酵母菌的分离纯化

YPD培养基YPD 或YPED，：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出粉胨配方：1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉配制方法：1 .溶解10gYeast Extract（酵母膏）, 20gPeptone（蛋白胨）,20g琼脂粉于900ml水中2 .高压 115度 20min3.加入100ml 10×Dextrose (glucose)（葡萄糖），(葡糖糖溶液灭菌后加入) ,注：葡萄糖，yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。

酵母的分离与纯化1、接种：取酵母0.5克，加入到5ml的YPD培养液中，在30℃摇床中过夜培养，可见培养液变浑浊。

2、计数：将酵母菌液稀释到合适的倍数（约102-103倍）以每小格的菌数可数为度，涂于血球计数板上，在高倍显微镜下计数酵母菌数。

3、涂皿：将培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml稀释合适倍数的菌液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。

做平行样。

4、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上三区划线，培养后分离得到单个菌落。

5、镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。

6、菌种保藏：接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱保藏。

血球计数板使用1.取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液，然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。

2.静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。

将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。

葡萄自然发酵过程中酵母的分离鉴定及优良葡萄酒酵母筛选葡萄酒是一种以葡萄为原料经过发酵工艺制成的酒类，其口感和品质与所用酵母菌种密切相关。

在葡萄自然发酵过程中，酵母菌会附着在葡萄皮上，并参与发酵过程。

本文旨在分离鉴定这些酵母菌，并筛选出优良的葡萄酒酵母。

材料与方法1. 材料（1）原料：葡萄（品种为赤霞珠）、酵母粉、发酵桶、过滤器、实验室用显微镜等。

（2）试剂：麦芽汁、琼脂糖、葡萄糖、蛋白胨、氯化钠、孟加拉红、美蓝等。

2. 方法（1）葡萄皮上酵母菌的分离与纯化将葡萄皮放入麦芽汁培养基中，于30℃培养3-5天。

每天观察并记录菌落形态和数量。

将分离得到的菌株进行纯化，直至获得单一菌株。

（2）酵母菌的鉴定采用形态学和分子生物学方法对酵母菌进行鉴定。

形态学方法包括显微镜观察、革兰氏染色、芽孢染色等；分子生物学方法包括PCR扩增、序列分析等。

（3）优良葡萄酒酵母的筛选将分离纯化得到的酵母菌株分别接种到葡萄汁培养基中，于适宜温度下培养。

观察并记录不同菌株的生长情况、产酒精度等指标。

筛选出发酵性能优良的菌株。

结果与讨论1. 结果经过分离鉴定，我们共得到10种不同的酵母菌株。

通过形态学和分子生物学方法对这些菌株进行鉴定，确定它们分别属于酿酒酵母属、毕赤酵母属等不同种类。

在葡萄酒发酵性能测试中，发现某些菌株具有较高的发酵活性和酒精产量。

具体数据如下表所示：2. 讨论本研究从葡萄皮上分离得到了10种不同的酵母菌株，并对其进行了鉴定和发酵性能测试。

结果表明，这些菌株在葡萄酒发酵中具有不同程度的活性。

其中，S3、S7和S10菌株的发酵活性和酒精产量较高，具有作为优良葡萄酒酵母的潜力。

后续研究可以进一步探讨这些菌株在不同酿造条件下的表现和遗传特性，为实际生产中的酵母选育提供理论依据。

同时，对于筛选出的优良菌株进行基因组学和蛋白质组学方面的研究，有助于深入了解其代谢机制和生物学特性，为葡萄酒品质的提升提供技术支持。

苹果⽪、葡萄⽪、沙果⽪表⾯酵母菌分离纯化苹果⽪、葡萄⽪、沙果⽪表⾯酵母菌分离纯化王建福（沈阳农业⼤学⼟地与环境学院，辽宁沈阳110161）摘要本⽂通过对酵母菌的细胞形态、结构、繁殖⽅式、孢⼦的形成、菌落的⼤⼩形态、质地、颜⾊、⽓味的观察，对从苹果⽪，葡萄⽪，沙果⽪上分离得到的酵母菌进⾏分类鉴定。

