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实训二、葡萄糖标准曲线的绘(完)制

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实训二、葡萄糖标准曲线的绘制
一、实训目的
1、了解DNS法测定还原糖的基本原理
2、通过DNS法测定还原糖的含量，建立吸光度与还原堂含量之间的线形关系，
用于后续纤维素酶酶活性的测定
3、通过定量操作，让学生形成准确称量、测定的理念。
二、实训原理
具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试
剂发生显色反应。反应液颜色的强度（吸光度OD值）与还原糖量（此处即为葡
萄糖量）成正比关系。
三、实训方法
1、DNS溶液的配制
称取3，5－二硝基水杨酸3.15g(化学纯)，加水500ml，搅拌5s，水浴至45℃，
然后逐步加入100ml氢氧化钠溶液（称取氢氧化钠20.0g，加水溶解，定容到
100ml），同时不断搅拌，直到溶液清澈透明（注意：在加入过程中，溶液温度不
要超过48℃）。再逐步加入四水酒石酸甲钠91g，苯酚2.50g和无水亚硫酸钠
2.50g。继续45℃水浴加热，同时补加水300ml，不断搅拌，直到加入的物质全
部溶解。停止加热，冷却到室温后，用水定容到1000ml，用烧结玻璃过滤器过
滤。取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存。室温下存放7d后可以使用，有效期
为6个月。
（笔者注：在处理酸、碱和配制DNS试剂时，请尽可能戴上保护眼镜和乳胶手
套，实验应在通风橱或通风良好的房间进行。一旦皮肤或者眼睛接触了上述物质，
应及时用大量的清水冲洗）
2、 0.1％葡萄糖标准液
准确称取100mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏
水溶解后定容至100ml，保存于冰箱中备用。
3、葡萄糖标准曲线的绘制
取9支具塞刻度试管，分别按表1顺序加入各种试剂。
表 1 试剂加入顺序
管号
项目
空白 1
2 3 4 5 6 7 8

含糖量(mg)
葡萄糖（ml）
蒸馏水（ml）
DNS液(ml)

0 0 2.0 3 0.2 0.2 1.8 3 0.4 0.4 1.6 3 0.6 0.6 1.4 3 0.8 0.8 1.2 3 1.0 1.0 1.0 3 1.2 1.2 0.8 3 1.4 1.4 0.6 3 1.6
1.6
0.4
3
将上述各试剂依次混匀后，在沸水浴中加热10min，然后立即用流动冷水冷
却，每个试管加蒸馏水至25ml刻度线，充分混匀后，用空白管溶液调零点，在
UV751GD紫外/可见分光光度计（540nm）处测吸光度。以葡萄糖质量（mg）为
横坐标，吸光度为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线。
四、结果记录与分析处理
1、测定不同葡萄糖含量的OD值，建立以葡萄糖质量（mg）为横坐标，吸光度
为纵坐标的关系式，要求用计算机作图，求出具体的线形关系式，同时相关系数
R值不得低于0.9975
2、每根试管要求测定两次，两个数据之间的绝对差值不得超过算术平均值10%。
变异系数不超过10%。
3、学会分析数据，当所做线形关系不符合要求时，能作出自己的分析和判断

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生物化学实验报告示范-3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖标准曲线

生物化学实验报告示范-3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖标准曲线

实验二3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线马铃薯总糖含量测定实验目的1. 熟悉并掌握7200型分光光度仪的结构及工作原理和操作使用方法；2. 掌握分光光度法测定物质含量的基本操作步骤及微机绘制标准曲线的操作方法；3．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的原理及方法；4．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理与方法。

实验原理1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的及标准曲线定制原理3,5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中加热反应后被还原成棕红色的氨基化合物，该有色物质在540nm 处有最大吸光度，且在一定浓度范围内（一般OD值在0.2～0.8范围内线性较好），还原糖的量与反应液的颜色强度（吸光度OD值）呈线性关系，利用分光光度仪，以分析纯葡萄糖为还原糖测定的标准品，在540nm处按梯度依次测定各葡萄糖浓度对应的反应液的吸光度（OD值）大小，通过微机处理数据，定制葡萄糖标准曲线，确定出3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖的线性回归方程；2. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理先将马铃薯去皮，经机械粉碎，过滤和清水漂洗，烘干制成马铃薯淀粉；再精确称取干燥恒重后的马铃薯淀粉加酸水解为还原糖，经中和定容，配制成马铃薯总糖含量测定的待测液（即样品液）；再以标准曲线测定的加样操作方法，测定出样品待测液的吸光度大小，将测定的吸光度大小代入其回归方程，即可计算出样品待测液的显色浓度，根据稀释倍数关系，计算出以还原糖的量表示的马铃薯总糖的量，并测定出马铃薯总糖百分含量。

