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Takara_双酶切buffer用表

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Enzyme Acc I BamH I Bgl II Cla I EcoR I EcoR V Hinc II Hind III Kpn ISupplied Buffer 10 ×M 10 ×K 10 ×H 10 ×M 10 ×H 10 ×H 10 ×M 10 ×M 10

Acc I - 0.5 × K 1 ×T 1 ×M 1 ×M 0.5 × K 1 ×M 1 ×M 1 ×BamH I 0.5 × K - 1 ×K 1 ×K 1 ×K 1 ×K 0.5 × K 1 ×K 0.5

Bgl II 1 × T 1 × K - 1 × H 1 × H 1 × H 2 × K 1 × K 1 ×Cla I 1 × M 1 × K 1 × H - 1 × H 1 × H 1 × M 1 × M 1 ×EcoR I 1 × M 1 × K 1 × H 1 × H - 1 × H 1 × M 1 × M 1 ×EcoR V 0.5 × K 1 × K 1 × H 1 × H 1 × H - 2 × T 1 × K 0.5

Hinc II 1 × M 0.5 × K 2 × K 1 × M 1 × M 2 × T - 1 × M 1 ×Hind III 1 × M 1 × K 1 × K 1 × M 1 × M 1 × K 1 × M - 1 ×Kpn I 1 × M 0.5 × K 1 × T 1 × M 1 × M 0.5 × K 1 × M 1 × M -Nco I 1 × M

+BSA 1 × K

+BSA 1 × K

+BSA 1 × K

+BSA 1 × K

+BSA 1 × K

+BSA 1 × M

+BSA 1 × K

+BSA 0.5

+BSNde I 1 × T 1 × K 1 × H 1 × H 1 × H 1 × H 1 × T 1 × K 1 ×Not I 0.5 × K

+BSA 0.5 × K

+BSA 1 × H

+BSA 1 × H

+BSA 1 × H

+BSA 1 × H

+BSA 0.5 × K

+BSA 0.5 × K

+BSA 0.5

+BSPst I 1 × M 1 × K 1 × H 1 × H 1 × H 1 × H 1 × M 1 × M 1 ×Pvu I 0.5 × K 1 × K 1 × K 1 × K 1 × K 1 × K 0.5 × K 1 × K 0.5

Sac I 1 × M 0.5 × K 0.5 × K 1 × M 1 × M 0.5 × K 1 × M 1 × M 1 ×Sal I 1.5 × T 1.5 × T 1 × H 1 × H 1 × H 1 × H 1.5 × K 1.5 × K 1.5

+BSSma I 1 × T

+BSA 0.5 × T

+BSA 1 × T

+BSA 1 × T

+BSA 1 × T

+BSA 0.5 × K

+BSA 1 × T

+BSA 1 × T

+BSA 1 ×+BSSpe I 1 × M 1 × K 1 × H 1 × M 1 × H 1 × H 1 × M 1 × M 1 ×Sph I 0.5 × K 1 × K 1 × H 1 × H 1 × H 1 × H 2 × T 1 × K 0.5

Xba I 1 × M 0.5 × K 2 × T 1 × M 1 × M 2 × T 1 × M 1 × M 1 ×Xho I 1 × M 1 × K 1 × H 1 × H 1 × H 1 × H 1 × M 1 × M 1 ×Note:

1) It is confirmed that 10 units of each enzyme completely digest 1 µg of DNA at 37°C in one

hour in 50 µl reaction mixture.

2) The concentration of Glycerol should be less than 10% to minimize star activity.

3) DNA may not be digested completely, when recognition sequences of two enzymes are

close each other, or when DNA takes high-structure conformation.

