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高粱原花青素对β-淀粉酶活力抑制动力学的研究

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第２５卷第３期　２００６年６月　华中农业大学学报　Ｊｏｕｒｎａ１　ｏｆ　Ｈｕａｚｈｏｎ８　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｖ０ｌ＿２５　Ｎｏ．３　Ｊｕｎｅ　２００６．３２６～３２９　

文章编号１０００—２４２１（２００６）０３—０３２６—０４　

高梁原花青素对　一淀粉酶活力抑制动力学的研究　

刘　睿　刘　亮　谢笔钧一　

（华中农业大学食品科技学院，武汉４３００７０）　

摘要通过采用酶抑制动力学方程的方法，研究了高粱原花青素（ＳＰＣ）对小曲酒酿造中　淀粉酶的影响。　结果表明，高粱原花青素对　淀粉酶具有明显的抑制作用。抑制的机理是通过可逆的竞争性抑制来实现的，其　抑制常数Ｋ　是１．２８　ｍｇ／ｍＬ。　关键词高粱原花青素｝　淀粉酶，抑制动力学方程　

中图法分类号ＴＳ　２６１．１；ＴＳ　２６２．３叶。６　文献标识码Ａ　

固态小曲白酒生产系用高梁（优质小曲白酒尤　

其如此）等淀粉质原料，利用小曲中的根霉产生的淀　

粉糖化酶，将淀粉糖化后，在酵母分泌的胞内酶和胞　

外酶的作用下，将糖化酶水解淀粉得到的糖类发酵　

产生乙醇的过程，在此过程中还通过霉菌和酵母以　

及其他细菌等微生物的复杂生化反应、酶反应、微生　

物的自身代谢以及有机化学反应产生成分复杂的挥　

发性成分。　白酒中的微量挥发性香味成分由多种物质组　

成，可归纳为醇、醛、酸、酯、酚等类化合物，这些物质　

在酒中起着极其重要和不可替代的作用，是白酒香　

味成分的主体＿１］。白酒的产量、质量及风味是同参　

与酿造微生物代谢产生的酶密切相关的。通过ＧＣ－　ＭＳ分析结果显示，高粱原花青素（ＳＰＣ）对小曲酒　

的挥发性成分产生了影响＿２］，由于高粱外种皮中富　

含原花青素［３］，而原花青素又具有调节酶活力特　

性［　］。笔者采用非连续测定和作图法＿６］，研究了　

ＳＰＣ对　淀粉酶活力抑制动力学的特性，并探讨其　

对小曲酒挥发性成分的影响机制。　

１材料与方法　

１．１供试材料　

高粱原花青素：实验室制备，纯度大于９５　，主　

要是由聚合度小于６的低聚体组成。　

淀粉酶：丹麦诺和诺德公司（北京）分公司，酶　

活：９００　Ｕ／ｍｇ。　７５２紫外一可见分光光度计：上海分析仪器总厂。　

１．２最适酶量的确定　

酶活力的测定采用Ｂｅｒｎｆｅｌｄ方法［７］。取一定　

稀释倍数的　淀粉酶，测定反应的初速率，并使酶反　

应的速率在０．Ｏ３～Ｏ．２５ＡＡ／ｍｉｎ之间，将此时的酶　

量作为动力学分析的酶量。酶反应开始后，准确计　

时，每间隔１　ｍｉｎ加入ｌ＿０　ｍＩ　ＤＮＳ终止反应，然后　

将反应液置于沸水浴５　ｍｉｎ后，迅速冷却，加入　

９．０　ｍ　馏水稀释，在５４０　ｎｍ处，以空白作对照，　

测定吸光度值。最佳酶量的确定按表１中顺序添加　

试剂及适当稀释酶液进行测定。　

表１最适酶量的确定试验　

Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｆ　ｅｈｏ￣ｅｉｎｇ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｏｆ　ｅｎｇｙｌｌ￣ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　

ｐＨ　４．８磷酸缓冲液／ｍ！　ｐＨ　４．８　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｓａｌｉｎｅ　ｂｕｆｆｅｒｅｄ　２　淀粉溶液／ｍｌ　２　ｓｔａｒｃｈ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　酶溶液／ｍｌ　Ｅｎｚｙｍｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　