该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。

实验操作1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线（1）葡萄糖标准溶液的配制：（2mg/mL）准确称取2000mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至1000mL，冰箱保存备用（2）葡萄糖标准曲线定制加样操作及测定结果纪录（详见表1）按表1进行实验操作，在沸水浴中准确反应20min，取出后立即用冷水冷却，加蒸馏水定容至25mL，摇匀，用lcm的比色杯于540nm处测光密度值。

葡萄糖标准曲线

葡萄糖标准曲线

0.00.20.40.60.81.01.21.41.61.82.00.00.20.40.60.81.01.21.41.61.82.0葡萄糖标准曲线吸光度葡萄糖含量/mg[2013/3/ 15:24 "/Graph1" (2456363)]Linear Regression through origin for Data1_B: Y = B * XParameter Value Error------------------------------------------------------------ A 0 --B 0.80203 0.01276------------------------------------------------------------R SD N P------------------------------------------------------------ 0.9982 0.03646 9 <0.0001------------------------------------------------------------氮源种类lsd=t 0.05*s x1-x2 s x1-x2=2e 2nSN=3 L0.05=45.877 L0.01=65.25334 氮源用量L 0.05=57.9393 L 0.01=82.4102硫酸铵和豆饼粉含量L 0.05=36.0044 L 0.01=51.211硫酸铵和蛋白胨含量L 0.05=38.3182 L 0.01= 54.50201结晶纤维素 无定形纤维素纤维二糖葡萄糖C 1C xβ-葡萄糖苷酶纤维素 CBHI 、CBH IICBHI 、CBH IIEGI 、EG II纤维糊精纤维二糖BG葡萄糖实验号 因素酶活值（U/g ） A B C DⅠⅡⅢ平均值1 1 1 1 1 276.502 259.698 291.778 275.992 2 1 2 2 2 301.122 251.622 348.146 300.2973 1 3 3 3 267.357 253.553 244.109 255.0064 2 1 2 3 238.445 248.778 294.082 260.435 5 2 2 3 1 332.598 291.779 302.362 308.9136 2 3 1 2 288.606 398.204 405.511 364.107 7 3 1 3 2 377.461 383.599 329.895 363.6528 3 2 1 3 444.975 436.250 438.841 440.022 93 321 477.430 446.196 423.886 449.171K 1 831.296900.081 1080.122 0T=3017.599K 2933.456 1049.233 1009.904 0K 3 1252.846 1068.285927.572 0 1K 277.098 300.026 360.041 0 2K 311.152 349.744 336.634 0 3K417.615 356.095 309.191 0 R 140.51656.06850.849 0（2）正交实验结果表16 正交实验结果及分析Table16. Results and analysis of orthogonal test实验号因素酶活值（U/g ） ABCDⅠⅡⅢ平均值1 1 1 1 1276.502 259.698 291.778275.9922 1 2 2 2301.122 251.622 348.146300.2973 1 3 3 3267.357 253.553244.109255.0064 2 1 2 3238.445 248.778294.082 260.4355 2 2 3 1332.598 291.779302.362 308.9136 2 3 1 2288.606 398.204405.511 364.1077 3 1 3 2377.461 383.599329.895 363.6528 3 2 1 3444.975 436.250438.841 440.0229 3 3 2 1477.430 446.196423.886449.171K 1 831.296 900.081 1080.122 0T=3017.599K 2 933.456 1049.233 1009.904 0K 3 1252.846 1068.285 927.572 01K 277.098 300.026 360.041 02K311.152 349.744 336.634 03K417.615 356.095 309.191 0R 140.516 56.068 50.849 0本项目以绿色木霉为菌种，对绿色木霉产纤维素酶固态发酵培养基配方中氮源进行选择优化，提高产纤维素酶的活力。

