体外检测人Th17细胞频率的方法
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慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞的表达及临床意义孙强;汤伟;汪晓莺【摘要】目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血Th17细胞频率、血清IL-17水平及其与临床指标的相关性.方法采集29例CHB患者(CHB组)及17例健康体检者(对照组)外周血,采用流式细胞仪分析外周血Th17细胞频率;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清IL-17水平及HBV标志物;荧光实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测血清HBV DNA载量,同时进行肝功能检测.结果 CHB组患者外周血Th17细胞频率、血清IL-17水平高于对照组(P<0.05);CHB组患者外周血Th17细胞频率与其血清ALT水平正相关(r=0.582,P<0.01),而与血清HBV DNA载量无明显相关(r=-0.213,P>0.05).结论 Th17细胞可能参与了CHB的发生、发展.%Objective To study the frequency of Thl7 cells and serum IL-17 level in peripheral blood of patients with chronic hepatitis B(CHB) and their relation to clinical parameters. Methods Peripheral blood of 29 patients with CHB(CHB group) and 17 healthy people who underwent physical examination (control group) were collected. Flow cytometry was used to analyze the frequency of peripheral blood Thl7 cell,enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) was adopted to detect the serum IL-17 level and HBV markers and fluorescence real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) was employed to measure the serum HBV DNA level. Liver function tests were performed simultaneously. Results The frequency of Thl7 cells and serum IL-17 level in peripheral blood of patients in CHB group were both higher than those in control group(P<0.05). The frequency of Thl7 cells in peripheral blood of patients in CHBgroup showed positive correlation with serum ALT level (r=0. 582, P<0. 01), while it showed no correlation with serum HBV DNA level(r=-0. 213,P>0. 05). Conclusion Thl7 cells may be involved in the occurrence and development of CHB.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2012(041)007【总页数】3页(P658-660)【关键词】肝炎,乙型,慢性;T淋巴细胞,辅助诱导;白细胞介素17;丙氨酸转氨酶【作者】孙强;汤伟;汪晓莺【作者单位】南通大学附属医院感染科,江苏南通,226001;南通大学附属医院感染科,江苏南通,226001;南通大学医学院免疫学教研室,江苏南通,226001【正文语种】中文乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染呈世界性流行,但不同地区HBV感染的流行情况存在很大差异。
外周血淋巴细胞亚群检测方法引言淋巴细胞是免疫系统中的关键组成部分,负责抵御病原体入侵以及产生免疫应答。
人体外周血中的淋巴细胞亚群分布情况直接影响着人体免疫功能的正常运行。
深入了解外周血淋巴细胞亚群的检测方法对于疾病诊断、治疗以及免疫功能评估具有重要意义。
一、外周血淋巴细胞亚群的概念和功能淋巴细胞是一类在外周血液和淋巴组织中广泛存在的白细胞。
根据其表面标记分子的不同表达,可以将淋巴细胞分为T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等亚群。
这些不同的亚群在免疫应答中具有不同的功能。
T细胞是最为重要的淋巴细胞亚群之一,主要分为CD4+T细胞和CD8+T细胞。
CD4+T细胞是调节免疫应答的关键细胞,其主要功能是识别并与抗原结合,然后释放细胞因子调节其他免疫细胞的活性。
CD8+T细胞则主要负责通过释放细胞毒素来杀伤被感染的细胞。
B细胞是淋巴细胞中的主要亚群之一,其主要功能是产生与抗原特异性结合的抗体,以此来中和病原体或形成免疫复合物。