１．３酶反应动力学方程的建立　

当酶反应初速率的时间范围和反应体系中酶量　

被确定后，可进行动力学常数的测定。按照底物浓　

度对酶作用的影响规律，在一系列不同底物浓度下　

测定反应初速率，每种浓度作３个平行，再通过双倒　

数作图法可求出Ｋ　和　。测定方法见表２。　

收稿日期：２００６－０３—１７；修回日期：２００６－０５—１８　＊国家自然科学基金项目（３０２７０９３８）、高等学校博士学科点专项科研基金项目（２００４０５０４０１３）资助　＊＊通讯作者　刘睿，男，１９６９年生，博士，讲师．工作单位；华中农业大学食品科技学院，武汉４３

００７０　维普资讯 http://www.cqvip.com 第３期　刘睿等；高粱原花青素对　淀粉酶活力抑制动力学的研究　３２７　

表２建立酶反应动力学方程试验　Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｆ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｅｑｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　１．４　ＳＰＣ对ＩＢ一淀粉酶抑制类型的试验　

在固定抑制剂浓度的条件下，以一系列不同浓　

度的酶进行反应初速率的测定，每种浓度作３个平　

行，抑制剂为一组，无抑制剂为另一组，同时进行初　

速率测定。试验设计如表３所示。以酶浓度（横坐　标）对反应速率作图，根据动力学图的特征分析，推　

断ＳＰＣ对　淀粉酶的抑制类型属于可逆或不可逆　

抑制。　

１．５　ＳＦ￣３对ＩＢ－淀粉酶可逆抑制的竞争性试验　

通过表４的试验判断ＳＰＣ对　淀粉酶的抑制　

作用是属于竞争性还是非竞争性抑制类型。先向试　管中加人不同体积的淀粉溶液和ｐＨ　４．８磷酸缓冲　

溶液，配制成不同底物浓度的分析体系，４Ｏ℃预热　

３　ｍｉｎ，分别加人０．２　ｍＩ　预热的酶液，准确计时，在　

４Ｏ℃反应３　ｍｉｎ后，分别加人１．０　ｍＩ　ＤＮＳ终止反　

应，将反应液置沸水浴５　ｍｉｎ，快速冷却后加蒸馏水　

９．０　ｍＬ，摇匀，在５４０　ｎｍ处，以空白为对照，测定吸　

光值。通过双倒数作图法结果比较分析，可判断　

ＳＰＣ对　淀粉酶的抑制类型。　

表３　ＳＰＣ对口－淀粉酶抑制类型（可逆或不可逆）试验　Ｔａｂｌｅ§Ｔｈｅ　ｅｘｐｅ￣ｔ　ｏｆｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｔｙｐｅ（ｒｅｖｅｒ￣ｂｆｌｉｔｙ　ｏｒｉｒｍｖｅｒｓｉｂｉｌｉｔｙ）ｆｏｒｉ￣ｍｙｌａｓｅ　ｂｙ　ＳＰＣ　

裹４　ＳＰＣ对芦－淀粉酶抑制类型分析试验　Ｔａｂｌｅ　４　Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｆｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｔｙｐｅｆｏｒ￣－ａｍｙｌ

ａｓｅ　ｂｙ　ＳＩＣ　维普资讯 http://www.cqvip.com 华中农业大学学报　第２５卷　

２结果与分析　

２．１酶反应动力学进程曲线的制作和最适酶量　

不同　淀粉酶酶量在７　ｒａｉｎ内的酶反应动力学　

进程曲线如图１所示。　

量　导　

兰　《　

登　Ｏ．２ｍＬ　Ｏ　３　ｍＬ　Ｏ．４ｍＬ　Ｏ．５ｍＬ　

图１卢－淀粉酶的反应进程曲线　Ｆｉｇ。１　Ｃｕｒｅｓ　ｏｆ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＪＢ－ａｍｙｌａｓｅ　在不同浓度下得到的酶反应进程曲线（反应时　

