流式细胞术在食品微生物检测领域的研究进展

流式细胞分选术的应用进展【摘要】流式细胞分选技术具有检测速度快、统计学精度高、可在分析的同时把具有指定特征的细胞分选出来等特点，因而应用广泛。

本文简要概述了流式细胞术的概念及流式细胞分选的原理，并对其在肿瘤干细胞分选、外周血细胞分选、染色体分离、稳定细胞转染株筛选等方面的应用进展作一综述。

【关键词】流式细胞；分选；应用流式细胞术（flow cytometry，FCM）是一项新型的、发展迅速的生物医学分析技术，它不仅可以对细胞、微生物等进行检测分析，而且还可以根据颗粒特性进行分选，具有检测速度快、测量指标多、采集数据量大等特点，因而被广泛应用于免疫学、细胞生物学、肿瘤学、血液学、药物开发、环境检测、食品卫生防疫等科学研究和工作中[1]。

1 流式细胞术的概念流式细胞术是20世纪60年代末开始发展起来的技术，它是集激光技术、光电测量技术、电子生物技术、电子计算机技术、流体力学以及荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技细胞分析技术。

流式细胞仪是应用流式细胞术的有效工具，它使细胞或微粒在鞘液包裹下流动，逐个通过激光聚焦区，并用高灵敏度的光学系统收集各散射光及荧光信号，再经过计算机系统对采集的信号进行存储、显示，从而得以对粒子进行多参数分析，包括诸如粒子颗粒度和大小、细胞周期、细胞内细胞因子、细菌表面抗原、多分子复合体排列、多价反应动力学等[2]。

分选型流式细胞仪一般还有筛分的作用，可以根据所检测颗粒的某种性质进行分选和回收，用于后续功能实验。

并且，如果整个分选的过程是在无菌条件下进行的，分选下来的细胞还可以用来继续培养。

在我国，20世纪90年代初已开始研发应用流式无菌分选的技术[3]。

2 流式细胞分选的原理分选型流式细胞仪一般由液流系统、光路系统、检测分析系统和分选系统4部分组成。

流式的分选功能是通过鞘液流形成含有细胞的带电液滴而实现的。

在流动室的喷嘴上装有一个高速振荡器，该装置在充电后以每秒几万次的振动频率，使鞘液流成为上万个液滴；目前，先进的分选型流式细胞仪震荡速度可以达到10万/s。

流式细胞术检测细胞内细胞因子的研究进展【摘要】：细胞因子具有调节细胞生长、分化成熟、功能维持、调节免疫应答、参与炎症反应、创伤愈合和肿瘤消长等多种生物学功能。

因此，细胞因子的研究成果为临床上预防、诊断、治疗疾病提供了科学基础，特别是利用细胞因子治疗肿瘤、感染、造血功能障碍、自身免疫性疾病等，具有非常广阔的应用前景[1]。

随着细胞表面标记及胞内细胞因子标记流式细胞技术的出现，使对胞内细胞因子的研究推向了一个新的阶段。

流式细胞术也成为了检测单细胞水平细胞因子表达能力的重要检测方法。

本文针对流式细胞术在胞内细胞因子检测中的研究进展作一综述。

【关键词】：流式细胞术；细胞内；细胞因子；检测技术引言：细胞因子(cytokine，CK)是由多种组织细胞(主要为免疫细胞)所合成和分泌的小分子多肽或糖蛋白，能介导细胞之间的相互作用，并在抵抗外来病原及维持机体内环境平衡中起到重要作用。

细胞因子的检测方法一般分为生物学测定法、分子生物学测定法及免疫学测定法。

而目前用于检测单个细胞特定细胞因子表达的手段则包括：多参数流式细胞术，酶联免疫斑点法ELISPOT[2]、原位杂交、免疫细胞化学、限制性稀释分析（limiting dilution analysis，LDA）和单细胞PCR等生物分析技术。

相较于其它的检测方法，流式细胞术在细胞内细胞因子的检测上具有高效、简便、适应性广等优势。

一、流式细胞术的概述流式细胞术(flow cytometry，FCM)是一种能够对单个细胞或生物微颗粒的生物学性质进行定量分析和分选的检测手段，具有快速、高精度、高准确性、多参数和高通量等优点，是目前先进的细胞定量分析技术之一。

FCM能够快速分析单个细胞或粒子的多种特性，既可以定性，也可以定量，尤其适用于大量样品检测，已在临床检验工作中得到广泛应用。

流式细胞仪（fluorescenceactivated cell sorter，FACS）的检测分析已涉及到细胞生物学、免疫学、肿瘤学、遗传学、血液学、微生物学等学科。

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T logy科技食品科技食品安全是维护现今社会稳定发展的一项重点任务，在近年来我国经济水平不断提升的过程中，人们对于食品安全有了更高的重视程度。

食品安全问题的发生，不仅会直接对人们的身体健康以及生命安全造成影响，且将影响社会的整体稳定。

在该情况下，需要积极做好食品微生物快速检测工作，为食品安全提供保障。

1　快速检测技术1.1　基因探针技术在以该技术对食品微生物进行检测时，需要对微生物特性基因DNA链进行准确的标记。

按照基因配对原则，考察标记性DNA探针同待测样品是否能够形成杂交份子，以此对目标样品当中是否存在微生物进行判断。

该方式在实际应用当中具有灵敏度高、特异性强等特点。

1.2　基因芯片技术这是一种新型微量分析技术，通过微机械、计算机与微电子技术的应用，将已经设计完成的基因片段以高密度、有序的方式排列在玻璃片等载体上，形成基因检测芯片。

应用光导原位合成与显微印刷方式，使不同类型探针分析按照一定的顺序以密集的方式固定。

支撑物方面有经过处理的硝酸纤维素膜、玻璃片等，之后将芯片与样品寡核苷酸进行多元杂交处理。

之后，使用扫描仪对信号的分布以及强弱情况进行分析，确定分子序列与数量，确定目标样品当中是否存在特定的微生物。

该方式在实际应用当中，具有通量高、特异性强以及操作简便等特点，该技术能够对以往技术操作复杂、检测通量低等问题进行有效克服，具有较好的应用价值。

1.3　酶联免疫法该技术是一种固相免疫检测技术，具有较广的应用范围。

在检测当中，根据抗体与抗原的不同，需要采取不同的操作步骤使抗体与抗原发生反应。

在上述工作完成后，将酶反应底物加入到其中发生颜色反应，以此为基础进行定性以及定量分析。

该方式不仅具有特异性强、灵敏度高的特点，且具有易于标准化的优势，能够较好的应用在细菌检测中[1]。

1.4　免疫磁性微球免疫磁性微球是表面有可发生抗原抗体反应的物质的磁性质微球，具有孔径小、超顺磁性等优势，多应用在细胞分离中。