结果显⽰，有酿酒酵母、克勒克酵母属酵母菌、红酵母属酵母菌。

关键词：苹果⽪；葡萄⽪；沙果⽪；酵母菌；分离；鉴定Isolation and o purification of yeasts from the surface of apple skin ，grape skinand Chinese pear-leaved crabapple skinwangjianfu(Shenyang Agricultural University Land and Environment Institute，Liaoning Shenyang 110161)Abstract :This paper focused on isolation and identification of yeasts from apple skin ，grape skin and Chinese pear-leaved crabapple skin。

The following assays was done ,including observation of size ,structure ,characteristic of stain, types of asexual reproduction on sexual reproduction and ascus,colony,size ,quality, colour, transparency and smell of colony. to identify the yeasts from apple skin ，grape skin and Chinese pear-leaved crabapple skin。

第1篇一、实验目的1. 掌握酵母提取的基本原理和方法。

2. 学习酵母提取过程中所涉及的实验技术。

3. 了解酵母提取的注意事项。

二、实验原理酵母是一种广泛存在于自然界中的单细胞真菌，具有丰富的营养成分和生物活性物质。

酵母提取是指从酵母细胞中提取出具有生物活性的物质，如蛋白质、核酸、多糖等。

本实验采用有机溶剂提取法，通过酵母细胞破碎、离心分离、洗涤、干燥等步骤，提取酵母细胞中的活性物质。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：新鲜酵母细胞、蒸馏水、无水乙醇、丙酮、硫酸铵、NaCl、CaCl2、MgCl2、FeCl3、K2HPO4、KH2PO4等。

2. 实验试剂：0.2mol/L NaOH、0.5mol/L HCl、0.1mol/L Tris-HCl、1mol/L NaCl、1mol/L MgCl2、1mol/L CaCl2、1mol/L FeCl3、1mol/L K2HPO4、1mol/L KH2PO4等。

四、实验步骤1. 酵母细胞破碎：取一定量的新鲜酵母细胞，用无菌蒸馏水洗涤2-3次，去除杂质。

然后，将酵母细胞转移到无菌研钵中，加入适量的无水乙醇和丙酮，研磨至细胞破碎。

2. 离心分离：将破碎后的酵母细胞悬浮液转移到离心管中，以3000r/min离心10分钟，分离出上清液和沉淀物。

3. 洗涤：取沉淀物，用0.2mol/L NaOH溶液洗涤2-3次，去除杂质。

然后，用0.5mol/L HCl溶液中和至pH值为7.0。

4. 蛋白质沉淀：向中和后的酵母细胞悬浮液中加入适量的硫酸铵，使蛋白质沉淀。

然后，以3000r/min离心10分钟，分离出沉淀物。

5. 洗涤：取沉淀物，用1mol/L NaCl溶液洗涤2-3次，去除杂质。

6. 干燥：将洗涤后的沉淀物转移到干燥器中，于40℃下干燥至恒重。

五、实验结果与分析1. 酵母细胞破碎：通过研磨，酵母细胞被破碎，释放出细胞内的活性物质。

2. 离心分离：离心分离出上清液和沉淀物，上清液中含有蛋白质、核酸等活性物质，沉淀物中含有酵母细胞壁等杂质。

天然酵素酵母菌分离及理化特性鉴定作者：彭禹铭刘巳齐李婧婧纪可欣李岑刘艳霞来源：《吉林蔬菜》2021年第01期摘要：从复合水果酵素中分离酵母菌，通过形态学特征，生理生化指标进行鉴定，并对其生长特性进行研究，结果表明：分离出的A1、A2、A3为水果酵素中的优势酵母，其具有耐高糖，耐低pH、耐高渗、耐一定酒精浓度特性，其可在初始糖量400g/L以下，pH为2以上，酒精浓度12%以下的环境中生长。

关键词：酵素;酵母;分离;生理生化特性;1 前言酵素食品是指新鲜果蔬、谷物、菌菇或其它食用植物等为原料，经微生物发酵形成的，富含维生素、酶、多酚类化合物等多种生物活性物质的产品[1]。

