脓毒血症大鼠模型建立
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全身炎症三种小鼠模型的制作流程一、方法总结:通过脂多糖(LPS)给药、腹腔污染和感染(PCI)或盲肠结扎穿孔(CLP)对C57BL/6N小鼠治疗诱导全身性炎症反应。
在炎症诱导后0, 2, 4、6, 12, 24、48和72小时评估血糖和循环细胞因子水平。
此外,还测定了各器官的氧化应激和肝脏的生物转化能力。
通过免疫组化法检测肝、脾组织中氧化应激、凋亡、浸润性免疫细胞及细胞因子表达模式。
二、对比结果:用LPS给药和PCI诱导的小鼠炎症反应非常相似。
然而,LPS给药能引起更强的反应。
在两种模型中,血清促炎细胞因子水平迅速升高,而血糖下降。
器官显示氧化应激的早期迹象,脾细胞凋亡增加。
此外,肝脏的生物转化能力降低,肝和脾有明显的免疫细胞浸润。
暴露于LPS或PCI的小鼠在72小时后恢复,相反,CLP诱导的炎症反应相对较少,但炎症反应更为持久。
三、方法比较结论:当研究急性炎症的新疗法时,全身炎症反应的LPS模型显示最合适。
当使用CLP模型模拟人体脓毒症时,给药应采用较长的疗程,因为给药可导致全身炎症的迟发性发展。
四、动物和实验方法:1.实验动物:成年雄性C57BL/6小鼠(12周龄,体重25–30 g),动物被安置在标准条件下的塑料笼子(光暗周期12 / 12小时,温度22±2°C,湿度50±10%,颗粒饲料自由饮水)。
2.实验操作:2.1脂多糖(LPS)给药:小鼠用脂多糖LPS处理。
大肠杆菌,5毫克/公斤体重,溶解在PBS中腹腔给药体积0.1毫升/10克小鼠体重)。
2, 4, 6、12, 24, 48和72小时后所描述的处死动物。
在实验开始时(T=0),每治疗组处死四只对照小鼠。
这些老鼠没有接受任何治疗。
在前几次(试验)研究中确定了最合适的非致死性LPS剂量。
2.2腹腔污染和感染(PCI):小鼠取1.5g的大便,溶于PBS腹腔内给予0.1毫升/ 10克体重,代表非致死剂量。
2.3盲肠结扎穿孔[CLP]:异氟醚诱导麻醉和沿腹白线正中切口切开腹腔,暴露盲肠,在远端与盲肠底之间用不可吸收缝线结扎。
几种常见疾病的造模方法1.血管性痴呆大鼠模型动物选取选用健康Ⅱ级SD雄性大鼠,体重280- 320 g,动物于安静环境下分笼饲养,室温控制在(22士1)℃的范围内,相对湿度60%,光线自动控制,明(07: 00- 19: 00)暗(19: 00-07)交替,给予充足清洁饮水、摄食。
处理大鼠10%水合氯醛腹腔注射(1 g/ kg)麻醉后,将其仰卧固定。
分离右颈总动脉(CCA),颈内动脉(ICA)及颈外动脉(ECA)并挂线备用,结扎ECA与CCA,用动脉夹夹闭ICA远心端后,迅速于ECA与ICA分义处作一切切口,从切口处插入一端加热成光滑球形尼龙线(直径为0. 25 mm,距球端2cm处作标记)。
线插入ICA后,于入日处稍稍结扎尼龙线与入口处ICA段,然后松开夹闭ICA的动脉夹,继续插入尼龙线至稍有阻力后略回撤,至线插入深度为(18. 5士0. 5)mm左右,实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。
再次结扎入口处,尼龙线外留约1缝合皮肤。
2h后轻轻提拉所留线头至有阻力,实现大脑中动脉再灌,则造模完成。
纳入动物入选的标准(按照Zea Longa 5级评分法取评分为2,3,4分的动物,动物于缺血2h后出现对侧前肢倦曲或行走转圈或行走向对侧倒体征则纳入,动物无此体征或于缺血2h后仍不清醒者弃去。
2.大鼠酒精性肝病模型取材体重125- 155g雄性SD大鼠,环境温度18℃一20 0C,湿度70%左右,自由采食全价营养颗粒饲料,垫料为紫外线消毒后的卫生纸。
将酒精体积分数为0. 52的红星二锅头自酒(北京酿酒总厂生产),按体积比分别稀释成400Io .450Io .500Io ( v/ v)备用。
处理按每周所测得的体重给子每日早晚白酒灌胃各1次。