Relative activity for each reaction buffer

: supplied, activity measured buffer

: recommended buffer

Restriction enzyme Relative activities (%)

L M H K T+BSA Basal***

Aat II <20 <20 <20 <20 100 120

Acc I 20 100 <20 (<20) 160 80

Acc II (260) 100 <20 20 200 160

Acc III (<20) (<20) 20 (80) (<20) 100

Afa I 60 60 40 60 100 100

Afl II 20 80* <20 <20 140 120

Alu I 100 100 <20 40 200 120

Aor13H I <20 20 <20 80* 80 100

Aor51H I 80 100 <20 20 120 120

Apa I 100 <20 <20 <20 <20 120

ApaL I 100 20 <20 <20 120 120

Ava I (<20) 100 20 40 100 120 Ava II 80 100 <20 20 100 100

Bal I 20 20 <20 <20 40 100

BamH I (<20) <20 40 100 (<20) 80

Ban II (120) (120) 100 80 (100) 100

Bbe I <20 <20 <20 <20 <20 100

Bcn I <20 20 40 60 60 100

Bgl I <20 <20 20 40 <20 100

Bgl II <20 20 100 (100) (60) 100

Bln I <20 20 40 100 20 120

BmeT110 I <20 <20 20 100 <20 140

BmgT120 I <20 <20 100 40 <20 240

Bpu1102 I <20 <20 <20 40 60 100

BspT104 I 100 60 <20 <20 100 120

BspT107 I <20 20 80 100 20 100

Bsp1286 I 100 20 <20 <20 60 100

Bsp1407 I 20 60 20 20 100 100

BssH II 100 100 60 20 140 100

BstP I (<20) (60) 100 (100) (100) 100

BstX I <20 40 100 <20 <20 120

Bst1107 I (<20) 60 100 100 40 100

Cfr10 I (<20) (<20) (<20) 40 (20) 100

Cla I 40 100 120 100 60 100

Cpo I <20 <20 80 100 <20 100

Dra I 100 100 60 100 80 80

Eae I 60 100 <20 <20 120 160

Eam1105 I (<20) (40) 20 40 (40) 100

EcoO65 I (20) (60) 60* 40 40 100

EcoO109 I 100 60 <20 <20 100 160

EcoR I (20) (100) 100 (120) (80) 120

EcoR V (<20) (40) 100 (120) (40) 100

EcoT14 I (<20) (40) 100 120 (60) 100

EcoT22 I <20 20 100 (140) (20) 120 Eco52 I <20 <20 <20 <20 <20 100

Eco81 I <20 100 <20 <20 100 160

Fba I (<20) (<20) (80) 100 (20) 100

Fok I (20) (60) <20 <20 (200) 100

Hae II 80 100 <20 80 140 100

Hae III 60 100 100 60 100 100

Hap II 100 60 <20 <20 100 80

Hha I 80 100 100 120 120 100

Hinc II 20 100 20 40 100 80

Hind III (60) 100 <20 200 (100) 80

Hinf I 80 100 100 160 60 100

Hin1 I 40 80* <20 20 60 160

Hpa I <20 (40) 20 100 (80) 100

Kpn I 100 60 <20 <20 (100) 80

Mbo I 20 40 60 100 40 100

Mbo II 100 60 <20 <20 60 100

Mfl I 100 80 <20 <20 80 100

Mlu I 60 60 100 (100) 60 100

Msp I 80 80 <20 100 100 80

Mun I (200) 100* <20 <20 160 100

Mva I (<20) (40) 80 100 (20) 120

Nae I 100 <20 <20 <20 100 120

Nco I (40) (60) 20 60* (60) 160

Nde I <20 40 100 100 80 100

Nhe I (120) 100 <20 <20 (160) 100

Not I (<20) (<20) 20** <20 (<20) 100

Nru I 0 <20 20 20 <20 100

Nsb I 40 20 <20 60 100 100

PmaC I 100 80 <20 <20 100 100

PshA I 20 40 <20 100 60 160

PshB I (20) (40) 20 40 40 100

Psp1406 I 20 60 <20 <20 100 100

合集下载

bsa1酶切说明书

bsa1酶切说明书

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产品说明书

快速内切酶BsaI

abs60206

产品描述

描述

爱必信的快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。爱必信的快速内切酶具有如下特点：5~15分钟内即可完成酶切；共用一种酶切Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，爱必信生物去磷酸化、连接试剂在配套的Buffer中具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。