自然杀伤细胞是一类专门对抗病毒感染和肿瘤细胞的细胞。
它能够直接杀伤感染或突变的细胞,并释放细胞毒素来诱导细胞凋亡。
二、1. 流式细胞术流式细胞术是目前应用最为广泛的淋巴细胞亚群检测方法之一。
该方法通过不同的抗体标记,能够区分不同的淋巴细胞亚群,并通过流式细胞仪进行检测和分析。
流式细胞术可以同时检测多种亚群的分布情况,并且能够进一步进行表型分析。
2. 免疫荧光染色免疫荧光染色是一种通过将荧光标记的抗体与细胞表面分子进行特异性结合的方法。
通过对不同亚群的细胞进行特异性的染色,可以通过显微镜观察到不同亚群的分布情况。
这种方法适用于对淋巴细胞亚群的定性分析。
3. 免疫酶标测定法免疫酶标测定法是一种通过将荧光或酶标记的抗体与细胞表面分子进行结合,并进行酶标反应来检测细胞表面分子的方法。
该方法适用于大规模的样本检测,并且可以通过测定酶标反应的强度来定量分析不同淋巴细胞亚群的含量。
三、外周血淋巴细胞亚群检测在疾病诊断和免疫功能评估中的应用1. 疾病诊断外周血淋巴细胞亚群的异常分布在许多疾病的诊断中具有重要作用。
HBV感染者外周血Th17细胞和Treg细胞的检测及意义胡月明;马莉;李虹【摘要】Objective To investigate the percentage changes of T helper 1 7 (Th1 7)cells and regulatory T (Treg) cells in the peripheral blood of hepatitis B virus(HBV)infected patients and their correlations with liver injury after HBV infection.Methods The peripheral blood of 34 asymptomatic HBV carrier(ASC),50 chronic hepatitis B(CHB) patients and 32 hepatocellular carcinoma(HCC)patients were collected.A total of 30 healthy controls(control group) were enrolled.The percentages of Th1 7 and Treg cells were detected by flow cytometry.Alanine aminotransferase (ALT)and aspartate aminotransferase (AST)were detected by Bayer ADVIA 1 650 automatic biochemistry analyzer. Results Compared with control group (1 .1 3%±0.37%),the p ercentage of Th1 7 cells in the peripheral blood of ASC group (1 .30%±0.28%)was higher with no statistical significance (P>0.05 ),but it obviously increased in CHB group (2.06%±1 .1 5%)and HCC group (5.89%±3.31%,P<0.01 ).The percentage of Th1 7 cells in HCC group was higher than that in CHB group (P<0.05 ).The percentage of Th1 7 cells was positively correlated with ALT and AST [coefficients of correlation(r)were 0.682 and 0.637,P<0.01 ].Compared with control group (7.1 8% ± 2.28%),the percentage of CD4 +CD25 +CD1 27lowTreg cells in the peripheral blood of ASC group (7.72%±2.05%) was higher with statistical significance (P>0.05),but it increased obviously in CHB group (9.01%±2.92%)and HCC group (10.86%±1.77%,P<0.01),and that in HCCgroup was higher than that in CHB group(P<0.05). The correlation of Treg cells was positive with ALT and AST (r=0.452,P<0.01;r =0.307,P<0.05 ).The correlation of Th1 7 cell percentage was positive with Treg cell percentage (r=0.327,P<0.01 ).The rate of Th1 7/Treg in control group was the lowest (0.1 7 ±0.1 6),that in ASC group(0.1 8 ±0.1 3)increased slightly,and there was no statistical significance between control group and ASCgroup (P>0.05).However,there was obviously increasing in CHB group (0.23 ±0.1 9,P<0.05)and HCC group(0.52 ±0.54,P<0.01 ).Conclusions In HBV infected patients,the percentages of Th1 7 and Treg cells increase.As forthe immune balance of Th1 7 and Treg cells is broken, the increasing ofTh1 7 cells mediates immune injury and induces the inflammation of liver cells.%目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV )感染者外周血中辅助性 T细胞17(Th17)细胞和调节性 T细胞(Treg)的比例变化及其与HBV感染后肝脏损伤的关系。
