症状性子宫肌瘤子宫内膜中一氧化氮合酶的表达及意义

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河北医药2007年8月第29卷第8期Hebei Medical Journal,Aug 2OO7,Vol 29,No.8 

症状性子宫肌瘤子宫内膜中一氧化氮合酶的 

表达及意义 

杨月敏杜建层张辉 

【摘要】 目的检测上皮型一氧化氮合酶(eN0s)及诱导型一氧化氮合酶(iN0s)在症状性子宫肌瘤子 

宫内膜腺上皮细胞中的表达,探讨NO/NOS在症状性子宫肌瘤中的作用。方法观察组7l例中49例为症 状性子宫肌瘤患者,22例无症状子宫肌瘤患者,32例正常子宫内膜组织,应用免疫组织化学sP法检测 

eNOS和iNOS在子宫内膜组织中的表达。结果症状性子宫肌瘤子宫内膜中的eNOS和iNOS的表达在增 

生期和分泌期均明显高于对照组;eNOS和iNOS在症状性子宫肌瘤组的表达高于无症状性子宫肌瘤组。 

结论eNOS和iNOS在症状性子宫肌瘤内膜组织中呈持续性过强表达,提示NO/NOS可能是造成子宫肌瘤 

月经改变的原因。 【关键词】一氧化氮合酶;子宫肌瘤;免疫组织化学 

Tile a re and 罂IiI-蛐Ice of nitric oxi&synthas ̄in endo ̄trium of p薯 e玎盹s with sympotomafic 

m ̄mdeiomym G ,DU№聊 ,Z/ ̄NG . 豫 Hospital Hebei Medical University, 

Hebei,Sh///ozhua ̄050051 【Abstract】Objective To detect the expressions of epithelialnitric oxide synthase(eNOS)and inducible nitric 

oxide synthase(iN0S)in endometrium of patien蟾with sympotomatic uterine leiomyomas,and to investigate the effect of 

NO/NOS on sympotomatic uterine leiomyomas.Methods Immunohistochemieal SP method was used to detect the expressiom of eNOS and iNOS in 49 patients with symptomatic uterine leiomyomas and 22 patients with symptomless 

uterineleiomyomas and 32 women with normal endometrium.Results The expressions of eNOS and iNOS were all significantly higher in symptomatic uterine leiomyomas than those in normal endometrium.The expression of eNOS and 

iNOS in symptomatic uterine leiomyomas was higher than that insymptomless uterine leiomyomas.C饵 hl 伽The 

expre ̄ion ofeNOS andiNOSin endometriumofpatientswith symptomatic uterineleiomyoraasis continuomlyincreased, 

which suggests that NO/NOS may be one ofthe reasons of irregular menstruation caused by uterine leiomyomas. 【Key words]nitric oxide synthase;uterine leiomyomas;immur ̄histochemistry 

一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,NOS)是催化一氧化氮 

(Nitric de,NO)生物合成的酶,是内源性NO合成的限速酶。 

自Palmer等…于1987年证实血管内皮细胞舒张因子(Endotheli— 

umderivedlt ̄laxingfactor,EDRF)的化学本质是N0以来,N0便成 

为现代生物学和医学研究中十分活跃的领域。探讨活性氧自 由基NO与肿瘤的关系是近年来病因学研究的一个热点。诱导 

型NOS(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)和内皮型NOS(Endo— 

thelial nitric oxide synthase,eNOS)是NOS的两类同工酶,它们在 体内发挥着不同的作用。本研究采用免疫组织化学技术对正 

常子宫内膜和子宫肌瘤子宫内膜腺上皮细胞中eNOS及iNOS 

进行了染色,检测它们在子宫肌瘤中的表达,探讨NO/NOS与症 

状性子宫肌瘤的关系。 

l资料与方法 1.1一般资料选取2004年6月至2OO6年12月在河北医科 

项目来源:河北省科学技术研究与发展指导项目(编号: 

062761350);河北省教育厅科研基金资助项目(编号:2006450) 作者单位:050051石家庄市,河北医科大学第三医院(杨月敏、杜 

建层);河北医科大学第四医院(张辉) ・论著・ 

大学第三医院妇科住院手术治疗的子宫肌瘤患者标本7l例为 

观察组,其中根据患者有无月经过多分为两组,月经过多者为 

症状性子宫肌瘤组49例,无月经改变者为无症状性子宫肌瘤 

组22例。患者平均年龄为43.3岁,选取同期因“输卵管阻塞、 

原发或继发不孕”在我院行宫.腹腔镜检术的患者32例为对照 组,平均年龄28.2岁,月经规则,周期28—30 d,且官腔镜检查 

排除子宫内膜病变,腹腔镜检查排除子宫内膜异位症,所有观 

察组与对照组术前3个月未曾使用激素类药物。所有子宫内 

膜标本均按Noyes方法进行分期,观察组中症状组增生期25 

例,分泌期24例;无症状组增生期l0例,分泌期l2例;对照组 

增生期及分泌期标本各l6例。 

1.2试剂与方法iNOS,eNOS单克隆抗体及sP即用型试剂盒 

均有北京中山生物技术有限公司提供,严格按照说明书方法进 

行免疫组化染色。 

1.3结果判定NOS主要分布于腺上皮细胞,问质细胞几乎 

不着色。阳性染色为有可辨认的核染色或胞浆染色,染色颗粒 

呈棕色。在放大400倍的光镜下选取5个不同视野,每个视野 

计数100个腺上皮细胞中染色阳性细胞数。评价标准按照Ota 

等 方法进行,即按内膜腺上皮染色阳性细胞的染色强度和频 

率进行分级。染色强度分为三级:+、++、+++。染色阳性 维普资讯 http://www.cqvip.com 河北医药2007年8月第29卷第8期Hebei Medical Journal,Aug 2007,Vol 29,No.8 

