毛细管区带电泳法分析不同来源血竭中龙血素 和龙血素

第 21 卷第 4 期 2002 年 7 月
分析试验室 Chinese Journal of Analysis Laboratory
Vol. 21. No . 4 2002- 7
选用电压为 25 kV。 2 6 线性范围
[ 1] [ 2] [ 3] [ 4] [ 5] [ 6] 阮 俊 冯德民 , 彭卫欣 张国峰 , 缪 刚
中图分类号 : O657 8 文献标识码 : A 文章编号 : 1000 0720( 2002) 04 0090 03
复方芦丁 片中含 有芦丁和 维生素 C 两种组 分。测定复方和 维生素 C 的方法有双波 长法[ 1] 、 正交函数分光光度法 [ 2] 、 高效液相色谱法[ 3] 等。毛 细管电泳法测定天然植物中芦丁 和维生素 C 已有报道。本文以苯甲酸为内标, 采用毛细管区带 电泳法, 建立了同时测定芦丁和维生素 C 含量的 新方法。可应用于复方芦丁片中芦丁和维生素 C 含量的测定。 1 实验部分 1 1 仪器与试剂 Beckman PACE5500, 紫外检测器。未涂层熔凝 石英毛细管( 河北永年光导纤维厂 ) , 75 m ( i. d) 47 cm, 有效长度为 40 cm 。 芦丁对照品 ( 北京化学试剂公司 , ACROS 进口 分装 ) 。维生素对照品( 中国医药公司北京采购站 , 分析纯, 99 7% ) 。硼砂、 硼酸、 HCl、 NaOH 皆为分析 纯, 水为二次蒸馏水。对照品储备溶液: 精密称取 12 5 mg 芦丁和 31 25 mg 维生素 C, 用运行缓冲溶 液溶解并稀释至 25 mL, 用 0 45 m 滤膜过滤即 得。
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运行缓冲液的 pH 对分离的影响 本文考察了 4 g/ L 硼酸~ 3 g/ L 硼砂溶液在 pH

阐释了相对斜率（ 相对校正因子） 的物理意义， 进而采用相对斜率算法建立剑叶龙血树的含 了它与相对校正因子的数学关系， 量测定法， 并进行方法学验证。结果： 方法的线性和回收率均良好； 以龙血素 A 为参照， 龙血素 B 的相对斜率和相对保留时间 平均值为 1. 248 和 1. 06 ， 且在 5 个不同的色谱系统上保持稳定； 相对斜率值与使用紫外分光光度计按吸光系数法测得值一致 。 B 是可行的。 结论： 相对斜率算法简便、 准确， 以此进行替代对照品法测定剑叶龙血树中龙血素 A、 关键词： 民族药； 龙血竭； 剑叶龙血树； 龙血素 A； 龙血素 B； 高效液相色谱法； 替代对照品法； 一测多评； 相对斜率 中图分类号： R917 文献标识码： A 文章编号： 0254 － 1793 （ 2011 ） 11 － 2058 － 05
3 ］ ［4 ］ HPLC 法测定龙血竭［2， B 及其原料 中龙血素 A、
力的思路之一。 本文进一步提出了相对斜率概念， 并解释了它的物理意义， 建立了使用单一对照品测 B 含量的方法， 定龙血竭原料中龙血素 A、 为该类药 物的质量控制、 相关标准的完善和替代对照品法的 适用性提供了依据。 1 仪器与试药 Agilent 1100 高 效 液 相 色 谱 仪 （ DAD 检 测 器， Chemstation 工作站 ） ； Agilent 1200 高效液相色谱仪 （ DAD 检测器， Chemstation 工作站 ） ； Waters 2695 高 Epower 2 工 作 效液 相 色 谱 仪 （ 2996PDA 检 测 器，
含量的报道， 这些方法均为外标法， 需要 2 种对照 ［5 8 ］ 品。替代对照品法或称“一测多评 ” 法 是解决 中药多指标含测面临的对照品缺乏和对照品费用压