其在维持机体代谢，促消化、修复组织，抗氧化、减肥，净化血等方面具有不可代替的功效[2-4]。

酵素生产主要是自然发酵过程，在其发酵过程中会产生多种酶类、短链脂肪酸、醇、酯等代谢产物。

自然发酵过程中微生物主要来源于原料本身和加工环境，其中部分微生物会快速生长并成为优势菌，例如乳杆菌、等细菌和毕赤酵母、少见的伊萨酵母和酿酒酵母等。

2 试验材料与方法2.1 材料复合水果酵素原液：发酵3个月，还原糖含量620g/L，pH3.25，硫酸铵、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、二水氯化钙、氯化钠、酵母膏、酵母粉、蛋白胨、葡萄糖;PDA培养基、YEPD 培养基、碳源基础培养基、氮源基础培养基、无维生素培养基。

2.2 实验方法2.2.1 工藝流程果肉→破碎→调配混合→发酵→成品→酵母培养→酵母分离纯化。

2.2.2 酵母菌的分离纯化用梯度稀释法，将样品涂布于PDA培养基上进行分离纯化，纯化后转接于斜面保存待用。

2.2.3 形态特征鉴定菌落形态观察：将纯化好的单菌落接种于PDA固体培养基和PDA液体培养基，于28℃恒温培养72h，记录菌落大小、形状、颜色、质地是否有凹凸。

显微观察：挑取少许单菌落于载玻片上，用灭菌生理盐水稀释，加盖玻片，于显微镜下观察记录细胞形态、菌体大小、形状、繁殖方式。

酵母菌的纯培养实验报告单班级：____________ 实验日期：______________指导教师：___________ 学生姓名：_____________ 小组成员有：_____________实验原理分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。

采用平板画线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在菌体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。

目的要求1.学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。

2.学会进行无菌操作。

3.尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。

材料用具酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸（或报纸）、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。

方法步骤1.制备培养基配制培养基称取去皮的马铃薯200g，切成小块，加水1000mL,加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。

向滤液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15～20g琼脂，用蒸馏水定容至1000mL。

灭菌将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再让如高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15～30min。

将5 ～8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160 ～170℃灭菌2h。

倒平板待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。

倒平板的具体操作步骤如下。

2.接种和分离酵母菌通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

经过数次划线后培养，可以分离得到单菌落。

平板划线的具体操作见下面的流程图。

3.培养酵母菌完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的培养箱中培养24 ～48h。

酵母菌培养操作一、引言酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中，是生物学研究中常用的模式生物。

