同型半胱氨酸测定检测操作程序
- 格式:doc
- 大小:38.50 KB
- 文档页数:4
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断人(Human)同型半胱氨酸(Hcy)ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被同型半胱氨酸(Hcy)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的同型半胱氨酸(Hcy)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪(450nm)2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、1、2、4、8、16μmol/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
小鼠同型半胱氨酸(Hcy)试剂盒使用方法检测范围:96T0.8μmol/L -20μmol/L使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中同型半胱氨酸(Hcy)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠同型半胱氨酸(Hcy)水平。
用纯化的小鼠同型半胱氨酸(Hcy)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入同型半胱氨酸(Hcy),再与HRP标记的同型半胱氨酸(Hcy)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的同型半胱氨酸(Hcy)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠同型半胱氨酸(Hcy)浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品(40μmol/L)0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
20μmol/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液10μmol/L 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液5μmol/L 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液2.5μmol/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液1.25μmol/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
同型半胱氨酸检测原理一、样本处理同型半胱氨酸检测的样本通常为血液样本。
在采集样本前,需要确保受试者处于空腹状态,以避免食物摄入对检测结果的影响。
采集的血液样本应尽快进行处理,以避免样本中同型半胱氨酸的分解和变化。
二、分离血清或血浆采集的血液样本通常需要分离出血清或血浆,以便进行同型半胱氨酸的检测。
分离血清或血浆的方法包括离心和吸引。
离心法是将血液样本放入离心机中,通过高速旋转将血清或血浆从红细胞和其他细胞中分离出来。
吸引法则是利用负压将血液样本中的血清或血浆吸引出来。
三、添加试剂在进行同型半胱氨酸检测时,需要添加特定的试剂。
通常使用的试剂包括同型半胱氨酸氧化酶、过氧化物酶、亚铁离子等。
这些试剂的作用是将血液中的同型半胱氨酸氧化成亚磺酸根离子,并生成过氧化氢。
过氧化氢在过氧化物酶的作用下,将四甲基联苯胺氧化成蓝色产物,该产物在一定范围内与同型半胱氨酸的浓度成正比。
四、检测仪器同型半胱氨酸检测需要使用专业的检测仪器。
目前常用的检测仪器为全自动生化分析仪和分光光度计。
全自动生化分析仪可以自动完成样本的加样、反应和检测,并输出检测结果。
分光光度计则是通过测量蓝色产物的吸光度来确定同型半胱氨酸的浓度。
五、数据分析通过对检测仪器的数据进行整理和分析,可以得出同型半胱氨酸的浓度。
通常使用的数据分析方法包括线性回归分析和t检验。
线性回归分析可以确定同型半胱氨酸浓度与某些疾病风险之间的关系,而t检验则可以比较不同组之间的同型半胱氨酸浓度是否有显著差异。
六、质量控制为了确保同型半胱氨酸检测结果的准确性和可靠性,需要进行严格的质量控制。
室内质量控制包括使用标准品进行日常质控,以确保仪器和试剂的正常运行。
室间质量控制则是通过与其他实验室进行比对和参加外部质量评估计划来验证检测结果的准确性。
七、结果解读同型半胱氨酸检测结果需要根据正常值进行解读。
正常值的范围通常为0-15μmol/L。
如果同型半胱氨酸浓度高于正常值,可能提示患有心血管疾病、癌症、神经系统疾病等风险增加。
血液同型半胱氨酸的测定方法及临床意义摘要同型半胱氨酸是人体内含硫氨基酸的一个重要的代谢中间产物,可能是动脉粥样硬化等心血管疾病发病的一个独立危险因子。
