第２２卷第１９期 ２００６年１０月 中国给水排水 ＣＨＩＮＡ ＷＡＴＥＲ＆ＷＡＳＴＥＷＡＴＥＲ ＶｏＩ．２２ Ｎｏ．１９ ０ｃｔ．２ｏ０６
一株溶藻细菌（Ｐ１ ５）的溶藻效应研究
李小彩 ， 胡文容 ， 裴海燕 ， 涂开封
（１．山东大学环境科学与工程学院，山东济南２５００６１；２．中国海洋大学环境科学与
工程学院，山东青岛２６６００３）
摘要：从实验室海绵固定化微生物系统中分离获得一株溶藻细菌——Ｐ１５，经鉴定其属于
红球菌属。研究了该茵对ＦＡＣＨＢ４６９、ＦＡＣＨＢ５６９、ＦＡＣＨＢ３７７、ＦＡＣＨＢ４１６四种蓝藻的溶藻效果、溶
藻方式及无机磷对该细菌生长的影响。结果表明：液体溶藻现象较固体溶藻现象明显；液体溶藻试
验中有藻絮体形成，且初始茵浓度越大，溶藻效果越好。Ｐ１５茵可能是通过直接接触使藻细胞凝聚
并进一步被微生物降解的，同时它还能分泌一种具有热稳定性且可抑制藻细胞生长的胞外物。无
机磷对该茵的生长影响显著，当磷浓度（Ｋ ＨＰＯ ＋ＫＨ ＰＯ ，１：１）≤２ ｇ／Ｌ时，磷加入量越大则其生
长情况越好。
关键词： 溶藻细菌； 生长曲线； 溶藻物质； 红球菌
中图分类号：Ｘ７０３．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００—４６０２（２００６）１９—０００８—０４
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ａｌｇｉｃｉｄａｌ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｎ Ａｌｇａｅ－ｌｙｓｉｎｇ Ｂａｃｔｅｒｉｕｍ
（Ｓｔｒａｉｎ Ｐ１５）
ＬＩ Ｘｉａｏ－ｃａｉ ，ＨＵ Ｗｅｎ－ｒｏｎｇ ，ＰＥＩ Ｈａｉ—ｙａｎ ，ＴＵ Ｋａｉ—ｆｅｎｇ
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ ，ｆｌｎａｎ
２５００６ １，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｏｃｅａｎ
ｏｆ Ｃｈｉｎａ，Ｑｉｎｇｄａｏ ２６６００３，Ｃｈｉｎａ）
100以内质数表
2 3 5 7 11 13 17 19 23 29
31 37 41 43 47 53 59 61 67
71
73 79 83 89 97
一个数，如果只有1和它本身两个因数，这样的数叫做质数（或素数）。如2,3,5,7都是质数。
一个数，如果除了1和它本身还有别的因数，这样的数叫做合数。如4,6,15,49都是合数。
1不是质数，也不是合数。最小的奇数是1，最小的偶数是0，最小的质数是2，最小的合数是4。
个位上是0、2、4、6、8的数是偶数；个位上是1、3、5、7、9的数是奇数。
奇数＋奇数＝＿偶数
奇数＋偶数＝ 奇数
偶数＋偶数＝ 偶数
奇数×奇数＝奇数
奇数×偶数＝偶数
偶数×偶数＝偶数
大于2的偶数，都可以表示为两个质数的和。
山东医药２００７年第４７卷第１７期
ｐ １ ５蛋白表达及其基因甲基化对急性白血病 预后的影响 ’
孙英，陈睿，郑衍玲，秦迎 （山东医学高等专科学校，山东济南２５０００２）