第1周将稀释成40%的白酒按剂量4g/(kg.d)、每次0. 5m1/ 100g灌胃,第2周按剂量8g/(kg.d)、每次1. 0ml/ 100g,灌胃,第5周开始将稀释成45%的自酒按9g/(kg.d),每次1. 0m1/ 100g灌胃,第9周将稀释成50%的白酒按10g/(kg.d)、每次1. 0m1/ 100g灌胃,第11周起改用自由饮酒至第12周,以浓度50%白酒作为主要饮料,日供给量40ml,同时限制饮水。
1. 了解并掌握大鼠足肿胀模型的制备方法。
2. 观察不同药物对大鼠足肿胀的影响,以评估其抗炎作用。
3. 探讨不同药物在治疗炎症性疾病中的应用潜力。
二、实验材料1. 实验动物:健康成年雄性SD大鼠,体重200-250g。
2. 药物:地塞米松、当归拈痛丸、福氏完全佐剂(CFA)、鸡蛋清、尿酸钠等。
3. 仪器设备:电子天平、足趾体积测量仪、解剖显微镜、手术器械等。
4. 试剂:生理盐水、75%酒精、氯仿、硫酸等。
三、实验方法1. 实验分组:将大鼠随机分为五组,分别为正常对照组、模型组、地塞米松组、当归拈痛丸组和尿酸钠组。
2. 模型制备:- 模型组:大鼠右后足跖部皮下注射CFA 0.1ml。
- 鸡蛋清组:大鼠右后足跖部皮下注射鸡蛋清0.1ml。
- 尿酸钠组:大鼠右后足跖部皮下注射尿酸钠溶液0.1ml。
3. 药物干预:- 地塞米松组:在大鼠足肿胀后,给予地塞米松腹腔注射,剂量为0.5mg/kg。
- 当归拈痛丸组:在大鼠足肿胀后,给予当归拈痛丸灌胃,剂量为0.2g/kg。
- 尿酸钠组:在大鼠足肿胀后,给予尿酸钠灌胃,剂量为0.1g/kg。
4. 观察指标:- 足肿胀度:采用足趾体积测量仪测量大鼠足跖体积,计算肿胀度和肿胀率。
- 组织学观察:取大鼠足跖部组织,进行HE染色,观察炎症细胞浸润和血管扩张情况。
1. 模型制备成功,大鼠足跖部出现明显肿胀,肿胀度和肿胀率显著高于正常对照组(P<0.05)。
2. 与模型组相比,地塞米松组和当归拈痛丸组大鼠足肿胀度明显降低,肿胀率显著降低(P<0.05)。
尿酸钠组大鼠足肿胀度与模型组无显著差异(P>0.05)。
3. 组织学观察显示,地塞米松组和当归拈痛丸组大鼠足跖部炎症细胞浸润和血管扩张情况明显减轻。
五、讨论1. 本实验成功制备了大鼠足肿胀模型,为研究抗炎药物提供了可靠的实验基础。
2. 地塞米松和当归拈痛丸均具有明显的抗炎作用,能够减轻大鼠足肿胀程度,降低肿胀率。
血必净注射液改善脓毒症大鼠心脏功能的作用孙正达;沈建明;沈蕾;秦海军;施梦;曹同瓦;祝禾辰【期刊名称】《复旦学报(医学版)》【年(卷),期】2008(35)2【摘要】目的观察血必净注射液对脓毒症大鼠心脏功能的作用.方法将45只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症模型组(CLP组)及血必净治疗组(XBJ组),每组15只.Sham组不结扎穿刺盲肠,余同CLP组;CLP组采用盲肠结扎并穿刺法造模;XBJ组造模后立即经阴茎静脉注射血必净注射液4mL/kg 体重.12 h后经右颈总动脉左心室内插管监测各组大鼠左心室功能变化,留取左心室心肌组织观察形态学改变,同时检测血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β的含量.结果①脓毒症状态下左心室收缩峰压(LVPP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室压力上升/下降最大速率(±dp/dtmax)均有不同程度改变,应用血必净注射液后可明显改善各项指标.②CLP 组可见细胞变性、炎性细胞浸润,XBJ组上述改变减轻.③脓毒症状态下cTn-Ⅰ、TNF-α、IL-1β水平显著升高,应用血必净后明显降低.结论血必净注射液改善脓毒症状态下心功能障碍,其机制可能与减轻心肌损伤,下调TNF-α、IL-1β水平有关.