间曲线）如图１所示。从图中可以看出，卢淀粉酶的　

加入量越大，线性反应期越短。通过比较不同酶量　的反应进程曲线的线性关系发现，酶量为０．２　ｍＬ　

的反应进程曲线，在７　ｒａｉｎ内，其回归方程为Ｙ一　０．０７８３ｘ，Ｒ。一Ｏ．９９８　９；酶量为０．３　ｍＩ　的反应进程　

曲线，在７　ｒａｉｎ内，其回归方程为Ｙ：：：０．１０２　２ｘ，　

Ｒ。一Ｏ．９９５　１；酶量为０．４　ｍＬ的反应进程曲线，在　４　ｒａｉｎ内，其回归方程为ｙ＝０．１３２　９ｘ，Ｒ　一Ｏ．９９７　９；　

酶量为０．５　ｍＬ的反应进程曲线，在３　ｍｉｎ内，其回　

归方程为ｙ＝０．２０２　１－ｚ，Ｒ　＝Ｏ．９９６　７。　

通过比较不同酶量反应进程曲线方程的线性时　

间范围，可以发现在３　ｒａｉｎ反应时间内酶反应的进　程曲线有着很好的线性关系，说明在３　ｒａｉｎ内测得　

的速率为反应初始速率，比较反应初始速率的大小，　

选定酶量为０．４　ｍＬ，反应时间３　ｍｉｎ作动力学常数　

的测定。　

２＿２米氏常数Ｋｍ和最大反应速率、，　的测定　

当上述酶反应初速度的时间范围和酶反应系统　中的酶量被确定后，按照底物浓度对酶作用的影响　

规律，在一系列不同底物浓度下测定反应初速率，再　

通过双倒数作图法求出米氏常数Ｋ　＝＝＝０．６６６　ｍｇ／　

ｍＩ　和最大反应速率　一０．６１５／ｍｉｎ。ｐ－淀粉酶　

的米氏方程为：　

１，一　［ｓ］一０．６１５／ｍｉｎｉＳ］　一　干网一　丽　五　

双倒数作图结果如图２所示。　

２．３　ＳＰＣ对卢一淀粉酶抑制类型的推断　ＳＰＣ对　淀粉酶的抑制类型动力学曲线如图３　－ｕ　。　：／　餐　

．／　３　星　砖

一０　９９６　５　，　

５　／０　Ｏ　５　】　’　ｌ／底物浓度ｌ／［Ｓ】（ｍＬ／ｍｇ）　

图２卢－淀粉酶的米氏方程曲线　Ｆｉｇ．２　Ｍｉｃｈａｏｌｉｓ－￣ｅｑｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＪＢ－ａｍｙｌａｓｅ　

＋ｌ＇无抑制剂　Ｎｏ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　０　３０　ｒ　…，～　…　Ｏ．２５　Ｏ．２０　０．１５　尼０．１０　Ｏ　Ｏ５　Ｏ　０　０　０５　０．１０　０　ｌ５　酶浓度【Ｅ】（Ｕ＝ｍＬ）　

图３　ＳＰＯ对卢－淀粉酶的抑制动力学曲线　Ｆｉｇ。３　Ｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｏ．１ｒｖｏｓ　ｏｆ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｏｆ　ＪＢ－ａｍｙｌａｓｅ　

所示。根据图３中抑制动力学曲线特征，可以推断　

ＳＰＣ对　淀粉酶的抑制类型是可逆性抑制。　

２．４　ＳＰＣ对卢－淀粉酶可逆抑制的竞争性　

用Ｉ／［Ｓ］对１／　作图，结果如图４所示。当有　

抑制剂存在时，表观米氏常数Ｋ　增大，Ｋ　／　也　

增大，但是　不变。可见ｓＰＣ对　淀粉酶的抑制　

类型属于可逆的竞争性抑制。由公式Ｋ　一Ｋ　（１　

＋［Ｉ］／Ｋ　）可计算出抑制剂常数Ｋ　—ｌ＿２８　ｍｇ／ｍＩ　。　

一１无抑制刺　一２．添加抑制剂　一３．添加抑制刺　Ｎｏ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　０　５　ｍｇ／ｍＬ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　１　０　ｍｇ／ｍＩｌ　

Ｉ　１４　／　一　

‘

．　赵１０　删　量　６　一　

２　＿０　５　１０　Ｉ　

／底物浓度Ｉ／ＩＳ】（ｍＬ／ｍｇ）　

图４　ＳｐＣ对卢－淀粉酶的可逆性抑制双倒数图　

Ｆｉｇ．４　Ｌｉｎｅｗｏａｖｏｒ－Ｂｕ　ｐｌｏｔ　ｏｆ　ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ＳＰＣ　ｏｎ　ＪＢ－ａｍｙｌａｓ