识别位点：

5'...G G T C T C (N)1↓...3'

3'...C C A G A G (N)5↑...5'

产品组分：

名称 规格

BsaI 50 μl

10× Cut Buffer 1 ml

10× Cut Color Buffer 1 ml

使用方法

1. DNA 快速酶切流程：

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

质粒 DNA PCR 产物 基因组 DNA

ddH2O 15 μl 16 μl 30 μl

10× Cut Buffer 或 10×

Cut Color Buffer

2 μl

3 μl（a）

5 μl

底物 DNA 2 μl (up to

1 μg) 10 μl (~0.

2 μg) 10 μl (5

μg)

BsaI 1 μl 1 μl 5 μl

Total 20 μl 30 μl 50 μl

a. 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，

10× Cut Buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性，

会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

takara primestar GXL 酶 操作手册

takara primestar GXL 酶 操作手册

Cat. #R050AProduct ManualPrimeSTAR® GXL

DNA PolymeraseFor Research Use

v1108Da2

URL:

PrimeSTAR® GXL DNA PolymeraseCat. #R050A

v1108Da

Table of Contents

I. Description ...................................................................................................................3

II. Components ................................................................................................................3

III. Storage ..........................................................................................................................3

IV. Protocols ........................................................................................................................4

V. Optimization of Parameters ..................................................................................6

各种酶切位点的保护碱基引物设计必看

各种酶切位点的保护碱基引物设计必看

各种酶切位点的保护碱基

酶不同，所需要的酶切位点的保护碱基的数量也不同。一般情况下，在酶切位点以外多出3个碱基即可满足几乎所有限制酶的酶切要求。在资料上查不到的，我们一般都随便加3个碱基做保护。

寡核苷酸近末端位点的酶切

(Cleavage Close to the End of DNA Fragments

(oligonucleotides)

为了解不同内切酶对识别位点以外最少保护碱基数目的要求，NEB采用了一系列含识别序列的短双链寡核苷酸作为酶切底物进行实验。实验结果对于确定双酶切顺序将会有帮助（比如在多接头上切割位点很接近时），或者当切割位点靠近DNA末端时也很有用。在本表中没有列出的酶，则通常需在识别位点两端至少加上6个保护碱基，以确保酶切反应的进行。

实验方法：用γ-[32P]ATP在T4多聚核苷酸激酶的作用下标记0.1A260单位的寡核苷酸。取1 μg已标记了的寡核苷酸与20单位的内切酶，在20°C条件下分别反应2小时和20小时。反应缓冲液含70 mM Tris-HCl (pH , 10 mM MgCl2 , 5 mM DTT及适量的NaCl或KCl（视酶的具体要求而定）。20%的PAGE（7 M尿素）凝胶电泳分析，经放射自显影确定酶切百分率。

本实验采用自连接的寡核苷酸作为对照。若底物有较长的回文结构，切割效率则可能因为出现发夹结构而降低。

寡核苷酸序列 链长

GTCGACC CGGTCGACCG CCGGTCGACCGG 8 10 12

CACATGTG CCACATGTGG CCCACATGTGGG 8 10 12

GCGCGCC AGGCGCGCCT TTGGCGCGCCAA 8 10 12

CCCGGGG CCCCCGGGGG TCCCCCGGGGGA 8 10 12

GGATCCG CGGGATCCCG CGCGGATCCGCG 8 10 12 CAGATCTG GAAGATCTTC GGAAGATCTTCC 8 10 12

takara primestar GXL 酶 操作手册 2

takara primestar GXL 酶 操作手册 2

Cat. #R050AProduct ManualPrimeSTAR® GXL

DNA PolymeraseFor Research Use

v1108Da2

URL:

PrimeSTAR® GXL DNA PolymeraseCat. #R050A

v1108Da

Table of Contents

I. Description ...................................................................................................................3

II. Components ................................................................................................................3

III. Storage ..........................................................................................................................3

IV. Protocols ........................................................................................................................4

V. Optimization of Parameters ..................................................................................6