【总页数】4页(P208-211)【作者】孙正达;沈建明;沈蕾;秦海军;施梦;曹同瓦;祝禾辰【作者单位】复旦大学附属华山医院中心ICU,上海,200040;复旦大学附属华山医院中心ICU,上海,200040;复旦大学附属华山医院中心ICU,上海,200040;复旦大学附属华山医院中心ICU,上海,200040;复旦大学附属华山医院中心ICU,上海,200040;复旦大学附属华山医院中心ICU,上海,200040;复旦大学附属华山医院中心ICU,上海,200040【正文语种】中文【中图分类】R541.66+4;R285【相关文献】1.血必净注射液对脓毒症大鼠肾保护作用的研究 [J], 朱雪琦;王蕾;刘清泉;姚咏明2.血必净注射液对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用 [J], 陈华文;李树生;祝伟3.血必净注射液对脓毒症模型大鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究 [J], 刘鑫;王宁;鲁永玲;陈倩;祝元峰;范仕郡;郑江;4.血必净注射液对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡保护作用的机制研究 [J], 孟繁甦;刘勇;罗泽坤;黄小洵;任甘雨;刘八一5.白藜芦醇在慢性阻塞性肺疾病合并肺源性心脏病SD大鼠肺功能及心脏功能改善中的作用 [J], 闫姗姗;赵芳;肖剑;张春良因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
小鼠脓毒症评分小鼠脓毒症评分引言脓毒症是一种常见的临床疾病,其发生率逐年增加。
在临床治疗中,如何准确评估患者的脓毒症程度对于治疗和预后具有重要意义。
而小鼠模型是进行脓毒症实验的重要工具。
因此,小鼠脓毒症评分是一种非常重要的指标。
一、小鼠脓毒症评分的基本概念小鼠脓毒症评分是通过观察小鼠在感染后出现的生理和行为反应来判断其脓毒症程度。
目前常用的小鼠脓毒症评分方法包括APACHE II评分法、SOFA评分法、MODS评分法等。
二、小鼠脓毒症评分方法1. APACHE II评分法APACHE II(Acute Physiology and Chronic Health Evaluation)是一种广泛应用于ICU中危重患者预后预测和临床干预的方法。
该方法根据患者生命体征、年龄、慢性健康状态等因素进行综合评估,可反映患者的全身状况。
在小鼠脓毒症评分中,APACHE II评分法将小鼠的生理指标(如体温、呼吸、心跳等)和行为指标(如活动性、食欲、水摄入量等)进行评估,从而判断小鼠的脓毒症程度。
2. SOFA评分法SOFA(Sequential Organ Failure Assessment)是一种用于评估危重患者器官功能衰竭情况的方法。
该方法通过对患者多个器官系统的生理指标进行评估,反映了患者全身器官功能状态。
在小鼠脓毒症评分中,SOFA评分法将小鼠的生理指标(如呼吸、血压、肾功能等)进行综合评估,从而判断小鼠的脓毒症程度。
3. MODS评分法MODS(Multiple Organ Dysfunction Syndrome)是一种由多个器官系统功能障碍引起的严重疾病,是危重患者常见并发症之一。
该方法通过对患者多个器官系统的生理指标进行评估,反映了全身器官功能状态。
在小鼠脓毒症评分中,MODS评分法将小鼠的生理指标(如呼吸、血压、肾功能等)进行综合评估,从而判断小鼠的脓毒症程度。
三、小鼠脓毒症评分的影响因素小鼠脓毒症评分受到多种因素的影响,包括感染菌株、感染部位、感染时间和治疗方法等。