酵母菌在许多领域都有重要的应用，如发酵工业、食品工业和生物医学研究等。

为了研究酵母菌的生物学特性和开发应用，科学家们需要进行酵母菌的培养操作。

本文将介绍酵母菌培养操作的步骤和注意事项。

二、酵母菌培养操作步骤1. 选择培养基：选择适合酵母菌生长的培养基，常用的培养基包括YPAD培养基、YPD培养基和SD培养基等。

培养基的选择应根据具体实验目的和需求进行。

2. 预处理培养基：按照配方将培养基加入蒸馏水中，加热煮沸，然后冷却至室温。

在培养基中加入抗生素可以抑制杂菌的生长。

3. 接种酵母菌：将酵母菌从冰冻保存的培养物中取出，用一次性接种环或一次性吸管接种酵母菌到培养基中。

注意避免杂菌的污染。

4. 培养酵母菌：将接种好的培养基置于恒温摇床中，设置适当的温度和摇动速度，促进酵母菌的生长。

培养时间根据实验需求而定，通常为24小时。

5. 酵母菌的分离和传代：将培养好的酵母菌涂布在含有琼脂的培养基上，通过酵母菌的单个菌落分离得到纯化的酵母菌株。

然后，将纯化的酵母菌株传代至新的培养基中，以维持酵母菌的生长。

6. 储存酵母菌：将酵母菌株保存在低温下，通常为-80℃的冰箱或液氮罐中，以便长期保存和使用。

三、酵母菌培养操作注意事项1. 严格遵守无菌操作：在培养酵母菌过程中，必须保持无菌操作，避免杂菌的污染。

使用消毒柜、酒精灯和一次性试验用具等设备进行消毒和无菌操作。

2. 注意培养条件：酵母菌对培养条件较为敏感，温度、pH值和氧气含量等因素都会影响酵母菌的生长。

因此，在培养酵母菌时，应根据不同酵母菌株的生长特性进行优化培养条件。

3. 避免过度培养：过度培养会导致酵母菌的老化和死亡，影响实验结果。

因此，在培养酵母菌时，应根据实验需要确定合适的培养时间。

4. 酵母菌的纯化：为了获得纯化的酵母菌株，必须进行酵母菌的分离和传代。

在分离过程中，要注意避免不同菌株之间的杂交和杂交菌株的产生。

传统面食发酵剂中酵母菌的分离鉴定Isolation and identification of yeast from the traditional steam-breadstarter王乃鑫韩烨WANG Nai-xin HAN Ye(天津大学农业与生物工程学院，天津300072)（College of Agriculture and Biology Engineering,Tianjin University,Tianjin，300072,China）摘要：从民间发酵传统面食用的发酵剂中，分离纯化出4株酵母，通过菌落形态观察、细胞形态观察、子囊孢子形态观察、菌丝观察、掷孢子的形成试验、糖发酵实验、碳源同化实验、氮源同化实验、耐高糖实验、分解尿素实验、产生类淀粉实验、产酯实验、石蕊牛乳实验、无维生素培养基培养实验、热致死实验、耐酒精实验等，将其确定到属，初步鉴定为：丝孢毕赤氏酵母属（Hyphopichia），酵母属（Saccharomyce s），球拟酵母属（Torulopsis）。

关键词：酵母菌；分离鉴定；发酵剂Abstract：Tour strains of yeasts were selected and purified from the traditional steam-bread starter.Through the observation of the modality of colony,the observation of the modality of cell and ascusspore,taking shape on artificial hypha and ballistoconidia,ferment experiment of compounds carbon source,utilization experiment of carbon source and nitrogen source,growth experiment in50%glucose and60%glucose, decomposition reaction on urease,reaction took shape like-starch in test tube,experiment of producing ester,litmus-milk reaction,growth experiment in vitamin-free yeast base,experiment of thermal death temperature,growth experiment in yeast base with different concentration of alcohol.The strains were identified as Hyphopichia,Saccharomyces, Torulopsis.Keywords:Yeast；Isolation and identification；Starter——————————————作者简介：王乃鑫(1984-),女,天津大学农业与生物工程学院食品科学与工程专业在读研究生。