细胞染色较强时为+++,染色阳性细胞染色较弱,但不低于 阴性对照组为+,介于二者之间为++。染色频率分为+、 

++、+++。当染色阳性细胞数<10%为+,10%一5o%为 

++,>50%为+++。每张切片,按照Nomugram评分图,分成 0—5分。每个标本的确定和分级均由两个观察者在盲法的基 

础上进行,由第一个观察者对片子进行评分,由第2个观察者 

对结果进行确认。 

1.4统计学分析应用SPSS 11.0统计学软件包进行统计学 

处理。计量资料以露±s表示,计数资料比较采用 检验,P 

<0.05为差异有统计学意义。 

2结果 2.1 eNOS及iNOS在正常子宫内膜中的表达eNOS在正常子 

宫内膜腺上皮细胞中的表达依据子宫内膜所处的状态不同而 

表达不同:在增生期,eNOS的表达较低,至分泌期升高,有显著 

性差异(P<005);iNOS在正常子宫内膜中的表达则一直处于 

较低的水平,虽在分泌期略有上升,但差异无显著性(P> 

0.05),见表1。 表1正常子宫内膜不同期别eN0s及iNOS的评分 i±s 

分期 eNOS iNOS ’ 

增生期(n;16) 1.42±0.40 0.33±0.11 坌塑塑! :! :垄 :翌: :箜 :垄 

注:与增生期比较, P<0.(t5 2.2症状性子宫肌瘤组与对照组间的eNOS及iNOS的表达 

在症状性子宫肌瘤的子宫内膜腺上皮细胞中,eNOS和iNOS均 

呈持续性的过强表达,明显高于对照组(P<0.01);症状性子 

宫肌瘤组的评分明显高于对照组(P<0.01),有非常显著性意 

义。见表2。 表2观察组与对照组子宫内膜腺 上皮细胞中NOS的评分 i 

竺 。二 二eN二OS 二 二二二 [ 

对照组(n=32) 1.42±0.40 2.25±0.57 0.33±0.11 0.65±0.28 症状组(n=49) 3.80±0.51* 3.96±0.45* 3.88±0.58* 3.40±0.35* 垄鉴望! :銎 !:墨 :竺 :箜 Q:翌全全Q:墼 :! 全全 :丝 Q:堑全全 注:与对照组比较, P(0.01;与症状组比较,△△P(0.01, 2.3无症状性子宫肌瘤组与对照组间eNOS及iNOS的表达 

在无症状性子宫肌瘤的子宫内膜腺上皮细胞中,eNOS和iNOS 

的表达与对照组差异无显著性。见表2。 

2.4症状性子宫肌瘤组与无症状性子宫肌瘤组间eNOS及 

iNOS的表达eNOS在症状性子宫肌瘤组的表达明显高于无症 

状性子宫肌瘤组(P<0.01),而无症状组iNOS的表达与对照 组比较无统计学差异(P>0.05),但与症状组比较却存在显著 

性差异(P<0.01)。见表2。 

3讨论 NO为高活性的自由基,容易弥散通过细胞膜,渗入周围织 

织,激活各种靶分子和细胞信号通道而发挥效应,是体内众多 

生理和病理过程的重要介质。NO能调节多种女性生殖过程, 如排卵、种植、维持妊娠、调节分娩、调控月经周期。NO由一氧 

化氮合酶(NOS)家族合成,近来,随着子宫内膜NOS表达研究 

的增多,越来越多的研究人员开始重视NO在子宫内膜功能性 

活动中所扮演的角色。由于NO的半衰期短,仅2—13 s,目前, 

研究者多通过检测人子宫内膜NOS的表达模式,来间接推测 NO的作用。 

3.1 NO与血管动态平衡子宫出血是子宫内膜组织和血管 805 

结构变化达到极点的结果,与其相关的主要细胞成分可能涉及 

子宫内膜间质和血管。在子宫出血的始发和调节出血量中,螺 

旋动脉起了关键的作用。子宫内膜血管的变化是和雌、孕激素 

的变化有关,由于子宫内膜内皮细胞中无甾体激素受体(ER、 

PR),而子宫内膜血管周围平滑肌细胞中存在ER和PR,提示激 

素对子宫内膜血管的作用是通过化学因子或细胞因子介导产 生的 j。动物研究支持NO作为旁分泌因子控制子宫血管床的 

观点,在羊中,NOS抑制剂可减弱雌激素诱导的血管扩张作 

用 。在人类Ramsay等 发现NO能使平滑肌松弛,血管扩 张,NO供体能提高子宫血流,而Zhang等哺 证实LNAME(NOS抑 

制剂)能以剂量依赖的方式降低子宫动脉搏动指数,增加子宫 内膜血流阻力,减少内膜血流量,Hurskainen等 发现子宫动脉