芪参活血颗粒对脓毒症大鼠生存率和生存时间影响的研究赵静静;张淑文;王红;王宝恩【期刊名称】《中国中医急症》【年(卷),期】2007(016)012【摘要】目的观察中药芪参活血颗粒对脓毒症大鼠生存时间和生存率的影响,探讨其对黏附分子和血清内毒素等指标水平的影响.方法采用盲肠结扎法(CLP)复制脓毒症模型.第一阶段观察生存时间:动物分为:模型组(CLP造模)、中药组(CLP造模后1h开始给药),预防用药组(CLP造模前1h开始给药)和假手术组.观察大鼠一般状况和自然死亡时间,时间为15d.第二阶段观察炎症指标.各组造模后3、6、12、24、72h分别处死动物,另以8只正常大鼠作对照组,采用血流式细胞术测CD11b,鲎试剂法测血浆内毒素,肺组织匀浆ELISA法测ICAM-1表达.结果中药组能使脓毒症大鼠死亡率明显降低.模型组大鼠血PMN表面CD11b和肺组织ICAM-1的表达、血浆内毒素水平明显升高,中药组CD11b和ICAM-1的表达降低,血浆内毒素水平降低.结论中药芪参活血颗粒可以明显减低脓毒症大鼠死亡率,降低脓毒症早期黏附分子血PMN表面CD11b和肺组织ICAM-1表达的升高,降低血浆内毒素升高的水平,从而改善脓毒症时炎症反应损伤.【总页数】3页(P1504-1505,1508)【作者】赵静静;张淑文;王红;王宝恩【作者单位】首都医科大学附属北京友谊医院,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院,北京,100050【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.中药芪参活血颗粒在重度脓毒症治疗中的作用 [J], 苏艳丽;王红;张淑文;任爱民;张丽霞;王超;阴赪宏;文艳;王宝恩2.芪参活血颗粒对肺炎合并脓毒症患儿血清炎症反应的影响 [J], 张俊光;黄东华3.芪参活血颗粒对脓毒症大鼠心肌保护作用的研究 [J], 王国兴;沈潞华;郝国栋;谢苗荣;金明;张淑文4.芪参活血颗粒联合氟康唑对深部白色念珠菌感染小鼠生存率的影响 [J], 李世荣;王红;张淑文;王宝恩5.中药芪参活血颗粒治疗重度脓毒症的疗效观察 [J], 苏艳丽;王红;张淑文;阴赪宏;文艳;王超;王宝恩因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
实验性牙周炎大鼠模型的建立孙继军;王栋;王爱芹【摘要】背景:建立实验性牙周炎大鼠模型是研究牙周病的基本方法之一,目前常用的建模方法存在许多弊端,需要进一步改进。
目的:建立一种近似于人类临床的牙周炎动物模型方法。
方法:将20只8周龄的Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,锐分离实验组大鼠双侧下颌第一磨牙颊侧牙龈,局部黏结慢性牙周炎患者的牙石于牙颈部,滴入慢性牙周病炎患者的唾液10μL/次,2次/d;对照组大鼠牙齿不做处理。
两组大鼠均喂以高糖黏性食物。
结果与结论:造模14 d后实验组动物一般生物学特征和牙周组织病理、X射线变化均符合典型牙周炎表现。
局部黏结牙石加混合细菌感染的方法建立的大鼠牙周炎模型可以模拟人类牙周炎的组织变化,是一种接近于人类临床的简单、实惠、有效的建模方法。
%10.3969/j.issn.2095-4344.2012.37.006【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2012(000)037【总页数】4页(P6867-6870)【关键词】牙周炎;细菌感染;牙石;动物模型;大鼠;组织构建【作者】孙继军;王栋;王爱芹【作者单位】滨州医学院附属医院口腔内科,山东省滨州市256603;滨州医学院附属医院口腔内科,山东省滨州市256603;滨州医学院附属医院口腔内科,山东省滨州市256603【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言牙周炎是引起失牙的主要原因,建立稳定、可靠的实验性牙周炎动物模型,可以为探讨牙周炎病因、病理及临床治疗提供研究工具[1-2]。
大鼠除切牙牙根持续生长外,其牙周组织如牙龈、牙槽骨、牙周膜的解剖结构及相互关系与人相似;其口腔菌斑的形成及其生长发育、滋生、繁殖等亦都与人类相似,且大鼠价格便宜、操作简便,所以在牙周炎的实验研究中,大鼠是一种较好的模型动物。
传统大鼠牙周炎模型制备方法包括丝线结扎、高糖喂养、注射激素和应激刺激等[3-7],但这些方法具有干扰因素多、操作复杂、成功率较低、花费多等缺点。
