凝血酶敏感蛋白—1及其受体CD36在支气管肺发育不良患儿中的表
达及临床意义
目的：探讨凝血酶敏感蛋白-1（TSP-1）及其受体CD36在支气管肺发育不良（BPD）患儿血清、支气管肺泡灌洗液中的表达及临床意义。
方法：采用ELISA 法检测45例BPD患儿与32例非BPD新生儿血清、支气管肺泡灌洗液的TSP-1及CD36表达水平并进行比较，同时对BPD患儿的TSP-1及CD36表达进行相关性分析。
结果：BPD患儿血清、支气管肺泡灌洗液的TSP-1及CD36水平均高于正常儿童（P＜0.05）；BPD患儿血清、支气管肺泡灌洗液的TSP-1与CD36表达均呈正相关性关系（P＜0.05）。
结论：TSP-1及其受体CD36可能参与了新生儿BPD的发病过程并起协同致病作用，具体机制有待进一步研究。
[Abstract] Objective：To investigate the expression and clinical significance of thrombospodin-1 （TSP-1）and its receptor CD36 in bronchopulmonary dysplasia （BPD）children serum and bronchoalveolar lavage fluid.Method：The expression of TSP-1 and CD36 in serum and bronchoalveolar lavage fluid of BPD children（n=45）and non-BPD neonatus（n=32）were detected by ELISA.Correlations of TSP-1 and CD36 levels and the comparisons between groups were analyzed respectively.Result：The expression of TSP-1 and CD36 in serum and bronchoalveolar lavage fluid of BPD children were significantly higher than those of non-BPD neonates respectively （P＜0.05）.There was a positive correlation relationship between the expression of TSP-1 and CD36 in serum and bronchoalveolar lavage fluid（P＜0.05）.Conclusion：TSP-1 and CD36 may play a role in the pathogenesis of neonatus BPD and act cooperatively through an unexplored mechanism，the specific mechanism needs further study.
[Key words] Thrombospodin-1；CD36；Bronchopulmonary dysplasia；ELISA
支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）常见于因急性呼吸窘迫而进行机械通气和氧疗的早产儿，其病理特征为严重的肺泡和肺血管发育不良，但病因及发病机制至今仍未完全清楚。
新的组胚学证据显示肺血管在胚胎期和产后均能对肺泡的分化、生长和成熟起着积极的促进作用，提示了血管新生受阻导致BDP发生的可能性。
众多学者在求证该假说过程中有过不少发现，如脐血的血管内皮细胞生长因子和促血管生成素-1水平偏低的早产儿易罹患BPD 等，但目前相关研究大多集中在促血管新生因子方面。
考虑到血管新生是受多种血管生成因子和抑制因子共同调控的复杂过程，笔者推测某些血管新生抑制因子如凝血酶敏感蛋白-1及其受体CD36有可能因其抗血管新生作用而介入了BPD 的发病过程。
本研究拟通过检测BPD患儿血清、支气管肺泡灌洗液中的TSP-1和CD36表达水平并分析其特点，初步探讨TSP-1和CD36在BPD中的临床意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料