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白芸豆提取物中α-淀粉酶抑制剂活性检测方法对比分析

白芸豆提取物中α-淀粉酶抑制剂活性检测方法对比分析

安徽农学通报2024年01期农产品加工

·检验检测

作者简介俞超华（1987—），女，浙江绍兴人，硕士，工程师，从事食品药品检验工作。通信作者曾傲琼（1992—），女，新疆伊犁人，博士，从事食品营养与健康研究。收稿日期2023-11-08白芸豆提取物中α-淀粉酶抑制剂活性

检测方法对比分析

俞超华1，2曾傲琼3

（1绍兴市食品药品检验研究院，浙江绍兴312000；2国家黄酒产品质量检验检测中心，浙江绍兴312000；3江南大学，江苏无锡214000）

摘要本研究基于现有α-淀粉酶抑制剂（α-amylaseinhibitor，α-AI）活性检测方法的试验原理，通过验证3，5-二硝基水杨酸法和碘-淀粉显色法2种方法的精度，分析了不同检测方法在检测原理和检测结果准确性2个方面的差异。结果表明，3，5-二硝基水杨酸法是通过测量α-AI对3，5-二硝基水杨酸显色产物的吸光度变化来确定其活性，而碘-淀粉显色法则是利用碘离子与淀粉形成淀粉-碘络合物，通过观察溶液颜色的变化来测定α-AI的活性。从原理上来看，2种方法在测定α-AI活性时采取了不同的测定方式。从检测结果准确性方面来看，2种方法的准确性可能存在差异。3，5-二硝基水杨酸法能够准确测量α-AI对3，5-二硝基水杨酸的抑制能力，从而反映出其活性水平。而碘-淀粉显色法则是通过观察淀粉-碘络合物的颜色变化来判断α-AI的活性，这种方法可能受到其他因素的干扰，从而影响测定结果的准确性。本研究为准确并快速测定白芸豆α-AI产品提供方法，并为精确控制产品质量和生产流程提供参考。关键词白芸豆提取物；3，5-二硝基水杨酸法；碘-淀粉显色法；α-淀粉酶抑制剂活性中图分类号TS218；Q946.5文献标识码A文章编号1007-7731（2024）01-0088-07

近年来，α-淀粉酶抑制剂（α-amylaseinhibitor，α-AI）成为各国学者研究的热点，它属于糖苷水解

酶抑制剂中的一种[1-2]。α-AI能在一定程度上抑制

高粱中抗营养因子的化学性质及其对畜禽的影响与作用机制(续完)

高粱中抗营养因子的化学性质及其对畜禽的影响与作用机制(续完)

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高粱中抗营养因子的化学性质及其对畜禽的影响与作用机制（续完）

作者：万建美 孙相俞 潘雪男

来源：《国外畜牧学·猪与禽》2015年第02期

中图分类号：S816 文献标识码：C 文章编号：1001-0769（2015）02-0036-03

3 单宁对家畜的影响

反刍动物似乎比非反刍动物对浓缩型单宁有更强的耐受力，不过摄入可水解的单宁也可能会引起死亡（Ahn等，1989和Norton，1994）。根据Osakwe等（2000）的研究，豆科植物和牧草中的浓缩型单宁可形成单宁蛋白质复合物，从而能抵御微生物的侵袭。研究报道，羊采食含浓缩型单宁的日粮，在瘤胃功能受损后的最初影响是采食量下降，毛发生长和增重受到影响（D’Mello，2000；Salem等，2005）。其他的负面影响是日粮的适口性降低，消化率下降（D’Mello，1982；Salem等，2005）。然而，对于牛而言，日粮中含有中等水平的单宁（30

g/kg～40 g/kg豆科植物，干基）可能是有益的，因为增加了过瘤胃蛋白并抑制了瘤胃胀气（D’Mello，2000）。但是，山羊喂给高达30 g/kg DM的荆树单宁提取物后没有改善蛋白质的利用效率，因此对生产性能的改善也没有达到显著的水平（Bengaly等，2007）。当日粮中浓缩型单宁含量达60 g/kg～100 g/kg DM时，则可能会抑制采食量和生长速度（Bary和Duncan，1984；van Hoven和Frustenburg，1993）。绵羊饲喂浓缩型单宁含量为48 g/kg DM的Danielli oliveri牧草，会抑制有机物和洗涤纤维的消化率（Osakwe等，2004）。有报道表明，山羊饲喂单宁含量为0.40 g/kg DM的Tephrosia bracteoluta牧草时，单宁的消化率达99.70 %～99.90 %（Ogungbesan等，2006）。