C57BL/6小鼠与BALB/c 小鼠对脓毒症反应的差异张婕,刘占国,罗宇维,何懿,顾冬生,王明,郑彦涛,孙尔维(南方医科大学珠江医院器官移植科,广东广州510282)摘要:目的探讨C57BL/6与BALB/c 两种小鼠对脓毒症的反应能力。
方法C57BL/6小鼠和BALB/c 小鼠各30只,分别随机分成假手术组与脓毒症组,每组15只。
脓毒症组用盲肠结扎穿孔法(CLP )建立小鼠脓毒症模型。
术后6h ,每组随机选出5只,Bio-plex 悬浮蛋白芯片系统检测其外周血IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、GM-CSF 、IFN-γ和TNF-α的浓度。
剩余小鼠用于1周存活率分析。
结果两品系小鼠假手术组1周存活率均为100%。
C57BL/6小鼠脓毒症组1周存活率为10%,BALB/c 小鼠脓毒症组存活率为50%。
C57BL/6小鼠脓毒症组的存活率显著低于BALB/c 小鼠脓毒症组(P <0.05)。
与假手术组相比,C57BL/6小鼠脓毒症组分泌的IL-4、TNF-α和IL-10明显升高。
而BALB/c 小鼠脓毒症组分泌的8种细胞因子较假手术组均未见明显增加。
结论C57BL/6与BALB/c 两种小鼠对脓毒症的反应能力有差异,C57BL/6小鼠反应更敏感。
关键词:C57BL/6小鼠;BALB/c 小鼠;细胞因子;脓毒症中图分类号:R394;R631.2文献标识码:A文章编号:1673-4254(2010)05-0973-03Differences in the response to sepsis between C57BL/6and BALB/c miceZHANG Jie,LIU Zhan-guo,LUO Yu-wei,HE Yi,GU Dong-sheng,WANG Ming,ZHENG Yan-tao,SUN Er-wei Institute of Transplant Immunology,Zhujiang Hospital,Southern Medical University,Gangzhou 510282,ChinaAbstract:Objective To compare the responses to sepsis between C57BL/6and BALB/c mice.Methods Thirty C57BL/6mice and 30BALB/c mice were randomized into sham-operated group and sepsis group (n =15).Sepsis model was established by cecal ligation puncture (CLP)in the mice,and 6h after the operation,5mice from each group were selected randomly for cytokine detection including IL-1β,IL-2,IL-4,IL-5,IL-10,GM-CSF,IFN-γand TNF-αby Bio-plex.The other 10mice in each group were used for survival analysis.Results The survival rates of BALB/c and C57BL/6mice were both 100%in one week after the sham operation,but lowered to 10%and 50%in one week after CLP,respectively.The survival rate of C57BL/6mice was significantly lower than that of BALB/c mice (P <0.05).After CLP,C57BL/6mice showed significantly