血浆中同型半胱氨酸含量与遗传因素、营养因素、雌激素水平、年龄因素等有关,与同型半胱氨酸代谢有关的N5N10-亚甲基四氢叶酸还原酶和胱硫醚-β-合成酶的基因突变,酶活性下降,也可引起高同型半胱氨酸血症。
同型半胱氨酸的测定方法有:气相色谱-质谱联用法、高效液相色谱法(HPLC)、全自动的荧光偏振免疫测定(Fluorescence polarization immunoassay FPIA)、高效毛细管电泳法。
HPLC最常用,而高效毛细血管电泳最有发展前途。
同型半胱氨酸(homocysteine, hCY)是一种人体内的含硫氨基酸,为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的重要中间产物,其本身并不参与蛋白质的合成。
近年来,国内外许多学者均认为血液同型半胱氨酸含量升高已成为动脉粥样硬化发生的一个独立危险因子,遂成为基础医学和临床医学研究的新热点。
本文综述血液同型半胱氨酸的测定方法及临床意义。
1 同型半胱氨酸的代谢过程1.1 人体内同型半胱氨酸是蛋氨酸脱甲基后的产物,蛋氨酸是重要的“一碳单位”供体,蛋氨酸在S-腺苷蛋氨酸合成酶崔化下与ATP结合生成S-腺苷蛋酸(SAM),SAM在供出甲基后,水解生成同型半胱氨酸和腺苷。
相反,体内的同型半胱氨酸在蛋氨酸合成酶的作用下,以维生素B12为辅助因子,接受N5-甲基四氢叶酸携带的甲基,再形成蛋氨酸。
此反应必须有N5-甲基叶酸作为甲基的供体,N5-甲基四氨叶酸是四氢叶酸经N5N10-亚甲基四氢叶酸还原酶(methyleneterahydrofolatereductase mTHFR)催化而产生的。
同型半胱氨酸另一代谢途径是在胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-beta-synthase cBS)催化下,与丝氨酸缩合成胱硫醚。
同型半胱氨酸的测定及应用作者:于松梅来源:《中国保健》2010年第07期【中图分类号】R343【文献标识码】A【文章编号】1005-2720(2010)07 - 68 - 02【关键词】同型半胱氨酸;测定方法同型半胱氨酸(Homocysteine, Hcy)是一种被认为与心血管、糖尿病、肾脏等疾病有密切关系的指标,与传统的指标相比,Hcy具有更高的临床应用价值。
1 Hcy的测定方法及评价目前,实验室常用测定Hcy的方法有:同位素法、色谱法(HPLC及GC MS)、免疫测定等方法。
1.1 同位素法该方法灵敏度高,特异性强,但操作繁琐且有放射污染,未能推广使用。
1.2 色谱法Stabler1987年首先报道了气相色谱—质谱法测定同型半胱氨酸,郭健等[1]对HPIC法进行了方法学的评价,此法检测Hcy最低浓度为1μmol/ L,Hcy浓度在6μmol/L~160μmol/L范围内有良好的线性结果;孟昭亨等[2]利用HPIC柱前衍生化法测定Hcy的最小检出量为0.125 μmol/L,批内差异为CV1.3 免疫测定方法该法应用特异性的抗S腺苷同型半胱氨酸单克隆技术,采用荧光偏振法(FPIA)或酶联免疫方法(ELISA)测定Hcy。
其原理是血浆的血清中的Hcy被还原试剂还原为游离的Hcy,游离的Hcy又被酶试剂作用转变为S腺苷同型半胱(SAH),血清中的SAH和磁颗粒中的SAH竞争标记Y啶酯的AB结合,自动执行分析程序。
免疫测定方法的优点是此方法快捷、操作简单、自动化程度高,可减少人为误差,具有良好的准确度与精密度且可测定大量标本,适合大多数临床实验室应用。
2 Hcy测定的临床应用2.1 心脑血管疾病Hcy与低密度脂蛋白(LDL)反应经吞噬细胞吞噬,细胞“破碎”沉积于血管壁,通过一系列反应并有副产物氧化放出,损伤血管壁后,平滑肌细胞分裂修补造成“瘢痕”。
临床上,在跟踪5年近1 500个高Hcy的男性中发现,排除其他因素后,其心脏病的概率增加3倍。
氧络丁酸法是一种测定血清同型半胱氨酸的方法,也称为荧光偏振免疫分析法。
这种方法主要利用荧光偏振技术,通过特定的荧光标记物与血清中的同型半胱氨酸结合,形成具有特定荧光偏振性质的复合物。
然后通过测量该复合物的荧光偏振程度,来推算出血清中同型半胱氨酸的浓度。
其具体操作步骤包括将血清样本与荧光标记物混合,让荧光标记物与同型半胱氨酸发生特异性结合。
接着,通过荧光偏振仪器测量样本的荧光偏振程度,并根据标准曲线计算出同型半胱氨酸的浓度。
此外,氧络丁酸法的优点是灵敏度高、特异性强、操作简便、自动化程度高,适用于大规模样本的检测。
但需要注意的是,该方法的准确性和可靠性受到多种因素的影响,如样本的处理、荧光标记物的选择、仪器的校准等。
因此,在使用氧络丁酸法进行同型半胱氨酸测定时,需要严格控制各种操作条件,以确保结果的准确性和可靠性。
小氯同型半胱氨酸(Hey丿试剂盒使用方法檢测范囲:96T 0.8 prnol/L -20 pmol/L使用目的:本试利盒用于测走小亂血请、血浆及相关液体样本中同型半脱氨酸(Hey丿令量。
实验原理本试利盒应用玖抗体夹心法测定标本中小亂同型丰脫氨酸(Hey )木平。