［摘要］观察５３例急性白血病患者（观察组，其中ＡＬＬ２２例，ＡＭＬ３１例；完全缓解者１６例，初治者２３例， 复发者１４例）。骨髓单个核细胞ｐ１５蛋白表达情况及ｐ１５基因甲基化情况，并与５例缺铁性贫血患者进行比较， 随访治疗效果及其预后。ｐ１５蛋白阳性表达率为ＡＬＬ ３１．８ ，ＡＭＬ ２９．０ ；ｐ１５基因甲基化阳性率为ＡＬＬ ５９．１ ，ＡＭＬ ５８．１ ，明显高于对照组（均呈阴性），Ｐ均＜Ｏ．０１。阳性率完全缓解者＞初发者＞复发者；ｐ１５甲基 化完全缓解者＜初发者＜复发者。相关分析显示ｐｌ５蛋白与ｐ１５基因甲基化呈明显负相关，二者与疗效均有相关 性。认为ｐ１５基因甲基化与ｐ１５蛋白失活关系密切；ｐ１５蛋白表达及ｐ１５基因甲基化情况可预测急性白血病的疗 效及预后。 ［关键词］急性白血病；ｐ１５；甲基化；ＣｐＧ ［中图分类号］Ｒ７３３．３ ［文献标识码］Ｂ ［文章编号］ １００２—２６６Ｘ（２００７）１７－００４１—０３ 细胞周期的失调控对恶性肿瘤的发生起着重要 的影响。Ｐ１５作为抑癌基因在Ｇ ／Ｓ期起负调控作 用，其失活机制及甲基化的表达近年来引起临床关 注。２００６年３月￣２００６年１Ｏ月，我们观察了５３例急 性白血病患者骨髓单个核细胞ｐ１５蛋白表达及其甲 基化情况，为探讨ｐ１５蛋白及其甲基化对急性白血 病患者预后的影响。 １资料与方法 １．１一般资料观察组为５３例急性白血病患者， 男３１例，女２２岁，年龄６～７２岁，中位年龄３５岁，其 中急性髓系白血病（ＡＭＬ）３１例，急性淋巴系白血病 （ＡＬＬ）２２例。初发未治组２２例、复发组１４例、完全 缓解组１６例。对照组为５例缺铁性贫血患者，男３ 例，女２岁，年龄１６～４２岁，中位年龄３Ｏ岁。均经骨 髓检查确诊。符合按１９８６年ＦＡＢ分类标准及１９８７ 年全国白血病所制定的疗效判定标准。 １．２检测方法试剂；ＰＩ５鼠抗人单克隆抗体、ＳＰ一 ９０００免疫组化检测试剂盒，由北京中山生物技术有 限公司提供；ＤＮＡ提纯试剂盒，ＰＣＲ扩增试剂盒，引 物等由上海生工生物工程公司提供。引物序列：① Ｐ１５甲基化引物（ｐ１５ Ｕ）１５４ ｂｐ；上游：５，＿ ＧＣＧＴＴＣＧＴＡＴＴＴＴＧＣＧＧＴＴ一３ ，下游：５ 一ＣＧＴＡ— ＣＡＡＴＡＡＣＣＧＡＡＣＧＡＣＣＧＡ一３ 。②ｐ１５非甲基化 引物（ｐｌ５Ｍ）１４８ ｂｐ：上游：５，｜ＴＧＴＧＡＴＧＴ— ＧＴＴＴＧＴＡＴＴＴＴＧＴＧＧＴＴ一３ ，下游：５ 一ＣＣＡＴＡ— ＣＡＡＴＡＡＣＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＡ一３ 。 １．２．１ Ｐ１５蛋白表达测定用Ｆｉｃｏｌｌ淋巴细胞分离 液提取骨髓单个核细胞（ＢＭＭＮＣ），涂片，用免疫组 化来显示ｐ１５蛋白的表达。用ＰＢＳ液体替代一抗工 作液作阴性对照。显微镜下观察，细胞的胞浆、胞核 或胞膜的染色情况。胞核染色呈散在、灶性或弥漫分 布呈棕黄色为阳性结果。染色结果判断标准参照 Ｆｒｏｍｏｗｉｔｚ方法在高倍镜下对核、膜、浆等染色反应 作如下评分：①无着色为０，淡黄色为１，棕黄色为２， 深棕色或棕揭色为３；②阳性范围：＜５ ９／６为０，５ ～ ２５ 为１，２６ ～５Ｏ ９／６为２，５１ ～７５ 为３，＞７５ ９／６ 为４。两项结果相加，＜２为阴性（一），２～３为弱阳性 （＋），４～５为中度阳性（＋＋），＞６为强阳性（＋＋ ＋）。若染色强度不一致，则随机选取５个高倍视野， 每个视野计数１００个细胞，取其平均值。