溶血素制备

实验小鼠血清溶血素含量测定一、血清溶血素（抗体）分光光度检测法【实验原理】抗原（绵羊红细胞，即SRBC）进入机体，刺激机体产生特异性抗体（溶血素，即抗SRBC抗体）；抗原抗体在体内外结合形成抗原抗体复合物，暴露出补体的C1q结合点，激活补体，导致绵羊红细胞溶解。

通过检查机体产生抗体的量，反映机体的免疫功能状态。

【实验目的】掌握血清抗体（溶血素）含量的测定方法。

【试剂与器材】1．小鼠，绵羊红细胞，补体；2．都氏试剂或蒸馏水；3．试管，吸管，钳子，镊子，微量加样器，水浴箱，分光光度计（540nm）。

【操作方法】1．把SRBC用生理盐水洗3次（1000～2000转/分，5分钟），弃上清，3﹕5（V/V）用生理盐水稀释SRBC浓度约为20亿个/ml。

2．实验前4天，每鼠腹腔注射SRBC0.2ml；3．免疫4天后取血，分离血清；4．用生理盐水适当稀释血清（200倍左右）；5．取1ml稀释后的血清加入反应管，再加0.5ml10%SRBC，置冰浴中，每管加入1ml补体；6．将反应管移至37℃水浴中，10分钟后再把其移至冰浴中；7．2000转/分离心10分钟，再取上清1ml，加入3ml都氏试剂（或蒸馏水）混匀，10分钟后用分光光度计（540mn）测定吸光度；8．另取一试管作测定实验用的SRBC半数溶血时的吸光度值。

取同实验用的10%SRBC0.25ml，加4ml都氏试剂，摇匀，10分钟后用分光光度计测定吸光度。

【结果】按下式计算样品的半数溶血值HC50：样品HC50=样品的吸光度值×稀释倍数SRBC半数溶血时的吸光度值【注意事项】在操作过程中，严格遵守冰浴时间，以控制反应时间的一致性。

【作业】计算出样品的溶血素值。

附：二、微量溶血检测法（一）实验原理同血清溶血素分光光度检测法。

（二）实验材料1．小鼠、绵羊红细胞、补体（1：20）。

2．PBS（含Ca2+、Mg2+）。

3.试管、吸管、96孔板、微量加样器、水浴箱、酶标仪等。

金黄色葡萄球菌β-溶血素的探究论文金黄色葡萄球菌β-溶血素的探究论文金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，金葡菌)是一种自然界中广泛存在的革兰阳性菌，可引起人和动物的局部化脓性感染、肺炎、伪膜性肠炎、心包炎以及败血症、脓毒败血症等，同时也是造成人类食物中毒的常见致病菌之一。

金葡菌主要通过产生多种致病因子而致病，这些致病因子包括溶血素、杀白细胞素、肠毒素、凝固酶、耐热核酸酶等。

溶血素(hemolysins)，又称细胞溶素(cytolysin)，是由细菌分泌的能使细胞溶解的毒素，是金葡菌产生的一种重要毒力因子，包括α、β、γ、δ4种。

其中α、γ、δ又称作打孔毒素(pore-formingtoxin)，即能跨细胞膜形成孔道，允许小分子和离子通过，从而使靶细胞代谢紊乱，最终裂解细胞。

而β-溶血素作用机制与其他3种均不同，因此被称之为非打孔毒素。

β-溶血素(β-hemolysins，Hlb)，全长993bp，编码330个氨基酸，1～34位氨基酸(aa)为其信号肽，相对分子质量为35×103。

目前国内外对Hlb的研究很少。

已有研究表明，Hlb是一种鞘磷脂酶C，能特异性地水解鞘磷脂，Mg2+的存在能增强其生物活性。

且Hlb在体外具有独特的溶血活性:热冷效应(Hot-cold)溶血特性，即Hlb在37℃作用于红细胞，红细胞不易裂解，随后置于4℃红细胞则能够迅速裂解。

晶体结构表明，Hlb的第149位和287位的组氨酸(H)是其发挥生物学活性的关键性位点，将149或287位的组氨酸(H)突变为天冬酰胺(N)时，Hlb的鞘磷脂酶活性降低。

此外，Medora等还发现Hlb具有结合核酸的活性。

本研究以金葡菌NCTC-8325为模板扩增得到Hlb的全长序列，并构建了野生型Hlb蛋白的重组表达载体，利用点突变技术构建了突变体HlbH-149-N蛋白的重组表达载体，获得了Hlb及HlbH-149-N蛋白，验证其溶血活性，制备了Hlb的特异性抗体，并检测抗体的中和活性。