用纯化的小亂同型丰號氨酸C Hey )抗体包彼微孔板,制成固相抗体,往包彼单抗的微孔中依次加入同型氨酸(Hey ),再与HRP标记的同型丰脱氨酸(Hey )抗体结金,形成抗体■抗原■酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB疫HRP酶的傕化下转化成蓝色,并疫酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深肉和样品中的同型丰脱氨酸(Hey )呈正相关。
用酶标仪A 450nm 长下测定吸光度C OD值),通过标准曲线计算样品中小亂同型丰號氨酸(Hey )浓度。
试利盒组成标要求k 标本采集后尽早进行提取,提取按相关丈献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于・20°C保存,但应避免反复冻融2.不能检测令NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化扬酶的(HRP )涪性。
操作步骤1. 标准火的本试利盒提供原信标准品一支,用户可按照下列图表疫小试管中进行稀2. 加样:分别设空自孔(专勺对照孔不加样品及酶标试利,其余各步操作相同丿、标准孔、待测样凤孔。
亦酶标包彼板上标准凤准确加样50(11,待测样醃孔中先加样醃稀猝液40(11, 然后再加待测样品10)11 (样凤最终稀猝度为5信丿o加样将样為加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板朕封板后置37°C温.育30分钟。
4. 配液:将30信浓缩洗涤液用蒸镭水30信稀猝后备用5. 洗涤:小心揭掉封板朕,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5 次,柏干。
6. 加酶:每孔加入酶标试利50(11 ,空自孔除外。
7. 温育:操作同3o8. 洗涤:操作同5o9. 显色:每孔先加入显色利A50|il,再加入显色利B50pl,轻轻震荡混匀,37°C避光显色15分钟.10. 终止:每孔加终止液50(1, 1终止反应(此时蓝色立转黄色丿。
同型半胱氨酸酶法和色谱法
同型半胱氨酸的检测方法主要有两种,分别是酶法和色谱法。
1.酶法:氧化型的Hcy被还原为游离Hcy,游离的Hcy 在Hcy-甲基转移酶催化下与S-腺苷甲硫氨酸(SAM)反应生成甲硫氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH),SAH被SAH-水解酶水解形成腺苷和Hcy,形成的Hcy进入Hcy-甲基转移酶催化的转化反应,形成循环反应,这个循环反应导致了检测信号的明显放大,形成的腺苷立即脱氢转化为次黄苷和氨,氨进一步在谷氨酸脱氢酶催化下和NADH反应,将NADH转变为NAD+。
在340nm处检测NADH减少造成的吸光度下降量与样品中同型半胱氨酸的浓度成比例。
2.色谱法:高效液相色谱法(HPLC)是测定血中Hcy的水平的方法。
因色谱固定相对不同物质的吸附力不同,因此流动相将其洗脱下来的次序也不同,根据这一原理将样品中的不同物质分开,以荧光检测器检测洗脱下Hcy-荧光物质复合物的荧光强度,将其与标准品/内标的比值进行比较和计算,就可以测定血中Hcy的水平。
同型半胱氨酸(HCY)测定试剂盒(酶循环法)说明书【产品名称】同型半胱氨酸(HCY)测定试剂盒(酶循环法)【包装规格】a)试剂1:1×18mL试剂2:1×5mLb)试剂1:1×33mL试剂2:1×9mLc)试剂1:2×66mL试剂2:2×18mLd)试剂1:1×66mL试剂2:1×18mL【预期用途】用于体外定量测定人血清中同型半胱氨酸的含量。
高HCY水平可导致动脉血管壁内皮片状脱落,同时刺激平滑肌细胞增生,引起血管损伤,出现类似动脉粥样硬化性病理改变。
测定同型半胱氨酸常用于冠心病、中风、高血压、老年痴呆等疾病的辅助诊断[1]。
【检验原理】同型半胱氨酸被转化为游离型后,通过与共价底物反应,同时产生腺苷。
腺苷立即水解成氨和次黄嘌呤,氨在谷氨酸脱氢酶的作用下,使β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性(NADH)转化为NAD+,样本中的同型半胱氨酸的浓度与NADH的变化率成正相关。
【主要组成成分】试剂1主要组分磷酸盐缓冲液100mmol/L S-腺苷甲硫氨酸盐(SAM)0.1mmol/L β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性(NADH)0.2mmol/L 三(2羧乙基)磷氯化氢(TCEP)0.5mmol/L α-酮戊二酸 5.0mmol/L 修饰化的HCY甲基转移酶(HMTase) 5.0KU/L 谷氨酸脱氢酶(GLDH)10.0KU/L ProClin300适量试剂2主要组分磷酸盐缓冲液100mmol/L 修饰化的S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)水解酶 3.0KU/L 腺苷脱氨酶(ADA) 5.0KU/L ProClin300适量注:不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。
