华南师范大学实验报告

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华 南 师 范 大 学 实 验 报 告
学生姓名 叶洁丽 学 号
专 业 综合理科二班 年级、班级 2007级
课程名称生物化学 实验项目 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
实验类型 □验证 □设计 □综合 实验时间 2008 年 11 月 3 日
实验指导老师 陈文利 徐杰 实验评分
一、目的
1.学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。
2.掌握微量滴定法的基本操作技术。

二、原理
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一,缺少它时会产生坏血病,因此又称为抗
坏血酸(ascorbic acid)。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来,发现它有增强机体
对肿瘤的抵抗力,并具有对化学致癌物的阻断作用。
维生素C是具有L系糖构型的不饱和多羟基物,属于水溶性维生素。它分布很广,植
物的绿色部分及许多水果(如橘子、苹果、草莓、山楂等)、蔬菜(黄瓜、洋白菜、西红柿
等)中的含量更为丰富。
维生素C(抗坏血酸)具有很强的还原性,能将染料2,6一二氯酚靛酚还原成无色,
而抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。

C
C
C
CCCHOHHOHOOH OH

O

2
N
OH
Cl
Cl
O
+

C
C
C
CCCOHOHOOH OH

O

2
N
OH

Cl

Cl
O
+

OH(蓝色)还原型抗坏血酸氧化型脱氢抗坏血酸2,6-二氯酚靛酚还原型2,6-二氯酚靛酚(红色)HOH+(无色)N
Cl
Cl
O

氧化型2,6一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色,在中性或碱性溶液中呈蓝色,当用
此染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时,在抗坏血酸未全部氧化前,则滴下染料立即被还原
成无色,一旦溶淀中的抗坏血酸全部被氧化时,则滴下的染料立即使溶液显示粉红色,此时
为滴定终点,即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被氧化完全,从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准
液的消耗量,可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。

三、材料、试剂与器具
(一)材料 花椰菜
(二)试剂 1、标准抗坏血酸溶液 2、2%草酸溶液
3、1%草酸溶液 4、0.01% 2,6 一二氯酚靛溶液
(三)器具 1、锥形瓶若干 2、移液管若干
3、容量瓶一个(100毫升)4、微量滴定管(3毫升)
5、漏斗一个 6 、研钵

四、实验内容
(一)提取
称取1.8克花椰菜,剪碎加2%的草酸几毫升,置研钵中研成浆,倒入100毫升的容量瓶
内,用2%草酸洗涤数次,最后定容至刻度,充分混匀后过滤。
(二)滴定
1、标定2,6一二氯酚靛酚溶液的浓度:
量取标准维生素C溶液1ml,加9ml 1%草酸加入50ml锥形瓶中,同时量取10ml草酸加入
另一个50ml锥形瓶中作空白对照,用已标定的2,6一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现,15秒
不退色。记录所用的毫升数,计算每毫升2,6一二氯酚靛酚所能氧给维生素C的毫克数(K)。
锥形瓶号 1(标准) 2(空白对照)
标准维生素C溶液(ml) 1
1%草酸(ml) 9 10
操作 用已标定的2,6一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现,15秒不退色
记录(所用的毫升数ml) 3.15 0.37
计算:K=0.1mg/(V标—V空)=0.1mg/(3.15—0.37)ml=0.03597mg/ml

2、样品的测定:
取50ml锥形瓶2个,分别加入滤液10ml,用已标定的2,6一二氯酚靛酚溶液滴定至终
点,以微红色能保持15秒不退色为止,整个滴定过程宜迅速,不宜超过2min,空白滴定方
法同前,记录两次滴定所得的结果,求平均值V1。
锥形瓶号 1(滤液) 2(滤液) 3(空白)
滤液(ml) 10 10
1%草酸(ml) 10
操作 用已标定的2,6一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现,15秒不退色
记录(所用的毫升数ml) 1.45 1.44 0.32
平均值(ml) 1.445 (V1) 0.32
分析:两次滴定的结果分别为4.45ml和4.44ml,比较接近,只相差了0.01,说明滴定
结果还是比较准确的,这就要求每一步操作都要很正确且准确。此次空白滴定和前面在标
定2,6一二氯酚靛酚溶液的浓度时的空白滴定分别为0.37ml和0.32ml,相差了0.05ml,
误差相对比较大。根据分析可能是1.滴定终点时溶液变红程度所选取的标准不够一致,有
少许不同;2.滴定过程中溶液溅到了锥形瓶壁而没有弄回溶液中;影响了实验结果。
(三)结果计算
根据实验数据计算出每100g样品的维生素C含量:

维生素C(mg/100g样品)=123()VVKVWV×100
式中:V1为滴定样品液所用去染料体积(ml);
V2为滴定空白所用去染料体积(ml);
V3为样品测定时所用滤液体积(10ml);
为样品提取液的总体积;
K为1毫升染料能氧化维生素C的量(mg);
W为称取样品重量(g )。

计算:维生素C(mg/100g样品)=123()VVKVWV×100=(4.445—0.32)×0.03597
×100×100/1.8×10=82.43mg/100g
根据查得值85~100 mg/100g(数据来源) 此结果是比较接近的,但还是偏少了。通
过分析,偏少的原因可能是
1. 在标定2,6一二氯酚靛酚溶液的浓度时,滴定标准维生素C溶液过程中,变红程
度较深时才停止滴定,所用2,6一二氯酚靛酚溶液增多,导致最终算出的K值偏小;
2. 在标定2,6一二氯酚靛酚溶液的浓度时,滴定标准维生素C溶液过程中,有少许2,
6一二氯酚靛酚溶液滴到锥形瓶壁了,所用2,6一二氯酚靛酚溶液增多,导致最终算
出的K值偏小;
所以这两个原因共同导致了最终的实验结果比查得值偏小。不过同时也还有可能是数
据本身,因为我查的的数据是温州花椰菜的维生素含量,而实验室的花椰菜不一定是
产自温州,地域、季节都会影响到其中维生素的含量。

五、注意事项
1.滴定时速度要尽可能快,因样品内一般都含有一些能特将2,6一二氯酚靛酚还原的
其它物质,尽管它们还原比染料的能力一般较维生素C弱。
2.滴定所用染料要在1~4ml 之间,否则须增减样品量或将提取液适当稀释。
3.抗坏血酸易溶于水,也极易被氯化,故提取抗坏血酸时,须抑制组织中氧化酶活性。
2%草酸可抑制该酶,1%草酸则不能,三氯醋酸、偏磷酸、盐酸有同样功效。Fe2+能还原二
氯酚靛酚,如用醋酸(8%即可)则Fe2+不会很快与染料起作用。
4.样品提取液应避免日光直射,否则会加速抗坏血酸的氧化。
5.在生物组织内和组织提取物内,抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式
存在。它们同样地具有维生素C的生理作用,但不能将2,6一二氯酚靛酚还原脱色。
6.本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下,干扰物反应进行得很慢。
7.样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚,但反应速度均较抗坏血酸慢,因而滴定开始
时,染料要迅速加入,而后尽可能一点一点地加入,并要不断地摇动锥形瓶直至呈粉红色,
于15s内不消退为终点。【1】

六、实验讨论
思考题:
(一)、为了测得准确的维生素C含量,实验过程中都应注意哪些操作步骤?
答:1.量取液体时一定要精确,注意读数时视线一定要与液体凹液面最低处相持平;
2.滴定时一定要控制好滴定速度,不要一下子滴下太多2,6一二氯酚靛酚溶液,
导致滴定过量,若发生此种情况要重新做一次,不能取巧;
3.滴定过程要注意观察锥形瓶中溶液的颜色,准确判断滴定终点,即以微红色能保
持15秒不退色为止,而且每次滴定终点的微红色都要采取同样的标准,即变红程度要一样。

(二)、试简述维生素C的生理意义。
答: 1、合成Collagen(胶原蛋白)-以形成软骨、骨质、牙釉质及血管上皮重要基质。
2、促进脯胺酸转变为氢脯胺酸之反应,而氢脯胺酸为构成胶原重要成分之一,因此维
生素C可促进胶原之生成。
3、维持结缔组织之正常-因为胶原是构成结缔组织之细胞间质。
4、参加体内氧化还原反应-维生素C可参加酪胺酸及某些物质的氧化反应。
5、制造肾上腺类固醇激素。
6、增进伤口愈合及增加对受伤及感染等压力的感受力。
7、在受感染、发热时,此维生素之损失亦随之增加,故其对刺激之反应扮演重要角色。
8、解毒作用;
9、改善心肌功能,减低毛细血管脆性,增加机体抵抗力;
10、对抗游离基,有助于防癌,降低胆固醇,防止坏血病。【2】

现在我们做生物化学实验的时候,主要都是两人一组搭配合作,当中就涉及到怎样分
工、怎样合作,所以两人要默契配合,这样有利于实验顺利进行,也可以提高效率。此次实
验我们就是采取分工合作的,就像在做滴定操作的时候,就要一人控制活塞,另一人振荡锥
形瓶观察颜色的变化,所以好的分工合作不仅可以保证实验顺利进行,同时也能保证实验的
质量;此次实验还有比较多的主要事项,实验过程当中要牢记这些注意事项,以保证结果的
准确性。

七、参考文献
【1】
【2】