控制菌检查方法验证操作规程

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文件类别：技术标准 1/25

文件名称 微生物限度检查法(二部)检验标准操作规文件编号：09T-I636-01

起草人 审核人 批准人

日期： 日期： 日期：

颁发部门：质量管理部 生效日期：

分发部门：质量控制科

1. 目的：建立微生物限度检查法(二部)检验标准操作规程，并按规程进行检验，保

证检验操作规范化。

2. 依据：

2.1. 《中华人民共和国药典》2010年版二部。

3. 范围：适用于所有用微生物限度检查法(二部)测定的供试品。

4. 责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。

5. 正文：

5.1. 简述：

5.1.1. 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

5.1.2. 微生物限度检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

5.1.3. 供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。

5.1.4. 除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃。

5.1.5. 检验结果告以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。

5.2. 检验量。

5.2.1. 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml 或 cm2）。

. 5.2.2. 除另有规定外，一般供试品的检验量为10 g或10ml；膜剂为100cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml用于阳性对照试验）。

控制菌检查培养基适用性检查方案

一、研究背景和目的：

菌检查是指通过检测和培养方法，对样品中的细菌进行分离鉴定和数量测定的过程。菌检查培养基是进行菌检查的重要工具，其适用性直接影响到检测结果的准确性和可靠性。因此，对菌检查培养基的适用性进行检查和验证，对于确保菌检查结果的准确性和可靠性具有重要意义。

本检查方案旨在对菌检查培养基的适用性进行系统检查，建立合理、可行的检查流程，以确保培养基的适用性符合相关标准和要求。

二、检查方法和步骤：

1.收集样品：

2.培养基准备：

根据不同菌种和检测要求，选取合适的培养基进行准备。培养基的准备需要按照相应的标准操作程序进行，以确保培养基的质量和规范性。

3.菌液接种：

将收集的菌种，按照规定的菌液接种方法，接种于相应的培养基上。

4.培养条件控制：

控制培养基的温度、湿度等条件，以及培养时间，以确保菌种在培养基上可以适应和生长。

5.菌落计数和观察：

在培养时间结束后，观察培养基上的菌落形成情况，并进行菌落计数。 6.鉴定和比对：

选择代表性的菌落进行鉴定和比对，以确认其和已知菌种的相似性和差异性。

7.结果评估：

对所得的结果进行评估和统计分析，比对实验结果与对培养基适用性的要求是否一致。

8.结论和建议：

根据实验结果，得出结论并提出相应的建议，包括是否适用、适用范围、注意事项等。

三、影响因素和处理措施：

1.培养基成分：

培养基中的成分可能对菌种的生长和繁殖产生影响，因此需要确保培养基中的成分符合菌种的需求和标准要求。

2.培养条件控制：

地域、温度、湿度、pH等环境因素都会对菌种的生长和繁殖产生影响，因此在进行实验时需要控制这些因素的影响，以确保实验的可靠性和可重复性。

3.常见菌种筛选：

针对不同食品、水等样品中的常见菌种，通过前期调查和研究，筛选出适用于相应样品的菌种进行实验。

4.对照组设定： 在实验中设置对照组，以确保菌检查培养基的适用性与已知的标准相一致。

目 的 建立微生物限度检查法标准操作规程，规范操作，保证结果的准确性。

范 围 成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。

责 任 微生物限度检验人员

内 容 本检验操作规程依据中国药典2015年版四部《通则1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》和《通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法》进行检查。

微生物计数法

一、计数方法

1、微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

2、计数方法 本法包括平皿法、薄膜过滤法。

3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。

4、菌种及菌液的制备

试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0袋），并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验。

菌液制备 按规定培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3-5ml含%（ml/ml）聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含%（ml/ml）聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。 xxxxxxx中药饮片厂

微生物限度检查法标准操作规程

编号 ZL·SOP·05·062-01 页 数 共 9 页

制定人 制定日期 年 月 日 修订日期 年 月 日

.实用文档.

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2021版微生物限度检验操作规程

目的 建立微生物限度检查操作规程，标准操作，保证结果的准确性。

范围 成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。

内容概述：本检验操作规程依据中国药典2021年版四部?通那么1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法?和?通那么1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法?进行检查。

微生物计数法

一、计数方法

1．微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

2、计数方法 本法包括平皿法、薄膜过滤法。

3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。

4、菌种及菌液的制备

4.1试验用菌株的传代次数不得超过5代〔从菌种保藏中心获得的枯燥菌种为第0袋〕，并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验见表1。

4.2菌液制备 按表1规定培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物参加3-5ml含0.05%〔ml/ml〕聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%〔ml/ml〕聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。菌液制备后假设在室温下放置，应在2小时内使用；假设保存在2-8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。

表1 试验菌液的制备和使用

.实用文档.

. 4.3阴性对照 为确认试验条件是否符合要求，应进行对照试验，阴性对照试验应无菌生长。