液：将19ml浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83ml水中（2）2.5%钼酸铵溶液：将2.5 g钼酸铵溶于100 ml水中（3）10%抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100ml水中，贮棕色瓶保存（溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失败，需纯化抗坏血酸）。

临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。

17%硫酸溶液：2.5%钼酸铵溶液：10%抗坏血酸溶液：水=1：1：1：2 (V/V)；11、酵母粉。

【实验操作】1、溶解RNA将5 g酵母悬浮于90 ml 0.04 mol/L氢氧化钠溶液于150 ml锥形瓶中，在沸水浴中加热30分钟，制成碱提取液，将其冷却。

2、解聚RNA将冷却的碱提取液离心（6000ｒ/min）5分钟，将上清液用乙酸调节pH至酸性（pH5~6））缓缓倾入30 ml乙醇溶液中，注意要一边搅拌一边缓缓倾入。