重金属胁迫培养对2种细菌生长曲线的影响(1)

安徽农业科学。ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｈｕｉＡｇ，ｉ．Ｓｅｉ．２０１１．３９（１）：４４３—４４６责任编辑陈秀晨责任校对傅真治重金属胁迫培养对２种细菌生长曲线的影响李淑英，苏亚丽，周元清，史云东，别金蓉（玉溪师范学院资源环境学院，云南玉溪６５３１００）

摘要［目的］研究重金属胁迫培养对２种细菌生长曲线的影响。［方法］以大肠杆菌和枯草芽孢杆茵２种典型细菌为试验材料，采用传统培养方法，选择５种重金属离子ｃｕ“、Ｈ９２＋、Ｐｂ“、ｃｄ２＋、ｃｒ６＋在不同浓度下对其进行胁迫培养，通过测定２种细菌的生长曲线，研究外源性重金属对２种细菌生长的影响。［结果］Ｈｇ“、ｃｄ２＋毒性较强。２种细茵的增殖在高浓度时受到抑制，Ｇ＋比Ｇ一更为敏感；当重金属浓度＞５０ｍｓ／Ｌ后，５种重金属的对２种细茵的毒性顺序为Ｈｇ“＞Ｃｄ“＞Ｃｕ“＞Ｃｒ６＋一Ｐｂ“。［结论］该研究结果为进一步研究重金属

对环境及生态系统的影响奠定基础。关键词重金属；大肠杆茵；枯草芽孢杆菌；生长曲线；胁迫中图分类号Ｘ１７２文献标识码Ａ文章编号０５１７—６６１１（２０１１）０１—００４４３一０４

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重金属对环境及生态系统有长期的毒性而且容易在生物体内积累形成一系列毒害效应，通常情况下，受重金属胁迫后微生物会产生２个明显效应：①不适应生长的微生物数量会减少或绝灭；②适应生长的微生物数量会增加或积累¨。１。一般情况下，重金属不能被微生物降解并且对它们具有毒害作用，但微生物对重金属又有一定的抗性和解毒作用，可以吸附和转化重金属一“１。在重金属的选择作用下，微生物不断增强自己的耐性、抗性、有高度的选择性”１。从目前的研究来看，环境中重金属的加入，对微生物种类、活性产生作用哺一“，重金属会影响细菌、真菌、放线菌等微生物的生长数量，在低浓度下，重金属对微生物数量一般有刺激作用，而在高浓度下则有抑制作用。笔者采用传统的微生物培养法，在培养基中加入不同浓度的Ｃｕ２＋、Ｈ９２＋、Ｐｂ“、ｃｄ“、ｃｒ６＋５种重金属，对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌进行胁迫培养，培养过程中每隔２ｈ测定１次ＯＤ值，绘制２种细菌的生长曲线，结果发现Ｈ９２＋、Ｃｄ“毒性较强，２种细菌的增殖在高浓度时受到抑制，Ｇ＋比Ｇ一更为敏感；当重金属浓度＞５０ｍｇ／Ｌ后，５种重金属对２种细菌的毒性顺序为Ｈ９２＋＞Ｃｄ“＞Ｃｕ“＞Ｃｒ６＋一Ｐｂ“。ｌ材料与方法１．１供试菌种革兰氏阴性（Ｇ一）代表菌种大肠杆菌（Ｅｓｃｈ－ｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ），革兰氏阳性（Ｇ＋）代表菌种枯草芽孢杆菌（砌．ｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）。１．２培养基大肠杆菌和枯草芽孢杆菌均采用ＬＢ培养基Ｉ配制方法如参考文献［８］。基金项目云南省教育厅科学研究基金项目“重金属对几种微生物的胁迫生理毒性研究”（０９Ｙ０３８２）；云南省自然基金项目“重金属污染中三种水生植物的毒害机理研究”（２００８ＺＣｌ６ｌＭ）。作者筒介李淑英（１９７３一），女，云南江川人，讲师，硕士，从事微生物教学及研究工作。收稿日期２０１０—１０－０８１．３方案设计１．３．１扩大培养。将活化后的斜面菌种用５ｌＩｄ无菌水洗脱于装有２００ｍｌＬＢ液体培养基的锥形瓶中，置于摇床（１８０ｒ／ｍｉｎ）上恒温（３５℃）预培养２４ｈ。

１．３．２胁迫培养。配制ＬＢ液体培养基，分别添加ＰｂＣＩ：（Ａ．Ｒ），ＣｄＣｌ２（Ａ．Ｒ），Ｋ：Ｃｒ２０，（Ａ．Ｒ），ＨｇＩ：（Ａ．Ｒ），ＣｕＳ０４（Ａ．Ｒ），使ｐｂ２＋、Ｃｄ“、Ｃｒ６＋、Ｈｇｚ＋、Ｃｕ“浓度梯度为５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、８０．和１００ｍｓ／Ｌ（以纯Ｐｂ２＋、Ｃｄ２＋、Ｃｒ６＋、Ｃｕ“和Ｈ９２＋计），另以不含任何重金属离子的ＬＢ液体培养基作对照，将预培养的菌液按１０％的接种量分别接种于上述培养基中，置于摇床（１８０ｒ／ｒａｉｎ）上恒温（３５℃）摇瓶培养。１．３．３生长曲线测定。培养过程中每隔２ｈ用紫外光栅分光光度计，于６００ｎｍ波长测其光密度，绘制不同微生物在不同浓度重金属胁迫后的生长曲线。２结果与分析２．１Ｉ酵＋胁迫对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌生长曲线的影

响由图ｌ可知，Ｈ９２＋浓度为５—３０ｍｇ／Ｌ时在短时间内对大肠杆菌生长影响不大，大肠杆菌呈现逐渐增加的趋势，当培养时间为２６ｈ时大肠杆菌的数量趋向稳定；Ｈ９２＋浓度为２０～３０ｍｇ／Ｌ时对大肠杆菌生长具有一定的促进作用，大肠

杆菌数量在一定时间内比没有添加Ｈ９２＋时的数量要多；Ｈ９２＋浓度为４０ｍｇ／Ｌ时大肠杆菌的数量开始减少，表现出一

定的抑制作用；Ｈ９２＋浓度为５０—１００ｍｓ／Ｌ时大肠杆菌的数量没有明显变化，说明高浓度的Ｈ９２＋完全抑制大肠杆菌的生长。由图２可知，Ｈ９２＋浓度为２０ｍｓ／Ｌ时对枯草芽孢杆菌的生长具有促进作用，当Ｈ９２＋浓度为５０ｍｇ／Ｌ时，开始表现而出对枯草芽孢杆菌的生长抑制作用，Ｈ９２＋浓度为８０—１００

．ｇ／Ｌ时完全抑制枯草芽孢杆菌的生长，与相关理论及试验旧。７，１结论相同，高浓度的Ｈ９２＋对２种细菌的生长产生抑制作用，通过对２种细菌ＯＤ值对比发现，Ｇ＋比Ｇ一对Ｈ９２＋更敏感，主要原因可能是２种细菌的结构不同和对不良环境万方数据安徽农业科学２０１１定的适应差异造成的。Ｌ８，时磐”唑

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