三叶青原花青素纯化工艺及抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

三叶青原花青素纯化工艺及抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

三叶青原花青素纯化工艺及抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

何志贵;徐祥林;崔莹莹;伍兰;周晓雨;黄宗昉;杜密英

【期刊名称】《食品工业科技》

【年(卷),期】2022(43)6

【摘 要】为了探索三叶青中原花青素的纯化工艺及其生物活性作用,制备经济高效的原花青素,比较5种大孔吸附树脂对三叶青原花青素静态吸附及解吸附能力,并对树脂的动态吸附及解吸附条件进行优化。同时,探讨乙醇洗脱对原花青素纯度及生物活性影响。结果表明,AB-8型树脂可用于三叶青中原花青素纯化,纯化三叶青原花青素的最适条件为:上样质量浓度6.00 mg/mL,上样流速2 BV/h,上样体积11

BV,洗脱流速1.5 BV/h,洗脱剂用量2 BV,70%乙醇吸附效果最好,纯化后的三叶青原花青素纯度达到97.31%±0.96%,比粗提物提高了2.2倍,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除活性、ABTS+自由基清除活性及α-葡萄糖苷酶抑制活性得到了显著增强(P<0.05),并且与原花青素含量之间存在极显著相关性(P<0.01)。因此,AB-8树脂纯化法简单、高效,且三叶青原花青素具有较强的体外抗氧化活性以及α-葡萄糖苷酶抑制活性,为综合开发利用三叶青原花青素提供科学参考。

【总页数】8页(P178-185)

【作 者】何志贵;徐祥林;崔莹莹;伍兰;周晓雨;黄宗昉;杜密英

【作者单位】桂林旅游学院休闲与健康学院

【正文语种】中 文 【中图分类】TS201.2

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1.超声提取葡萄籽原花青素工艺的优化及其抗氧化活性研究2.葡萄籽原花青素的分离纯化及其抗氧化活性研究3.葡萄籽原花青素的提取工艺优化及其抗氧化活性研究4.大孔树脂纯化甜茶多酚及其对α-葡萄糖苷酶抑制活性和DPPH·抗氧化性的研究5.巨峰葡萄籽原花青素的纯化与抗氧化活性分析

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莲原花青素在油脂体系中的抗氧化作用

莲原花青素在油脂体系中的抗氧化作用

中国农业科学 2010,43(10):2132-2140 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.10.020

收稿日期：2009-11-12；接受日期：2010-03-23 基金项目：国家“863”计划项目（2007AA100401） 作者简介：禹华娟，硕士研究生。E-mail：yuhuajuan@。通信作者孙智达，教授，博士。E-mail：sunzhida@

莲原花青素在油脂体系中的抗氧化作用

禹华娟，孙智达，谢笔钧

（华中农业大学食品科技学院，武汉 430070）

摘要：【目的】研究莲原花青素在油脂体系中的抗氧化作用，为开发新型健康的天然食品抗氧化剂提供理论

依据。【方法】通过添加不同浓度的原花青素以及将原花青素和卵磷脂等抗氧化剂复配，研究原花青素在油酸和各

类动植物油脂中的抗氧化作用。采用亚油酸氧化体系表征原花青素对脂肪氧合酶活性的抑制。【结果】原花青素对

油酸和动植物油脂均显示不同程度的抗氧化效果，对试验所用的油脂抗氧化效果依次为：茶籽油＞猪油＞棉籽油

＞豆油，其中茶籽油的氧化诱导期延长了2.2倍；并且卵磷脂和维生素E对原花青素有很好的增效作用，尤其与

维生素E的复配，能将油酸的诱导期延长14.7倍，猪油的诱导期延长3.6倍。在抑制脂肪氧合酶活性方面，原花

青素与茶多酚有着相同的效果。【结论】原花青素对油脂体系有着优良的抗氧化作用，对油脂氧化抑制效果显著。

关键词：莲原花青素;抗氧化;油酸;动植物油脂;脂肪氧合酶

Antioxidation Role of Procyanidins from Lotus Seedpod in Oils

YU Hua-juan, SUN Zhi-da, XIE Bi-jun

(College of Food Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070)