酵母菌培养操作酵母菌是一类单细胞真菌，广泛应用于食品发酵、酿造工业以及生物学研究中。

为了获得高质量的酵母菌培养物，我们需要进行一系列的培养操作，包括选择合适的培养基、接种、培养条件控制等。

本文将介绍酵母菌培养操作的步骤和注意事项。

一、选择合适的培养基酵母菌的培养基主要包括液体培养基和固体培养基两种。

液体培养基适用于大规模培养，而固体培养基则适合于分离纯种菌落。

常用的液体培养基有YPDA培养基和YPG培养基，固体培养基则是在液体培养基中加入2%的琼脂。

二、接种酵母菌接种是酵母菌培养的第一步，也是最关键的一步。

首先需要从冷冻保存的酵母菌液氮罐中取出酵母菌菌种，用无菌吸管将菌液转移到无菌培养基中。

然后将培养基倒入含有酵母菌菌种的培养瓶中，摇匀后放入恒温摇床中培养。

三、培养条件控制酵母菌的生长需要适宜的温度、pH值和营养物质。

一般来说，酵母菌的最适温度为30℃，pH值为5-6。

此外，酵母菌还需要一定的营养物质，如碳源、氮源、矿物质等。

在培养过程中，需要根据菌株的不同特点和需求进行调控。

四、培养时间控制酵母菌的培养时间一般为24-48小时，具体时间取决于菌株的生长速度和培养条件的控制。

在培养的过程中，需要定期观察菌液的浑浊度和菌体的形态，以判断是否需要停止培养。

五、酵母菌分离与纯化在酵母菌培养过程中，可能会出现多个菌株混合生长的情况。

为了获得纯种菌株，需要进行菌落分离。

具体方法是将培养物均匀涂布在固体培养基上，培养一段时间后，通过菌落形态和颜色的差异，选择目标菌落进行传代培养。

六、保存酵母菌菌种为了长期保存酵母菌菌种，可以采用冷冻保存或冻干保存的方法。

冷冻保存是将酵母菌菌种悬浮液加入到甘油中，然后在液氮罐中保存。

而冻干保存则是将酵母菌菌落在无菌条件下冻干，并保存在低温干燥的环境中。

总结起来，酵母菌培养操作是一个复杂而关键的过程，需要仔细控制培养基的选择、接种、培养条件的调控以及菌株的分离与纯化。

只有通过科学规范的操作，才能获得高质量的酵母菌培养物，为后续的实验研究提供可靠的基础。

实验六平板划线法分离菌种一、实验目的1、了解平板划线法分离菌种的基本原理2、练习平板划线法分离菌种的基本操作，掌握无菌操作技术二、实验原理平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。

一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。

通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。

实际上同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可形成一个单菌落，故在科学研究中，特别是在菌种鉴定等工作中，必须对实验菌种的单菌落进行多次划线分离，才可获得可靠的纯种。

平板划线分离对细菌、酵母菌较为适宜，而霉菌和放线菌的分离多采用稀释分离法进行菌种的分离纯化。

具体的划线形式有多种，这里仅介绍一种经过长期实践并证明可获得良好实验效果的方法：将一个平板分成A、B、C、D4个面积不同的小区进行划线，A区面积最小，作为待分离菌的菌源区，B和C区为经初步划线稀释的过渡区，D区则是关键的单菌落收获区，它的面积最大，出现单菌落的概率也最高。

由此可知，这4个区的面积安排应做到D>C>B>A。

鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。

这样的培养基称之为鉴别培养基。

例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。

（参考GB4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数）其配方中含有乳糖、伊红和美蓝，用以鉴别肠道病原菌及其他杂菌。

伊红、美蓝作为指示剂，伊红系酸性染料，当大肠埃希氏菌或产气肠杆菌分解乳糖产酸时，由于细菌带正电荷，所以被伊红着色。

在大肠埃希氏菌中因为伊红与美蓝结合，所以菌落不呈红色，而是蓝紫黑色，且具有绿色金属光泽；菌落呈棕色者为产气肠杆菌；不分解乳糖的肠道病原菌则不着色，有时因产生碱性物质较多，细菌带负电荷，被美蓝着色后，菌落并不呈蓝色，因美蓝与伊红结合，所以菌落为淡紫色。

制作酵母菌过程
酵母菌制作过程主要包括以下步骤：
1. 酵母菌种植：从食品厂或研究机构购买酵母菌培养基，选用适合的菌种进行预培养，使其活跃起来。

2. 加入基质：将预培养好的酵母菌加入基质中进行进一步培养。

基质可以选用糖水、面粉、麦芽等材料，也可以直接用酒、酸奶等天然发酵物作为基质。

3. 发酵：将加有酵母菌和基质的发酵罐保持在适宜的温度和湿度下，让其进行发酵。

通常发酵时间为1-2天。

4. 分离纯化：将发酵液离心分离，去除杂质，得到纯化后的酵母菌。

这一步可以使用离心机、过滤器等工具进行操作。

5. 干燥：将纯化后的酵母菌通过喷雾、真空干燥等方法进行干燥处理，制成酵母粉。

6. 包装：将酵母粉包装好，贴上标签，进行存储和销售。

以上就是制作酵母菌的主要步骤。

不同的酵母菌制作过程有所差异，但基本上都是以上几个步骤的组合使用。