老板让我用流式的方法检测TH1217,我却一头雾水?小A:罗工你好,我接了一个课题,检测小鼠脾脏Th亚群的变化,一查文献就懵了,为啥脾脏的Th亚群检测的biomarker,有IFN,IL-4这些炎症因子呢?不是说一般鉴定细胞亚群都一些CD3,CD4开头的表面Marker吗?罗工:别急,我来告诉你,之所以检测这些炎症因子,是由Th1,Th2,Th17这些Th细胞亚群的特殊性导致的。
我们知道Th细胞包含了很多功能性亚群,但是截至目前,这些亚群本身的表面biomarker 知之甚少,有些文章中提出一些趋化因子受体CXCR3,CCR4,CCR6是其表面marker,然而这些文章绝大部分都是human的样本。
对于小鼠样本,我们只能退而求其次,从其细胞能特异性分泌某种炎症因子的特点上,来反推这类细胞是什么。
比如能分泌IFN-g的细胞我们一般认为其是Th1型细胞,能分泌IL-4的我们认为是Th2型细胞。
因此这些炎症因子正是用来作为鉴定区分Th亚群的关键指标,当然有时候我们也会选择更深层的核转录因子,比如Treg的常见指标就是Foxp3这个核转录因子:小A:哦!我大概明白了,那我就直接检测这些指标就行了?这些炎症和转录因子的流式检测和我之前做的CD3,CD4,CD8的染色有啥不一样的地方吗?罗工:炎症和转录因子的检测和表面染色很不一样。
小A:啊?不会吧,我就会染些简单的,咋办?罗工:别急,我来告诉你这些指标怎么染色,保证一看就懂:首先,不论炎症还是胞内因子都是无法像CD3那样直接加抗体染色的,因为我们常用的荧光流式抗体不具备自主穿透细胞膜的功能,直接加进去只会被细胞膜挡在门外,想要染上他们,需要我们手动给细胞建立抗体进入其内部的通道,即固定/破膜步骤。
固定可以让细胞内部的蛋白结构稳定下来,破膜可以让细胞表面产生孔径,方便荧光抗体进入内部染色:小A:原来是这样,那还好,可以接受,就是麻烦点。
但我怎么听师兄师姐说做炎症因子流式特别难,而且做一次实验时间特别长?罗工:这个确实,炎症因子的流式实验会多出一个步骤,就是体外刺激。
慢性分泌性中耳炎中Th17相关细胞因子白介素-17的测定秦彩虹;赵守琴;李洁;王阳;杨琳;任冉【期刊名称】《中国耳鼻咽喉头颈外科》【年(卷),期】2016(0)5【摘要】目的检测Th17细胞相关细胞因子白细胞介素-17(interleukin 17,IL-17)在慢性分泌性中耳炎(chronic otitis media with effusion,COME)患者中耳积液及外周血中表达水平,探讨COME发病中的可能作用。
方法通过流式微球分析法检测30例(48耳)COME患者中耳积液、外周血浆及20例健康对照组外周血浆中IL-17的表达水平。
结果 IL-17在中耳积液中含量显著高于同组患者外周血浆中含量(P<0.05),而后者高于健康对照组血浆中含量(P<0.05)。
结论 IL-17作为重要的免疫介质可能与COME的慢性持续状态有关。
【总页数】2页(P273-274)【关键词】中耳炎,伴渗出液,白细胞介素17;病理过程;流式微球分析法【作者】秦彩虹;赵守琴;李洁;王阳;杨琳;任冉【作者单位】首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科,耳鼻咽喉头颈科学教育部重点实验室(首都医科大学),北京100730;中国民用航空局民用航空医学中心空勤人员体检鉴定所,北京100123;首都医科大学附属北京复兴医院耳鼻咽喉科,北京100038【正文语种】中文【中图分类】R764.21【相关文献】1.龈沟液及血清中Th17、Treg相关细胞因子在慢性牙周炎中的作用 [J], 陈元胜2.Th17转录因子RORγt和BATF及Th17相关细胞因子在中性粒细胞亚型哮喘发病中的作用 [J], 王国强;王昱博;张维杰;王歆然;张文锦;吴恬;关雪娃;陈芳;郑敬彤3.SOCS1过表达的树突细胞对慢性阻塞性肺疾病小鼠肺组织中Th17及Treg相关细胞因子的影响 [J], 刘茂茂; 郑相如; 欧阳瑶4.龈沟液及血清中Th17、Treg相关细胞因子在慢性牙周炎中的作用分析 [J], 王骏;安怡;于杨5.miRNA-155、miRNA-21和Th1、Th2、Th17相关细胞因子在急、慢性布鲁菌病患者中的表达及其意义 [J], 徐峥;谢松松;阿孜古丽·阿布来提;谭风雷;张跃新因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
慢性荨麻疹患者外周血白介素17和白介素22的检测发表时间:2010-12-10T11:29:07.770Z 来源:《中国美容医学》(综合)10年第1期供稿作者:谭少萍廖家* 吴昌辉梁连辉陈述文霍培文岑[导读] 采用SPSS 13.0 统计学软件,用两样本t检验对两组数据进行比较,以x±s表示,P<0.05为有统计学意义。
谭少萍廖家* 吴昌辉梁连辉陈述文霍培文岑魏东(广东省中山市第二人民医院广东中山528447)作者简介:谭少萍(1956-),女,副主任医师,主要擅长痤疮、白癜风、脱发、银屑病及部分常见皮肤病的研究。