以＞３为阳 性表达。 １．２．２ ｐ１５甲基化表达测定多采用ＭＳＰ方法，按 常规无菌操作取静脉血或骨髓（５ ｍｌ或１．５ ｍ１），肝 素抗凝，分离单个核细胞，并用ＰＢＳ洗２次，计数单 个核细胞，取１～２×１０ 个细胞，沉淀后弃上清，次日 加ＤＮＡ提取缓冲液１ ｍｌ，蛋白酶Ｋ液使终浓度为 ３００ ｍｇ／１，充分混匀，置３７ Ｃ摇动过夜。次日，加酚一 氯仿液１ ｍｌ，剧烈振荡颠倒混匀至乳白色，４ Ｃ １０ ０００×ｇ离心２０ ｍｉｎ，取上清，加入酚一氯仿混合液１ ｍｌ充分混匀，４ Ｃ １０ ０００×ｇ离心２０ ｍｉｎ，取上清于 另一试管中，加２倍体积预冷（一２Ｏ℃）无水乙醇，用 ７Ｏ％冷乙醇洗２次，离心弃上清，室温干燥，加超净 水２００ ｌ溶解ＤＮＡ，并用紫外分光光度计测定其 ＤＮＡ浓度，各标本的ＯＤ２６０／ＯＤ２８０值均在１．６～ ４］
齐齐哈尔医学院学报２００７年第２８卷第１Ｏ期
胃癌组织中ｐ１ ５、ｐｌ ６、ｎｍ２３蛋白的
表达及其相关性研究
兴桂华 荣 玮 柏青杨 徐广有 于秀文
【摘要】 目的探讨胃癌组织中ｐ１５、ｐｌ６和ｎｍ２３蛋白的表达及其相关性 方法 应用免疫组织
化学ＳＰ方法检测５２例患者手术切除胃癌组织中ｐ１５、ｐｌ６和ｎｍ２３蛋白的表达水平。结果ｐ１５、ｐ１６
和ｎｍ２３蛋白在胃癌组织中的阳性率分别为４２．３ 、４４．２ 、４０．４ ；ｐｌ６蛋白表达与胃癌的分化程度、
淋巴结转移、肿瘤分期和惠者生存期在统计学上均差异显著（Ｐ＜０．０５），而与胃癌的组织学类型无关
（Ｐ＞０．０５）；ｎｍ２３蛋白表达与淋巴结转移、肿瘤分期和患者生存期有显著性差异（Ｐ＜０．０５），与胃癌
的组织学类型和胃癌的分化程度无关（Ｐ＞０．０５）；ｐｌ５蛋白表达与胃癌临床病理特征无相关性（Ｐ＞
０．０５）；ｐｌ５、ｐｌ６和ｎｍ２３蛋白在胃癌中的阳性表达两者间呈正相关（Ｐ＜０．０５）。结论 联合检测Ｐｌ５、
Ｐ１６和ｎｍ２３蛋白的表达可为临床判断胃癌生物学行为及评估预后提供客观的参考指标。
【关键词】 胃癌 ｐｌ５ ｐｌ６ ｎｍ２３蛋白 免疫组织化学
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌ５ ａｎｄ ｐｌ６ ａｎｄ ｎｍ２３ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ Ｇａｓｔｒｉｃ Ｃａｎｃｅｒ Ｘｉｎｇ Ｇｕｉｈｕａ，ｅｌ ａ１．
（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｑｉｑｉｈａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．ＨｅｉｌｏｎｇＪｉａｎｇ １６１０４２ Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐ１ ５、ｐ１ ６ ａｎｄ ｎｍ２３ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ
ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐ１５、ｐ１６ ａｎｄ ｎｍ２３ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏ—