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站） ； Waters e2695 高效液相色谱仪 （ 2998PDA 检测 Epower 2 工作站 ） ； Shimadzu LC － 2010A HT 高 器， LCsolution 工作站 ） ； Agi效液相色谱仪（ UV 检测器， lent 8453 紫外 － 可见分光光度计。 B（ 批号 龙血 素 A （ 批 号 11660 － 200301 ） 、 111558 － 200202 ） 对照品来自中国食品药品检定研 J． T． Baker 公司 ） ， 究院， 乙腈 （ 色谱纯， 冰 醋 酸、 甲 醇、 二氯甲烷、 三氯甲烷 （ 分析纯， 北京化工厂 ） ， 实 验用水为 Milli － Q 系统制备。 药材产自广西、 云南 和老挝， 经中国食品药品检定研究院标本馆徐纪民 鉴定为百 合 科 剑 叶 龙 血 树 Dracaena cochinchinensis （ Lour． ） S． C． Chen 的含脂木材。 2 2. 1 方法与结果 原理 高效液相色谱仪的紫外 / 可见检测器 其响应值也遵循 可看作一台紫外 / 可见分光光度计，
Abstract
Objective： To establish an HPLC method for determination of loureirin A and loureirin B in Dracaena
cochinchinensis by substitute reference substance． Method： To give the definition and physical interpretation of relative slope（ RS） ， explain the relationship between RS and relative correction factor． The determination of loureirin A and loureirin B was established and validated． Results： The quantitative analysis was demonstrated with good linear relationship and recoveries． The RS and relative retention time of loureirin B detected by five different HPLC systems showed good repeatabilities． And mean values were 1. 248 and 1. 06． The values of RS detected by HPLC and ultraviolet spectrophotometry were equal． Conclusion： The method is simple and accurate，can be used for determination of loureirin A and loureirin B in D． cochinchinensis． Key words： ethnic drug dragon’ s blood； Dracaena cochinchinensis； loureirin A； loureirin B ； HPLC ； substitute reference substance（ SRS） ； quantitative analysis of multi － components by single marker（ QAMS） ； relative slope（ RS） 龙血竭为我国研制的血竭替代品， 其局颁标准 WS3 － 082 （ Z － 016 ） － 99 （ Z ） 的含量测定项仅控制 龙血素 B 的含量。 它的原料为百合科剑叶龙血树 Dracaena cochinchinensis （ Lour． ） S． C． Chen 的含脂 木材， 该原料还作为民族药收载于《广西壮族自治 ［1 ］ 区壮药质量标准 》 ， 但标准无含量测定 稳定性试验 取供试品溶液， 在 0， 18 ， 24 h 分别测定， A 、 B 结果龙血素 龙血素 峰面积 RSD （ n = 5 ） 0. 85% 0. 64% 。 分别为 和 的 2. 4. 3 2. 4. 4 重复性试验 按“2. 2. 2 ” 项下方法制备供 试品溶液 6 份， 进样测得龙血素 A、 龙血素 B 平均含

世界科学技术-中医药现代化★专题讨论一:中药化学成分鉴定高故毛細誓电泳法同时分离栓测六种地龙多肽*周鑫悦，张诗琪，林露，陈莉，李琦，赖昕余丽双h(福建中医药大学药学院福州350122)摘要：地龙药用历史悠久，但目前未见对其活性多肽进行分离检测的报道。

本文建立了一种同时分 离检测六种地龙多肽的毛细管区带电泳新方法。

实验发现，在以60 mmo卜L_1乙酸铵-50 mmo卜L_i氢氧化纳 (pH= 8.0)为运行缓冲液，以20 k V为分离电压的分析条件下，六种地龙多肽可在10 min内到达基线分离。

经方法学验证，六种多肽精密度良好,检测限(S W=3)可低至为1.0|JLg.m L'关键词：地龙多肽毛细管电泳doi： 10.11842/wst.20181218002 中图分类号：R33 文献标识码：A地龙又名蚯蚓，为钜蚓科动物参环毛蚓 aspergillum(E.Perrier),M Pheretima vulgaris Chen,威廉环毛虫引P/ierefima gwf/fc//m7(Michaelsen)或柿 盲环毛蝴 P/iereiima pechm/era Michaelsen的干燥体，相 传因用其治疗宋太祖赵匡胤的带状疱疹和哮喘而得 名“地龙”，是一种传统的中药材。

地龙性寒味咸，具 有降压、平喘、通络、利尿、解热镇痛抗炎等多种功效"_21且应用广泛，近年来常用于中药制剂、注射剂及 保健品中。

地龙富含蛋白质和多肽，干体中含量高达 56%-66%131，地龙多肽种类繁多，功能各异。

据报道，目前已从地龙中分离得到抗菌肽|4_61、催产素相关肽|71、镇痛抗炎肽181等多种多肤，例如地龙多肽Annectocin是 从赤子爱胜蚓(）中分离得到的一种催产 素-加压素相关肤（oxytocin-vasopressimelated peptide),具有增强肠道的自发收缩、肾脏的脉动收缩 及膀胱摇动，诱导产生陈规定型产卵行为的作用|7_9|; PTP是一种从蚯蚓全身中分离出的对前肠的自发性收 缩显示出强烈兴奋作用的多肽|K)|;F-1和OEP3121是 从蚯蚓中纯化出的有抗菌作用的抗菌短肽|5'61。