greater IL-4,TNF-αand IL-10production than the sham-operated mice,but the concentrations of the 8cytokines in BALB/c mice after CLP showed no significant increment.Conclusion Compared with BALB/c mice,C57BL/6strain mouse is more sensitive to sepsis.Key words:C57BL/6mouse;BALB/c mouse;cytokine;sepsis脓毒症是指机体被存在于血液或组织中的各种致病微生物感染所致的全身炎症反应综合征(SIRS),是严重创伤、烧伤、感染、大手术后常见的并发症[1]。
大鼠卡西酮静脉自身给药成瘾模型的建立大鼠卡西酮静脉自身给药成瘾模型的建立1.课题概述1.1 目的建立大鼠卡西酮静脉自身给药成瘾模型,为卡西酮成瘾相关研究及临床药物滥用者的治疗提供帮助。
1.2 方法首先进行SD大鼠静脉给药插管手术,术后恢复5~7天,开始卡西酮自身给药训练,剂量为3mg·kg-1,每天4h。
随后,进行五个不同剂量(0.75、1.5、3、4.5、6mg·kg-1)的累计频率(progressive ratio,PR)测试。
最后,进行连续10天的自身给药行为维持,维持剂量为3mg·kg-1,每天2h。
1.3 预期结果绝大多数大鼠经过数天的训练,将会出现稳定的卡西酮静脉自身给药行为;PR测试应呈现出剂量效应;维持期内大多数大鼠将能继续保持自身给药行为。
设计人员刘超201100230154杜旭201100230155孙颖201100230159王越2011172302052014年5月14日大鼠卡西酮静脉自身给药成瘾模型的建立1. 课题概述1.1 目的建立大鼠卡西酮静脉自身给药成瘾模型,为卡西酮成瘾相关研究及临床药物滥用者的治疗提供帮助。
1.2 方法首先进行SD大鼠静脉给药插管手术,术后恢复5~7天,开始卡西酮自身给药训练,剂量为3mg·kg-1,每天4h。
随后,进行五个不同剂量(0.75、1.5、3、4.5、6mg·kg-1)的累计频率(progressive ratio,PR)测试。
最后,进行连续10天的自身给药行为维持,维持剂量为3mg·kg-1,每天2h。
1.3 预期结果绝大多数大鼠经过数天的训练,将会出现稳定的卡西酮静脉自身给药行为;PR测试应呈现出剂量效应;维持期内大多数大鼠将能继续保持自身给药行为。
2.研究背景卡西酮(Cathinone),又名苯甲酰基乙胺(benzoylethanamine)(在以色列市场上又叫hagigat[1]),是一种在阿拉伯茶(khat)中发现的一元胺生物碱(monoaine alkaloid)。
槲皮素和姜黄素对脓毒症大鼠炎症因子的影响宋菲;张蓓;马莉;李培武;张虹;甄玲玲;张彤哲【期刊名称】《中国中西医结合急救杂志》【年(卷),期】2012(019)004【摘要】目的探讨槲皮素和姜黄素预处理对脓毒症大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)白细胞介素-6 (IL-6 )及核转录因子-κB(NF-κB)的影响.方法将120 只Wistar 大鼠按随机数字表法分为假手、术组(A 组)模型组(B 组)槲皮素预处理组(C1 组100mg/kg 、C2 组50 mg/kg)姜黄素预处理组(D1 组100 mg/kg 、D2 组、50mg/kg)、槲皮素、+姜黄素预处理组(E1 组槲皮素50 mg/kg +姜黄素、100mg/kg,E2 组槲皮素50 mg/kg +姜黄素50 mg/kg,E3 组槲皮素100 mg/kg +姜黄素50 mg/kg,E4 组槲皮素100 mg/kg +姜黄素100 mg/kg).采用盲肠结扎穿孔术(CLP )复制脓毒症模型;A 组仅开腹分离盲肠而不结扎.