抗链球菌溶血素o试验名词解释抗链球菌溶血素O试验相关名词解释•链球菌：一类革兰氏阳性菌，常见于皮肤和黏膜上，引起多种感染疾病，如咽炎、肺炎、脑膜炎等。

•溶血素O：链球菌所产生的一种溶血素，能破坏红细胞，并引发溶血反应。

•抗链球菌溶血素O试验：一种实验方法，用于检测人体血清中是否存在对链球菌溶血素O的免疫反应。

试验过程•采血：从被检测者的静脉采集一定量的血液样本。

•分离血清：将血液离心分离出血清，用于后续实验操作。

•制备试剂：制备链球菌产生的溶血素O，用于抗原溶液的制备。

•配制试剂：将血清稀释为一系列不同浓度，用于后续检测。

•孵育反应：将稀释后的血清与溶血素O抗原混合，放置孵育一段时间。

•观察变化：观察反应管中的溶血现象，根据程度判断血清中对溶血素O的免疫反应强弱。

•数据分析：根据观察结果，绘制曲线图或计算血清免疫强度指数，评估被检测者对链球菌溶血素O的免疫状况。

检测结果解释•阳性结果：反应管出现不同程度的溶血现象，说明被检测者对链球菌溶血素O产生了免疫反应，具有免疫力。

•阴性结果：反应管中无明显溶血现象，说明被检测者对链球菌溶血素O没有明显的免疫反应，缺乏免疫力。

应用领域•临床诊断：用于判断某些感染病的诊断，如链球菌感染、风湿热等。

•疫苗研发：通过检测群体对链球菌溶血素O的免疫水平，评估疫苗的效果和免疫覆盖情况。

•流行病学调查：用于监测链球菌感染的流行情况和免疫水平，指导公共卫生干预措施的制定。

以上是针对“抗链球菌溶血素O试验”的相关名词解释和应用说明。

该试验在医学领域具有重要的应用价值，能够帮助医生判断感染病的诊断和评估疫苗效果，为公共卫生工作提供科学依据。

产单核细胞李斯特菌溶血素O单克隆抗体的制备与鉴定孔德壮;张衍海;龚振华;李葳;郑增忍;李玉清;张彦明【摘要】[目的]制备抗产单核细胞李斯特菌溶血素O(LLO)的特异性单克隆抗体.[方法]用LLO重折叠的原核表达产物LLO-his免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞,与骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合,经间接ELISA法筛选、多克隆及单克隆分离出阳性细胞株后,再用体内诱生腹水法大量制备单克隆抗体.用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,间接ELISA法测定其效价及相对亲和常数;用HBT单克隆抗体亚类鉴定试剂盒鉴定抗体亚型;常规方法制备染色体,观察细胞株染色体数目及标志染色体;Western blot检测抗体的特异性.[结果]获得了2株稳定分泌抗LLO单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为3F5-G3和2B4-C8,其腹水效价分别为1∶(1×105)和1∶(1×107);染色体分别为97±5和93±8条,且观察到标志染色体;相对亲和常数分别为0.49和0.26μg/mL;抗体亚类均为IgG1,轻链均为κ链.特异性鉴定结果表明,2种单克隆抗体均可与LLO蛋白发生特异性反应,而与载体蛋白不发生反应.[结论]获得了抗LLO的特异性单克隆抗体.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(038)007【总页数】5页(P39-43)【关键词】产单核细胞李斯特菌;李斯特菌溶血素O;单克隆抗体【作者】孔德壮;张衍海;龚振华;李葳;郑增忍;李玉清;张彦明【作者单位】西北农林科技大学动物医学院,陕西,杨凌,712100;中国动物卫生与流行病学中心,山东,青岛,266032;中国动物卫生与流行病学中心,山东,青岛,266032;中国动物卫生与流行病学中心,山东,青岛,266032;中国动物卫生与流行病学中心,山东,青岛,266032;中国动物卫生与流行病学中心,山东,青岛,266032;西北农林科技大学动物医学院,陕西,杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】S855.12产单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes，LM)是李斯特菌属的代表种，能引起人和多种动物的李斯特菌病。

