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⾻髓细胞学检查（仅供参照）

⾻髓细胞学检查

⾻髓细胞学检查应抽取⾻髓少量制成薄⽚。采⽤⾻髓⼩粒丰富、制⽚厚薄均匀的涂⽚，经瑞⽒—姬姆萨混合染⾊后，于显微镜下检查细胞质和量的变化。[试剂]1)瑞⽒染⾊液：瑞⽒染粉18，置洁净⼲操的研钵内，加⽢油3.5ml，研磨⽚刻，

使瑞⽒染粉充分溶解，加甲醇约50ml，继续研磨⽚刻后，收集上层染液；残余部分再加甲醇50ml研磨：再收集上层染液，重复⼏次后，⽤甲醇冲洗研钵，倒⼊同⼀瓶内，最后加甲醇⾄500mi。开始⼏周应经常振摇染⾊液。染⾊液存放的时间越长，染⾊效果也越佳。此外，研磨时染粉内应先加⽢油，、以免染粉在研磨过程中结成块，更易溶解。染粉未经研磨配成的染液不宜⽤作⾻髓⽚染⾊。2)姬姆萨浓缩染液：将姬姆萨染粉3．8g放⼊纯⽢油250ml中，置60℃⽔浴2

⼩时，溶解后⼒⼝60℃预热的甲醇250m1混匀，于室温、棕⾊瓶内保存，配后数天即可使⽤，可长期保存。3)pH6．5磷酸盐缓冲液：磷酸⼆氢钾1．5g，磷酸氢⼆钠1．0g、加蒸馏⽔到

5000ml。最后纠正pH6．5。

4)姬姆萨稀释液：取姬姆萨溶液50m1，加pH6．5磷酸盐缓冲液到500ml，混

匀。此液为姬姆萨应⽤液，可直接作涂⽚复染⽤。作瑞⽒稀释液时，取此液10⼀20mL加蒸馏⽔⾄100ml，混匀即可。[操作]

1．⾻髓取材：

取材部位有胸⾻、棘突、髂⾻前嵴或后嵴等。两岁以内⼩孩最好⽤胫⾻，成⼈常取髂后上棘，此部位穿刺⽅便，病⼈也易接受．穿刺前要求严格

消毒，杜绝细菌感染，除穿刺室紫外线消毒和⽪肤消毒外，还应注意穿

刺包和⼿套消毒时间有否过期。戴⼿套要熟练，避免⼿套接触来消毒物

品。穿刺针进⼊髓腔时常有脱空感，吸取前针筒内应留有1m1左右的空

隙，否则髓液很快进⼊针筒空隙⽽⽆法取出。针筒内若有⽔份也要⽤消

毒纱布擦⼲，以免溶解细胞。吸液量⼀般控制在0．2m1左右。因吸量过

多，易被外周⾎稀释。部分病⼈⼲抽或吸出量太少时，不要将针头⽴即

1.目标

规范染色体室外周血染色体检验试验操作，确保骨髓染色体检验分析工作顺利进行。

2.试验原理

利用不含PHA等多克隆免疫细胞激活剂细胞培养基实现经无菌采集骨髓标本细胞增殖，并经过秋水仙素使细胞分裂停止于中期，低渗处理使有核细胞膨胀后进行滴片固定取得分散染色体，本试验室采取传统G显带技术即经过胰酶消化、Giemsa染色体方法显示染色体带纹，分析染色体结构和数量来判定染色体核型。

3.适用系统

3.1人员：适适用于全部进行骨髓染色体检验分析技术人员；

3.2仪器：染色体核型分析系统；

电子显微镜(OLYMPUS BX51、BX41、CX21)