各组于制模前灌胃相应药物,A 组和B 组仅灌胃0.1% 二甲基亚砜(DMSO)均每日1 次,连用3d.各组取6只大鼠记录制模后脓毒症严重程度评分及生存时间;余大鼠于制模后24 h 处死,用,酶联免疫吸附试验(ELISA )测定血清TNF-α、IL-6 水平,荧光定量聚合酶链反应(PCR )测定肝组织核转录因子-κB(NF-κB)mRNA 表达,并分析脓毒症严重程度评分、NF-κB 与TNF-α、IL-6 的相关性.结果①B 组术后24 h 脓毒症严重程度评分(分)明显高于A 组(P<0.05)半数生存时间较C、D、E 组明显缩短(P<0.05);各药物预处理组术后脓毒症严重程度评分均较B 组明显下降(均,P< 0.05),其中E4 组(13.83±1.33 )下降更显著.②B 组TNF-α、IL-6 、NF-κB mRNA 表达均较A 组明显升高(均P<0.05);与B 组比较,药物预处理组能明显降低TNF-α、IL-6 的浓度和NF-κB mRNA 的表达水平,且各组组内比较差异有统计学意义(均P<0.05)其中以E4 组下降更显著.③脓毒症严重程度评分与血清TNF-α、IL-6 水平均呈正相关(r 值分别为0.852 、8,均P<0.01);NF-κB mRNA 与血清TNF-α、IL-6 水平呈正相关(r 值分别为0.852 、0.848,均P<0.01).结论槲皮素和姜黄素预处理能明显抑制脓毒症时NF-κB 的表达和炎症反应,随槲皮素及姜黄素剂量增加作用更为显著;且二药合用较单药效果更佳.【总页数】4页(P216-219)【作者】宋菲;张蓓;马莉;李培武;张虹;甄玲玲;张彤哲【作者单位】兰州大学第二医院,急诊ICU,甘肃兰州730030;兰州大学第二医院,急诊ICU,甘肃兰州730030;兰州大学第二医院,急诊ICU,甘肃兰州730030;兰州大学第二医院,内分泌,甘肃兰州730030;兰州大学第二医院,重症医学科,甘肃兰州730030;兰州大学第二医院,急诊ICU,甘肃兰州730030;兰州大学第二医院,急诊ICU,甘肃兰州730030【正文语种】中文【中图分类】R256.1;R563.8【相关文献】1.槲皮素对脓毒症急性肺损伤大鼠肿瘤坏死因子-α/白细胞介素-1β的影响 [J], 白静慧;丁环;蒋雷;马建齐;侴伟平;藏彬2.槲皮素对香烟暴露大鼠血清炎症因子和氧化应激水平的影响 [J], 万春;申永春;陈珍妮;杨婷;汪涛;陈磊;文富强3.姜黄素对动脉粥样硬化大鼠血液中炎症因子与血脂的影响及其作用机制 [J], 潘海龙; 何兴强; 成娅; 李栋; 齐元杰; 姚来昱; 沃金善4.姜黄素对动脉粥样硬化大鼠血液中炎症因子与血脂的影响及其作用机制 [J], 潘海龙;何兴强;成娅;李栋;齐元杰;姚来昱;沃金善5.姜黄素对LPS诱导的大鼠星形胶质细胞NF-κB炎症因子信号通路的影响 [J], 李建设;何文龙;孟珂;付云因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
CLP致脓毒血症大鼠模型建立
一、实验目的
利用CLP技术建立脓毒血症大鼠模型
二、实验原理
脓毒血症患者最常见的感染源来自腹腔且易造成腹腔感染,所以腹腔感染模型是目前最常见的动物模型。
鼠类盲肠结扎穿刺(CLP)是临床研究脓毒血症常见模型,是模仿腹腔脓毒血症感染的临床过程,引起多菌群感染,最终导致脓毒血症。
三、实验材料和设备
成熟期雄性Sprague-Dawley大鼠,体重400-500g。
外科手术器械:手术台,手术刀,刀片,剪刀,刮毛器,镊子,止血钳,持针器,缝皮针,1号线,4号肠线,18g针头,血管夹,医用胶布,PE50导管(厂家),探针,硬膜外穿刺针,肝素帽,留置针,注射器(规格)。
实验药品:1.5%戊巴比妥钠,2%利多卡因,丁苯诺啡,75%酒精,碘伏,肝素钠(10000U),蒸馏水,生理盐水。
四、实验方法和步骤
1.购买SD大鼠,适应性饲养1周,自由饮水,饮食;
2.术前禁食12小时;
3.称重以1.5%戊巴比妥钠40mg/kg(4%水合氯醛 0.1ml/10g抽取麻药,一般3-5分钟起效,可以维持1小时左右。
),腹腔注射(先将动物固定,腹部用酒精棉球擦试消毒,然后在左或右侧腹部将针头刺入皮下,沿皮下向前推进约0.5厘米,再使针头与皮肤呈45 度角方向穿过腹肌刺入腹腔,此时有落空感,回抽无肠液、尿液后,缓缓推入药液。
),麻醉大鼠,止血钳夹小鼠脚趾确定麻醉深度;
4.将大鼠背位固定于手术台上,剪去颈部和腹部被毛;
5.取血导管的制备:取PE50导管约15cm,一侧剪契口,另一端平口,对楔面要进行简单打磨处理,以防表面粗糙划破血管外壁。
抗凝处理是将导管用装满肝素钠的注射器灌流、冲洗,保证导管每个部位都充分接触肝素钠。
6.颈静脉置管术:
a.用碘伏常规消毒颈部,铺无菌手术单。
b.于胸锁乳突肌连线中点起向颈部垂直延伸15mm,做皮肤切口约1.5cm,暴露皮下结缔组织,用血管钳逐层钝性分离至显露颈静脉(特征是在胸廓入口处,有轻微搏动,直径2~4 mm),2%利多卡因3-5滴局部浸润1min,完全游离一段长1-1.5cm血管,血管夹分别夹闭远心端和近心端,血管下穿过两根1号线。
c.在游离颈静脉中间部位,用镊子提起血管壁,全层剪一“V”形小口,约占静脉的1/3。
预先植入探针,再将导管沿切口缓慢送入静脉切口,轻轻开放近心端的血管夹,将导管植入2.5-3cm,可见有血回流或回抽有血。
1号线结扎固定导管,松紧适宜,再次回抽,确定导管在血管内,结扎远心端,开放远心端血
管夹。
d.将导管连同附近少许肌肉缝合固定2-3针,连续缝合切口,留0.5cm切口,以便导管穿过颈部,固定在颈部背侧。
e.导管固定:将大鼠将大鼠翻身置于实验台上,颈后部备皮、消毒,剪一小口,用硬膜外穿刺针沿皮下穿至颈部切口处,拔出针芯,将导管置入穿刺针中,在其引导下,从颈背部穿出,皮肤外留约2cm,连接接头,回抽,确定无误后,将充满肝素盐水的导管接头和肝素帽接好,在颈背部用4号线缝合3~4针固定。
缝合剩余切口,并用75%酒精消毒。
7.将大鼠仰卧位固定在手术台上,腹部备皮,碘伏常规消毒,铺无菌手术单。
8.用手术刀于下腹部正中央,做一1-1.5cm纵行切口。
9.逐层打开肌层、筋膜、腹膜层。
10.找到盲肠一般位于腹部左侧,小心分离其远端及大肠系膜,用钝镊小心取出。
11.于盲肠末端1/4处,用4号肠线行结扎术,用18-gauge needle穿孔2个,需避开回盲部,将内容物挤出少部分,保证孔的通畅性,将肠内容物推至盲肠末端。
12.回纳盲肠至腹腔,关腹。
单纯连续缝合腹膜筋膜肌肉,间断缝合皮肤。
13.用预热的生理盐水(37℃,5ml/100g)皮下注射
14.注射丁苯诺啡(0.05mg)皮下,止痛,可每6h一次。
15.用注射针头接1ml注射器于下腹部耻骨联合之上,腹正中线穿刺。
取钝角进针,针头穿过皮肤后稍微改变角度,以避免穿刺后漏尿,然后刺向膀胱方向,边缓慢进针边回抽,直到抽到尿液为止。
16.大鼠复苏后将大鼠分成二个亚组颈静脉取血(A 亚组:CLP 0、 12、24、48 小时后取血;B 亚组:CLP 3、6、18 及72 小时后取血),同时所有大鼠通过膀胱穿刺取尿回笼子,活动在22-25℃环境下,食物和水不受限制。
刺法留取尿液标本。
四、注意事项
1.AB分组并非对照实验组,而是为了避免大鼠失血少于20%,引发休克,采取的分组取血,每次取血留样为0.8ml,保存温度为:-80℃。
2.该实验确定AKI程度为RIFLE标准,在同等时间点时,取血测定肌酐值,需要多少的血液标本才能测定,RIFLE标准:轻度: RIFLE-R,肌酐为基础值的150%;中度:RIFLE-I,肌酐为基础值的200%;重度:RIFLE-F,肌酐为基础值的300%。
3.血液标本是用血清测量?:取静脉血5ml,室温静置30min,4℃离心机3000R离心15min,取上层血清,-80℃保存。
用什么管子保存标本。
4.血清保存管是否需要抗凝,抗凝剂用什么。
血清肌酐,目前拟定不需要抗凝,取血清样本测肌酐。
5.种鼠对实验是否有影响,实验室只有5-6周龄大鼠,100-150g左右,种鼠有老年期大鼠,400-500g。