MicroRNA Profile of Marek’s Disease Virus-Transformed T-Cell Line

中国兽医科学 2021，51 (05): 601-607 Chinese Veterinary Science网络首发时间：2021-03-10

D01:10.16656/iissal673-46962021.0090 中图分类号:S852.611:R512.91 文献标志码:A 文章编号：1673-4696(2021)05-0601-07

稳定表达马红球菌VapA蛋白细胞系的建立及其对

巨噬细胞自噬的影响

冯婷婷'郝秀静>，2,徐兆坤i李敏,罗海霞

(1.宁夏大学生命科学学院，宁夏银川750021;2.宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，宁夏银川750021)

摘要：通过构建稳定表达VapA蛋白的J774A.1巨噬细胞系，探究马红球菌VapA蛋白对巨噬细胞自噬 的影响。构建vapA基因的重组慢病毒栽体pCDH-CMV-MCS_EF卜Puro_vapA,将其转染J774A.1细胞，经

过嘌呤霉素筛选重组细胞，利用RT-PCR、Western-blot和免疫荧光鉴定重组细胞系中VapA蛋白的表达；利

用RT-PCR检测自噬相关基因LC3- W、p62、Becfel、Atg5及Atg7的表达情况，明确VapA蛋白对巨噬细胞

自噬的影响。结果显示，本研究成功构建了稳定表达VapA蛋白的J774A.1巨噬细胞系；与对照组相比，Va­pA 蛋白稳转细胞系中 自噬相关基因 LC3-"、Sec//nl、/Ug5 及 Atg7 的 mRNA 表达量显著降低，p62 无显著

差异。上述结果表明，本研究通过VapA蛋白的体外细胞模型发现,VapA在转录水平抑制巨噬细胞自噬，为 VapA蛋白在巨噬细胞内的功能研究及马红球菌的致病机制研究提供了理论基础。关键词：马红球菌；VapA蛋白；稳转细胞株；巨噬细胞；自噬

Establishment of macrophage cell line stably expressing

CytometryPartB(ClinicalCytometry)82B:54–58(2012)

CryopreservationModulatestheDetectionof

RegulatoryTCellMarkers

SebastianSattui,1CarolinadelaFlor,1CesarSanchez,2DorothyLewis,3

GiovanniLopez,2EmilianaRizo-Patro´n,2A.ClintonWhite,Jr.,4

andMartinMontes1,2,4*

1FacultaddeMedicinaAlbertoHurtado,UniversidadPeruanaCayetanoHeredia,Lima,Peru

2InstitutodeMedicinaTropical‘‘AlexandervonHumboldt,’’UniversidadPeruanaCayetanoHeredia,Lima,Peru

3UniversityofTexasHoustonHealthScienceCenter,Houston,Texas

4DepartmentofInternalMedicine,DivisionofInfectiousDiseases,UniversityofTexasMedicalBranchinGalveston,Texas

Background:RegulatoryTcells(Tregs)modulatethehostresponseininfectiousdiseasesandarekeymedia-

torsofperipheraltolerance.Cryopreservationofperipheralbloodmononuclearcells(PBMCs)iscommonlyused

inimmunologicalfieldstudieswhereaccesstocomplexlaboratorytestsisnotfeasible.Ourobjectiveistoassess

２０４　《求医问药》下半月刊ＳｅｅｋＭｅｄｉｃａｌＡｎｄＡｓｋＴｈｅＭｅｄｉｃｉｎｅ　２０１２年第１０卷　第３期　

ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ与肿瘤形成和转移的关系　

李鸿雁王颖郭华　

（１．天津医科大学附属肿瘤医院中心实验室３０００６０；　２．天津市基础医学研究中心３０００６０；　

３．天津市北辰医院检验科天津３０００６０）　

【摘要】ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ（ｍｉＲＮＡｓ）是调节肿瘤基因表达的一个新兴热点。ｍｉＲＮＡｓ参与细胞中基因表达程序的调节，与肿瘤的形成和转移都有着密　

