DNA琼脂糖凝胶电泳ppt课件

铺胶
凝胶凝固后取出梳子
加缓冲液
准备样品
点样
Fra Baidu bibliotek
电泳
注意观察溴酚蓝染液的迁移
紫外灯下观察电泳结果
照相
对琼脂糖凝胶电泳分离DNA 片段的有效性 的再认识
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DNA 为多元酸，在中性或弱碱性缓冲 液中带负电荷而向阳极泳动 由于不同 DNA 分子在同一凝胶中迁移速率不一样， 电泳一段时间后可将其分开。
状DNA>开环DNA
不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围
琼脂糖浓度（%） 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0
分离范围（kb） 5-60 1-20 0.8-10 0.5-7 0.4-6 0.2-4 0.1-3
琼脂糖凝胶中DNA的观察
溴化乙锭（EB）—DNA：紫外光下 红色荧光
主要实验器材
电泳仪
缓冲液 琼脂糖
凝胶槽
梳子
电泳槽
溴酚蓝
取液器
电泳槽结构
操作步骤
琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB 凝胶板的制备：加梳子，倒胶 样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝 加样：加样端为负极（黑） 电泳：5V/cm 观察：紫外灯下观察，照相
溶胶
准备胶槽
凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml
DNA琼脂糖凝胶电泳
姓名：徐秀倩 学号：3160481 导师： 吴小芹
实验原理
琼脂糖为链状多糖 →绳状琼脂糖束→大网孔型
凝胶 ——分离、鉴定、纯化DNA 影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构
象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成 缓冲液pH>DNA Pi，DNA带负电荷，迁移率与
分子量对数成反比 DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA>线
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结果
电泳后在日光下(LIGHTBLUE Dye 染色)或在紫外 灯下(溴化乙锭染色)切取含“ 单一” 目的DNA 分 子的胶条并称重，用小量胶回收试剂盒回DNA。
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谢谢观看
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