蒽酮葡萄糖标准曲线

蒽酮葡萄糖标准曲线

蒽酮葡萄糖标准曲线蒽酮葡萄糖是一种常用于生物化学实验的试剂，它可以用来检测葡萄糖的含量。

在实验过程中，我们通常需要绘制蒽酮葡萄糖标准曲线来帮助我们准确测定待测样品中葡萄糖的浓度。

本文将介绍如何制备蒽酮葡萄糖标准曲线以及如何使用它来测定葡萄糖含量。

首先，我们需要准备一定浓度的葡萄糖标准溶液。

可以根据实验需要选择不同的浓度，一般来说，我们至少需要准备五个不同浓度的标准溶液。

将这些标准溶液分别加入到含有蒽酮试剂的试管中，然后在沸水中加热反应。

反应完成后，待溶液冷却至室温后，使用分光光度计分别测定各标准溶液的吸光度值，并记录下来。

接下来，我们需要绘制蒽酮葡萄糖标准曲线。

将吸光度值作为纵坐标，葡萄糖浓度作为横坐标，根据测得的吸光度值和葡萄糖浓度值绘制散点图，然后利用拟合直线法或者拟合曲线法得到标准曲线方程。

标准曲线的方程可以用来计算待测样品中葡萄糖的浓度，从而实现定量分析的目的。

在实际测定中，我们只需要将待测样品的吸光度值代入标准曲线方程中，就可以得到样品中葡萄糖的浓度。

需要注意的是，为了准确测定样品中葡萄糖的浓度，我们通常会对样品进行稀释处理，以确保其吸光度值在标准曲线范围内。

蒽酮葡萄糖标准曲线的制备和应用在生物化学实验中具有重要意义。

它不仅可以帮助我们准确测定葡萄糖的含量，还可以在一定程度上反映待测样品中其他还原性物质的含量。

因此，在实验中，我们需要严格按照标准曲线的制备方法进行操作，确保实验结果的准确性和可靠性。

总之，蒽酮葡萄糖标准曲线是生物化学实验中常用的重要工具，它为我们提供了一种简单而有效的方法来测定葡萄糖含量，同时也为其他相关物质的定量分析提供了参考。

希望本文的介绍能够帮助读者更好地理解蒽酮葡萄糖标准曲线的制备和应用，从而在实验中取得准确可靠的实验结果。

血清葡萄糖检测实训报告

血清葡萄糖检测实训报告

一、实训目的通过本次实训，使学生掌握血清葡萄糖检测的基本原理、操作方法和注意事项，提高学生的实验技能和综合素质，为今后从事临床检验工作打下坚实基础。

二、实训内容1. 实验原理血清葡萄糖检测是利用葡萄糖氧化酶法检测血清中的葡萄糖含量。

该方法基于葡萄糖氧化酶催化-D-葡萄糖氧化生成D-葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的催化下，与色原在酸性条件下生成绿色化合物，通过比色法测定绿色化合物的吸光度，从而计算出血清中葡萄糖的含量。

2. 实验材料（1）试剂：葡萄糖氧化酶试剂盒、显色剂、底物、缓冲液、氧化酶溶液、过氧化物酶溶液、盐酸、磷酸盐缓冲液、标准葡萄糖溶液。

（2）仪器：酶标仪、移液器、加样器、微量离心机、恒温水浴锅、试管、试管架、吸头、吸管、酒精灯、蒸馏水等。

3. 实验步骤（1）标准曲线绘制1）将标准葡萄糖溶液用蒸馏水稀释成0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mg/L系列浓度。

2）分别取上述溶液100μl于试管中，加入葡萄糖氧化酶试剂100μl，混匀。

3）在37℃恒温水浴锅中反应10分钟。

4）取出试管，加入显色剂100μl，混匀。

5）室温放置10分钟。

6）用酶标仪在波长520nm处测定吸光度。

7）以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

（2）样品测定1）取血清样品100μl于试管中，按照上述步骤进行操作。

2）测定吸光度。

3）根据标准曲线计算血清中葡萄糖的含量。

4. 结果与分析（1）标准曲线绘制以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，计算相关系数R²。

（2）样品测定根据标准曲线，计算血清中葡萄糖的含量。

三、实训总结1. 通过本次实训，掌握了血清葡萄糖检测的基本原理、操作方法和注意事项。

2. 培养了严谨的实验态度和团队协作精神。

3. 提高了实验技能和综合素质。

4. 为今后从事临床检验工作打下了坚实基础。

四、存在问题及改进措施1. 问题：部分学生操作过程中出现吸光度误差较大，导致计算结果不准确。