切的关系。其中重点介绍了ｍｉＲＮＡｓ－￣肿瘤干细胞之间的关系，以及ｍｉＲＮＡｓ－￣ＥＭＴ机制的联系，包括ｍｉＲＮＡｓ对细胞增殖周期，凋亡和分化的调控，以及对肿瘤　

细胞侵袭和转移的影响。每一个ｍ１ＲＮＡｓ一般都有多个靶位点，ｍｉＲＮＡｓ￣何系统地调节多个靶位点来影响肿瘤的形成和转移，尚待进一步地研究。近年来　

快速增长的研究报道，说明ｍｉＲＮＡｓ可能作为肿瘤治疗的新靶标。　

【关键词】ｍｉＲＮＡｓ肿瘤基因调节　

【中图分类号】Ｒ７３—３７　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１６７２—２５２３（２０１２）０３—０２０４—０２　

１　ｍｉＲＮＡ的发现和生物起源　

ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ（ｍｉＲＮＡｓ）分子的发现可以追朔到１９９３年，ｍＬｅｅ－￣人首　

次在线虫中报道了第一个ｍ　ＮＡ并命名为ｌｉｎ－４。ｌｉｎ－４并不编码蛋白，但　

可以通过翻译抑制水平调控ｕｎ—ｌ４蛋白的表达而调控线虫的幼虫发育。最　

初的猜想￣ｌｉｎ－４通过和ｌｉＩ卜ｌ钙｝因ｍＲＮＡ的３　ＬＵＴＲ区有部分的序列互　

补关系，这种互补关系造成了ｌｉｎ－１４的翻译抑制ｌｌ１。直到２０００年第二个　

ｍｉＲＮＡｌｅｔ－７被发现，有趣的是，ｌｅｔ－７和ｕｎ一４都可以调控线虫的幼虫发育。　

随后ｍｉＲＮＡ被发现在包括从线虫到果蝇以及哺乳动物等多种物种中存　

在，并且越来越多的研究表明叫ＲＮＡ在众多生物通路中发挥至关重要的　

作用。　

[收稿日期]2022-11-22摇[修回日期]2023-05-16[基金项目]国家自然科学青年科学基金项目(81803938)[作者单位]安徽中医药大学第一附属医院1.耳鼻喉科,2.临床实验中心,安徽合肥230031[作者简介]邱筱婷(1997-),女,硕士研究生.[通信作者]霍星星,主管检验技师.E鄄mail:hxx0520@;朱摇玲,硕士研究生导师,副主任医师.E鄄mail:12168788@[文章编号]1000鄄2200(2023)06鄄0711鄄06·基础医学·原发性干燥综合征小鼠唾液腺组织及唾液的转录组和蛋白质组分析邱筱婷1,巩红校1,朱摇玲1,霍星星2[摘要]目的:通过对实验性干燥综合征(ESS)小鼠的唾液腺组织和唾液进行转录组学和蛋白质组学分析,探讨原发性干燥综合征(pSS)的发生机制。方法:建立ESS模型,留取唾液腺组织和唾液,分别通过高通量转录组测序和基于LC鄄MS/MS的蛋白质组学分析,了解唾液腺组织和唾液中相关mRNA和蛋白表达,通路富集分析用于识别异常的调控路径,并进一步进行RNA和蛋白质关联分析。结果:通过唾液腺病理检查与唾液量测定成功验证ESS模型,并鉴定出3221个差异表达基因和253个差异表达蛋白。通过对转录组学和蛋白质组学数据的整合分析,发现61个蛋白质重叠。对异常调控的基因和蛋白的富集通路分析显示,与肾素-血管紧张素系统(RAS)、溶酶体和细胞凋亡的信号通路显著相关,其中AGT、Fn1、Klk1b26、Klk1、Klk1b5、Klk1b3在转录和蛋白水平上具有一致的调控趋势,可能是pSS的潜在诊断生物标志物。结论:pSS致病机制可能与RAS、溶酶体和细胞凋亡信号通路相关,AGT、Fn1、K1ks可能是pSS发病过程的关键分子。[关键词]原发性干燥综合征;转录组;蛋白组;唾液腺;小鼠[中图法分类号]R593.2摇摇摇[文献标志码]A摇摇摇DOI:10.13898/ki.issn.1000鄄2200.2023.06.002AnalysisoftranscriptomeandproteomeofsalivaryglandtissueandsalivainprimarySjogren忆ssyndromemiceQIUXiao鄄ting1,GONGHong鄄xiao1,ZHULing1,HUOXing鄄xing2(1.DepartmentofOtolaryngology,2.ClinicalExperimentalCenter,TheFirstAffiliatedHospitalofAnhuiUniversityofChineseMedicine,HefeiAnhui230031,China)[Abstract]Objective:ToanalyzethetranscriptomeandproteomeofsalivaryglandtissueandsalivainexperimentalSj觟ogren忆ssyndrome(ESS)miceforfurtherexploringthepathogenesisofprimarySjogren忆ssyndrome(pSS).Methods:TheESSmicemodelwasestablished,thesalivaryglandtissueandsalivawereharvested,andtherelevantmRNAandproteinexpressionsinsalivaryglandtissueandsalivaweredetectedusinghigh鄄throughputtranscriptomesequencingandproteomicanalysisbasedonLC鄄MS/MS,respectively.Thepathwayenrichmentanalysiswasusedtoidentifytheabnormalregulatorypathways,andthefurtherassociationanalysisofRNAandproteinwasconducted.Results:TheESSmodelwassuccessfullyverifiedbypathologicalexaminationofsalivaryglandsandsalivavolumemeasurement,and3221differentiallyexpressedgenesand253differentiallyexpressedproteinswereidentified.Theresultsofintegratedanalysisoftranscriptomicandproteomicdatashowedthat61proteinsoverlapped.Theresultsoftheenrichmentpathwaysofabnormallyregulatedgenesandproteinsanalysisshowedthattherenin鄄angiotensinsystem(RAS)andlysosomeweresignificantlyrelatedtotheapoptosissignalingpathways.ThetranscriptionandproteinlevelsofAGT,Fn1,Klk1b26,Klk1,Klk1b5andKlk1b3were摇摇摇consistentregulatorytrends,whichmightbeapotentialdiagnosticbiomarkerofpSS.Conclusions:ThepathogenesisofpSSmayberelatedtotheRAS,lysosomeandapoptosissignalingpathway,andtheAGT,Fn1andK1ksmaybethekeymoleculesofthepathogenesisofpSS.[Keywords]primarySjogren忆ssyndrome;transcriptomics;摇摇摇摇摇摇proteomics;salivarygland;拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾mice[27]摇ALWHAIBIA,VERMAA,ARTHAMS,etal.NodalpathwayactivationduetoAkt1suppressionisamolecularswitchforprostatecancercellepithelial鄄to鄄mesenchymaltransitionandmetastasis[J].BiochemPharmacol,2019,168:1.[28]摇ZHANGH,PANY,ZHENGL,etal.FOXO1inhibitsRunx2transcriptionalactivityandprostatecancercellmigrationandinvasion[J].CancerRes,2011,71(9):3257.[29]摇JAZUREK鄄CIESIOLKAM,JANIKIEWICZJ,DOBRZYNP,etal.OleicacidincreasesthetranscriptionalactivityofFoxO1bypromotingitsnucleartranslocationand茁鄄cateninbindinginpancreatic茁鄄cells[J].BiochimBiophysActaMolBasisDis,2019,1865(10):2753.(本文编辑摇刘梦楠)117蚌埠医学院学报2023年6月第48卷第6期