4.试剂

4.1成品试剂

4.1.1 天津瑞爱金生物科技 骨髓培养基（规格：5mL/瓶）；

4.1.2 衢州巨化试剂 甲醇（规格：500mL/瓶 分析纯）；

4.1.3 杭州化学试剂 冰乙酸（规格：500mL/瓶 分析纯）；

4.1.4 湖州湖试化学试剂 磷酸氢二钠（规格：500g/瓶 分析纯）；

4.1.5 湖州湖试化学试剂 磷酸二氢钾（规格：500g/瓶 分析纯）；

4.1.6 宁波化学试剂 氯化钾 （规格：500g/瓶 分析纯）。

4.2 自配制试剂

参考SOP外周血染色体检验标准操作规程4.2。

4.3 保留条件

骨髓培养基保留于-20℃冷冻环境，甲醇常温保留于避光处，其它成品试剂常温保留；自配制试剂保留条件参考SOP外周血染色体检验标准操作规程4.2。

5.标本要求

5.1 标本类型：无菌穿刺采集骨髓。

5.2 标本采集:骨髓标本使用中心配送真空肝素钠抗凝管（BD企业）和采血针进行无菌采集，采集后立即轻轻颠倒充足混匀，以免凝血。

5.3 标本验收:有溶血、凝血现象、经冷冻、高温环境中放置或接收时距标本采集时间超出4小时标本视为不合格标本。

5.4 标本储存：常温18-28℃。 5.5 标本接收：

细胞室工作手册

进入细胞室之前

洗手，擦干。

如果要给细胞换液或传代，则带一只洁净的烧杯（200或500ml）。

进入细胞室

开门进入缓冲间，并迅速将门关好，换鞋，穿工作服。

进入细胞室，关好门，戴乳胶手套，喷洒70％酒精。

试剂的配制及使用

细胞培养最常用到的试剂包括：基础培养基DMEM、血清、PBS、胰酶溶液、氰链霉素

DMEM：每袋培养基溶于800ml超纯水中，加3.7克NaHCO3，溶解后定容至1L，滤器过滤后储存于4℃冰箱。

PBS： NaCl 8.0g

KH2PO4 0.2g

KCl 0.2g

Na2HPO4 1.15g(无水) 2.8976g（12H2O）

胰酶：称取2.5克胰酶至100mlPBS中，磁力搅拌3小时，用滤纸过滤后，用胰酶滤器过滤10ml每管分装于15ml离心管中，-20℃储存。

试剂的使用：

培养基检验：在使用培养基培养细胞之前，需要确定培养基是否有污染。取一瓶DMEM培养基，开盖取6ml至培养皿内，培养箱内培养24小时后显微镜下观察。无污染时，加入100×的氰链霉素，备用。

血清分装：每管10ml分装至15ml离心管中，储存于-20℃，使用时，取一管提前在4℃化冻。细胞培养需要灭活血清时，用60℃水浴30min。

配制培养基：在50ml离心管中加入36mlDMEM，4ml血清

胰酶：储液浓℃为2.5％，-20℃储存，使用时，取一管提前在4℃化冻。用PBS稀释20倍后使用。

器皿使用：

包括培养皿和离心管的使用，取存放器皿的密封袋至超净台内，紫外照射30min后，开封取出培养皿或离心管，将密封袋开口扎好，放回物品柜。

枪头的使用：枪头盒用报纸包裹后在121℃ 40min灭菌，干燥箱内烘干后，将灭菌枪头放在细胞室物品柜内。使用时，将报纸拆开后立即放入超净台内，紫外照射30min。放在超净台内的枪头及各微量移液器均不得拿出超净台。

细胞换液

将用到的培养基、移液管及盛废液的烧杯放入超净台中紫外照射30分钟

骨髓细胞学检测的标准操作程序(SOP)

实验室名称 项 目 编 号 制定日期

****** 骨髓细胞学检测 ****** ****年**月**日

【目的】

指导骨髓细胞学检测的测定。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。

【检验的适应证】

1.诊断造血系统疾病；

2.协助诊断某些疾病；

3提高某些疾病的诊断率。

【仪器与试剂】

1.仪器：光学显微镜。

2.试剂：瑞氏-姬姆萨复合染色液

Ⅰ液：取瑞氏染粉1g、姬姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯）研磨片刻，吸出上层染液，再加少量甲醇继续研磨，如此连续几次，共用甲醇500ml，收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇3分钟，共5天，再存放一周即可使用。

Ⅱ液：PH6.4-6.8磷酸盐缓冲液

磷酸二氢钾（无水）6.64g

磷酸氢二钠（无水）2.56g

加少量蒸溜水溶解，用磷酸盐调整PH，加水至1000ml.

【操作程序】

1.骨髓取材：由临床医生取材、涂片。

2.髓片编号、登记。

3.染色程序：

[1] 髓片两端用蜡笔画线，置染色架上。

[2] 加Ⅰ液染液3-5滴于涂片上，静止1分钟（天热时间可缩短）。

[3] 然后加Ⅱ液磷酸盐缓冲液3-10滴，使两液混匀，约10-15分钟。

[4] 用水缓缓冲洗髓片，待干镜检。

4.普通光镜低倍镜检查：

[1] 判断髓增生情况：在观察取材、涂片、染色等情况是否满意的基础上，以涂片中有核细胞与成熟红细胞之比来判断骨髓有核细胞的增生程度。

共分五级，判断标准如下：

增生极度活跃：成熟红细胞与有核细胞之比约为1：1，见于白血病、红白血病。

增生明显活跃：成熟红细胞与有核细胞之比约为10：1，见于白血病、增生性贫血。

增生活跃：成熟红细胞与有核细胞之比约为20：1，见于正常骨髓、某些贫血。

增生减低：成熟红细胞与有核细胞之比约为50：1，见于造血功能低下。