第1篇一、实验目的1. 了解补体溶血实验的基本原理和方法。

2. 掌握血清补体溶血活性的测定方法。

3. 分析血清补体溶血活性与疾病的关系。

二、实验原理补体系统是机体免疫应答中的一种重要防御机制，由一组糖蛋白组成。

在抗体介导的免疫反应中，补体系统被激活，发挥溶解细胞、清除免疫复合物等作用。

补体溶血实验是检测血清中补体活性的一种方法，通过测定血清对红细胞（如绵羊红细胞）的溶血能力来评估补体系统的功能。

实验原理如下：1. 当血清中存在与红细胞表面抗原相对应的抗体时，抗体与红细胞表面抗原结合，形成抗原抗体复合物。

2. 补体系统被激活，产生溶血效应，导致红细胞破裂、溶解。

3. 通过测定溶血程度，可以评估血清中补体的活性。

三、实验材料1. 绵羊红细胞（SRBC）2. 待检血清3. 磷酸缓冲盐水（PBS）4. 2%葡萄糖溶液5. 吸管、试管、离心机、显微镜等四、实验方法1. 绵羊红细胞悬液的制备：将绵羊红细胞用生理盐水洗涤3次，配制成2%的红细胞悬液。

2. 待检血清的处理：将待检血清用生理盐水按1:10的比例稀释。

3. 实验分组：将实验分为对照组和实验组，对照组加入2%葡萄糖溶液，实验组加入待检血清。

4. 混合：将2%红细胞悬液与血清混合，充分振荡，室温下放置30分钟。

5. 离心：将混合液以1000r/min离心5分钟，弃去上清液。

6. 观察溶血现象：用显微镜观察红细胞形态，记录溶血程度。

7. 计算溶血率：溶血率=实验组溶血程度-对照组溶血程度。

五、实验结果与分析1. 对照组溶血程度较低，实验组溶血程度较高，说明待检血清具有补体溶血活性。

2. 通过计算溶血率，可以评估待检血清中补体的活性。

六、讨论1. 补体溶血实验是检测血清中补体活性的常用方法，具有操作简便、结果直观等优点。

2. 补体溶血活性与多种疾病的发生、发展密切相关，如自身免疫性疾病、感染性疾病等。

3. 本实验结果表明，待检血清具有补体溶血活性，可能与某种疾病相关。

猪链球菌2型溶血素融合蛋白的制备及免疫活性测定王海丽;徐公义;葛长城;赵德明【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)006【摘要】[目的]研究四川资阳脑膜炎病例猪链球菌2型分离株ZYH33溶血素(suliysin,sly)基因的克隆表达及融合蛋白生物活性分析.[方法]从sly中获取第230～593氨基酸残基区域的基因片段,克隆至pMD18-T载体并鉴定,以重组pMD18-T/sly为模板PCR扩增基因片段,与表达载体pQE-30连接,转化至大肠杆菌TGl,重组子经PCR、酶切、测序鉴定.IPTG诱导重组蛋白表达,Western blot法鉴定融合蛋白的抗原性.[结果]基因片段在大肠杆菌中得到了表达,表达的融合蛋白可被猪链球菌2型菌体ZY05719抗血清识别,具有抗原性.[结论]所克隆、表达的溶血素区域可作为猪链球菌的诊断抗原,为基因工程疫苗的研制奠定了基础.【总页数】3页(P3604-3605,3614)【作者】王海丽;徐公义;葛长城;赵德明【作者单位】中国农业大学动物医学院,北京,100094;聊城职业技术学院,山东聊城,252000;中国农业大学动物医学院,北京,100094;中国农业大学动物医学院,北京,100094;中国农业大学动物医学院,北京,100094【正文语种】中文【中图分类】S852.61【相关文献】1.猪链球菌2型溶血素成熟蛋白的原核表达及其生物学特性与免疫保护性 [J], 倪艳秀;何孔旺;周俊明;汪伟;吕立新;俞正玉;茅爱华;温立斌;张雪寒2.基因工程鼠Muc1-MBP融合蛋白的制备及其免疫活性测定 [J], 方芳;马吉春;高航;赵小霞;周静;宋献美;柳忠辉;台桂香3.重组人MUC1-MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及其免疫活性测定 [J], 台桂香;张吉凤;朱迅4.双点突变对猪链球菌2型溶血素活性的影响 [J], 刘爽;张秀娟;张兴进;宫枫举;潘子豪;马喆;孙学强5.猪链球菌2型Ⅲ型溶血素的研究 [J], 王雅;张安定;李冉;陈焕春;金梅林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。