参照2001年美国国家儿童保健及人类发展研究院（NICHD）和心脏、肺及血液研究院（NHLBI）及罕见病委员会共同研讨会议所制定的BPD诊断和分度标准（BPD是指任何氧依赖超过28 d的新生儿，如胎龄0.05），具有可比性。
1.2 检测方法
1.2.1 血清TSP-1、CD36检测抽取各组新生儿静脉血液后离心处理10 min，吸取上清后采用ELISA法检测血清TSP-1、CD36的表达水平。
1.2.2 支气管肺泡灌洗液TSP-1、CD36检测采用非纤支镜对BPD患儿及对照组新生儿行支气管肺泡灌洗法（BAL）处理，镇静后首先经气管导管滴入37 ℃无菌生理盐水溶液，每次剂量0.5 ml/kg，然后使用复苏器加压给氧2～3次，翻身、拍背后将吸引管插入气管插管内直至遇到阻力后稍向上提，吸引负压<6 kPa，边吸引边退出气管插管，须在30 s内完成操作，双侧各操作3次。
将肺泡灌洗液回收后离心处理10 min，吸取上清后采用ELISA法检测TSP-1、CD36表达水平。
1.3 统计学处理
采用SPSS 19.0软件进行统计分析。
计量资料用均数±标准差（x±s）表示；组间比较均采用单因素方差分析（方差齐性：S-N-K；方差不齐：Tamhane）；相关分析采用直线相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组新生儿TSP-1及CD36表达情况比较
试验组患儿血清TSP-1及CD36水平均高于对照组新生儿（P＜0.05），试验组支气管肺泡灌洗液TSP-1及CD36水平均高于对照组新生儿（P＜0.05），见表1、图1、图2。
2.2 TSP-1及CD36表达的相关性分析
直线相关分析结果显示血清、支气管肺泡灌洗液中的TSP-1与CD36表达均呈正相关（r=0.9013、0.8785，均P＜0.05）。
3 讨论
BPD的病理改变特征是严重的肺泡和肺血管发育不良，传统观念认为肺部血管发育消极地跟随于气道发育之后，近期越来越多的证据显示微血管发育和肺泡化是两个互相依赖的过程，肺部血管网不但在胚胎期对肺泡的生长起着积极的促进作用，更能在产后维持肺泡形态结构的稳定性。
因此有学者推断在肺部发育的关键时期如果出现血管新生受阻，将严重影响肺泡分化并导致肺部发育不良，
从而导致BDP的发生[1]。
这一假说已在某些动物及临床实验中得到间接的证据，比如：选择性血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）受体抑制剂会阻抑幼鼠的肺血管生长及肺泡分化成熟[2]；死于BPD的婴儿肺组织中发现肺泡结构简单化及微血管结构异常均与VEGF表达减少有关[3]，早产儿脐带血的促血管生成素-1低水平和内皮他丁高水平均对随后发生的BPD有预测价值[4]。
但这些研究大多仅集中在促血管新生因子如VEGF和Ang-1信号通路上，忽视了血管新生抑制因子在BPD中的作用。
事实上，血管新生抑制因子通过抑制血管内皮细胞增殖迁移、诱导血管内皮细胞凋亡、介导血管周围基质重塑及调节新生血管空间构象形成等途径参与到多个生理和病理状态下的血管新生过程，是血管新生不可或缺的调节因子，其中最具代表性的是凝血酶敏感蛋白家族中的TSP-1及其受体CD36。
本研究发现，BPD患儿无论是血清或支气管肺泡灌洗液中的TSP-1及CD36表达水平均显著高于非BPD新生儿，提示TSP-1及其受体CD36参与了BPD的发病过程，相关性分析进一步显示BPD患儿血清或支气管肺泡灌洗液中的TSP-1与CD36表达均呈明显正相关，提示TSP-1与CD36在BPD发病过程中可能起着协同致病的作用。
TSP-1与内皮细胞上的CD36受体结合后可发挥直接抑制内皮细胞的增殖和迁移的作用[5-6]，也可以通过激活p53fyn、caspase-3和p38MAPK 等途径来诱导血管内皮细胞凋亡而抑制血管新生[7]，TSP-1尚可以通过抑制血管生长因子与受体结合、阻止基质金属蛋白酶酶原活化、阻断基质金属蛋白酶和纤溶酶降解细胞外基质等其他机制抑制血管新生[8-11]。
TSP-1与CD36的血管新生抑制作用可能是其参与BPD发病的机制之一，因血管新生受阻将严重影响肺泡分化并导致肺部发育不良。
但本研究样本量较少，研究的内容也仅停留在现象观察和简单对照层面，对于TSP-1及CD36在BPD中的具体作用机制尚需进一步研究。
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