*注:通讯作者:廖家。
【摘要】目的:研究白介素17(IL-17)和白介素22(IL-22)在慢性荨麻疹患者中的作用。
方法:对30例慢性荨麻疹患者采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清IL-17和 IL-22水平,并与正常人对照组进行比较。
结果:经ELISA检测发现慢性荨麻疹患者外周血IL-17、IL-22水平显著升高,与正常人对照组差异有统计学意义。
结论:IL-17、IL-22可能在慢性荨麻疹的发病中发挥作用。
【关键词】荨麻疹;白细胞介素17;白细胞介素22【中图分类号】R759.1【文献标识码】B【文章编号】1008-6455(2010)07-0017-02近年来,新的细胞因子不断被发现,其中许多新的白介素与变态反应性疾病关系密切,如主要来源于外周血T细胞的IL-17和IL-22。
慢性荨麻疹是皮肤科常见的变态反应性疾病,病因及发病机制复杂,至今尚未阐明,越来越多的研究倾向于其发病与免疫功能异常有关。
文中通过ELISA法检测慢性荨麻疹患者和正常人对照血清中IL-17和IL-22的表达水平,以探讨IL-17、IL-22在慢性荨麻疹发病中所起的作用。
1对象与方法1.1对象1.1.1慢性荨麻疹组:所有研究患者均来自2008年10月-2009年10月于本院皮肤科门诊明确诊断的无明显原因反复发作的30例慢性荨麻疹患者,其中男13例,女17例,年龄15~61岁,平均(36.71±8.53)岁病程3个月~3年,平均(10.56±4.38)个月。
小鼠脾脏Th1/Th17细胞检测标准流程1. 材料1.1 组织脾脏。
1.2 实验仪器名称厂家型号超净工作台苏州苏洁微量移液器Eppendorf水套式CO2细胞培养箱Thermo Scientific Forma3111 水平低速离心机Eppendorf Centrifµge 5810 R流式细胞仪BD LSRFortessa1.3 主要实验试剂及耗材名称品牌货号规格PE-Cy™7 Hamster Anti-Mouse CD3e BD 552774 100 µg FITC Rat Anti-Mouse CD4 BD 557307 100µg Ms IFN-Gma PerCP-Cy5.5 XMG1.2 BD 560660 50µg Ms CD45 APC-Cy7 30-F11 BD 557659Ms IL-17A BV421 TC11-18H10 BD 566286 25µg Fixable Viability Stain 510 BD 564406 100µgFIX&PERM kit固定破膜剂MultiSciences 70-GAS003/2 BD Ph armingen™ Stain Buffer (FBS)BD 554656Lysing Solution 10X Concentrate BD 349202 100mL Leukocyte Activation Cocktail, with BD GolgiPlug BD 550583RPMI 1640 培养基,含L-谷氨酰胺Basalmedia L210KJ 500mL 胎牛血清FBS Serana S-FBS-EU-0 100mL 磷酸盐缓冲液(PBS),pH7.2 Basalmedia B310KJ 500ml 3mL巴氏吸管Biosharp BS-XG-03 100支/盒15mL螺口尖底无菌离心管LABSEE LN-M151 100只/包24孔细胞培养板Nest 702011 1块/包2. 方法2.1 脾脏准备脾脏取出后泡在PBS中置于4℃保存。
银屑病患者外周血Th17、Treg细胞检测及临床意义DING Xiao-jie;WANG Ya-qin;LIU Yan【摘要】目的:探讨银屑病患者外周血Th17细胞、Treg细胞检测及临床意义.方法:选取门诊、住院患者及健康体检者共96例.其中,银屑病患者34例,一般慢性皮肤病患者30例,健康对照组32例.采用流式细胞术检测3组患者外周血Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg比值.结果:3组患者Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg比值,差异均有统计学意义(P<0.05).通过两组t检验结果分析发现,银屑病患者Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg比值高于慢性皮肤病患者组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05).银屑病组患者血清中IL-10及TGF-β水平较慢性皮肤病组及健康对照组患者均有下降(P<0.05).银屑病组患者血清中IL-17、IL-22水平较慢性皮肤病组及健康对照组患者均有升高(P<0.05).银屑病患者外周血Th17细胞、Treg细胞水平与IL-10、TGF-β水平呈负相关(P<0.05);银屑病患者外周血Th17细胞、Treg细胞水平与IL-17、IL-22呈正相关(P<0.05).结论:银屑病患者外周血中Th17、Treg细胞二者表达水平升高,Th17/Treg比值升高,提示Th17、Treg细胞两者可能参与银屑病的发病,而阻断两者的产生途径可能成为治疗银屑病的新方法.【期刊名称】《川北医学院学报》【年(卷),期】2019(034)003【总页数】3页(P341-343)【关键词】银屑病;Th17细胞;Treg细胞【作者】DING Xiao-jie;WANG Ya-qin;LIU Yan【作者单位】;;【正文语种】中文【中图分类】R758.63银屑病是一种具有特征性皮损的慢性复发性炎症性皮肤病,通常表现为红色丘疹或斑块,上覆厚层银白色鳞屑,刮除银白色鳞屑,可观察到蜡滴现象、薄膜现象、点状出血。