【储存条件及有效期】1.试剂原包装在2~8℃储存,有效期为12个月,生产日期、有效期见标签。
2.开口后的试剂在仪器仓中(2~8℃)可稳定30天。
【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200;日立HITACHI7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT008AS型;贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/ AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821;佳能TBA-FX8/TBA-120FR/ TBA-2000FR;罗氏cobas8000c702/cobas8000c701/cobas8000c502;西门子SIEMENS ADVIA1800/ADVIA2400;雅培ABBOTT ARCHITECTc8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200;西森美康SYSMEX BM6010/C;科华KHB卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ ZY-1280;迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/ CS-600A/CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/ CS-1400;迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/ BS-400/BS-430/BS-600/BS-800/BS-2000M;颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480;赛诺迈德SUNMATIK-9050型;雷杜Chemray420;英诺华D280;特康TC6010L;锦瑞GS400;普康6066。
同型膀胱氨酸-1 同型半胱氨酸ELISA试剂盒 预期用途 此试剂盒用于血浆或血清中总同型半胱氨酸的检测 简介 同型半胱氨酸是一硫醇基,含蛋氨酸胞内脱甲基作用产生的氨基酸 同型半胱氨酸分解产生半胱氨酸或蛋氨酸,维他命B6的转硫途径中同型半胱氨酸分解成半胱氨酸,经另一蛋氨酸合成酶途径在叶酸和钴胺素作用下回转成蛋氨酸 实验原理 此实验采用的是酶免竞争法,样本中的SAH和固化的SAH竞争结合微孔板上包被的抗SAH-抗体。洗涤除去未结合的,加入HRP标记的兔抗鼠二抗,加入底物液后在酶标仪上检测,样本中总的同型半胱氨酸浓度与其吸收值成反比 试剂盒成分: 1.试剂A(反应缓冲液) 1瓶 54ml (即用型)棕色盖 2.试剂B(腺嘌呤核苷/DTT) 1支 3.5ml(即用型)白色盖 3.试剂C(SAH-水解酶) 1支 3.5ml(即用型)白色盖 4.试剂D(酶抑制剂) 1瓶 55ml (即用型)橙色盖 5.试剂 E(腺嘌呤核苷脱氧酶) 1瓶 55ml (即用型)红色盖 6.试剂F(抗SAH抗体) 1瓶 25ml (即用型)绿色盖 7.试剂G(酶联结物) 1瓶 15ml (即用型)蓝色盖 8.试剂H(底物液) 1瓶 15ml (即用型)紫色盖 9.试剂S(终止液) 1瓶 15ml (即用型)黄色盖 10.洗涤液(浓缩10X) 1瓶 160ml(即用型)黑色盖 11.标准品系列 6x1.5ml 白色盖 浓度分别为2,4,8,15,30,50μmol/L 12.包被扳条 12x8孔 预包被 S-腺苷-L同型半胱氨酸 质控盒另配 (A x H00101) 3x1.5ml 实验准备和保存 1. 所有系列试剂须2--8℃贮存。 2. 样本预处理液(SPS)由试剂A、试剂B及试剂C配制而成。SPS只能保存1小时,需现配现用 3. 洗涤液在使用前,用双蒸水按1:10配制。配制后可在室温(18—25℃)存放4周 4. 试剂D和H须在黑色瓶中避光。 5. 微孔扳条须保持干燥,平衡至室温(18—25℃)至少需要2个小时,平衡至室温后才能开袋取出。 6. 剩余板条须密封在袋内保存。 7. 避免将试剂盒暴露在37℃ 样本收集和预处理 1. 因为同型半胱氨酸在采样后会在红细胞中合成;因而重要的是在取样后尽快离心分离出血清和血浆,样品应保持低于8℃至分离 2. 有数字显示EDTA抗凝血浆与采样后前两个小时的血清在测定同型半胱氨酸时有至少10%的差异。 3. 所进食的食物会影响循环同型半胱氨酸水平,富有蛋白质的肉类会提高总的同型半胱 同型膀胱氨酸-2
概述
血清同型半胱氨酸(Hcy)是人体内含硫氨基酸的一个重要的代谢中间产物,可能是动脉粥样硬化等心血管疾病发病的一个独立危险因子。
Hcy水平升高被认为是动脉粥样硬化性疾病独立的渐进性致病因素,血浆中同型半胱氨酸含量与遗传因素、营养因素、雌激素水平、年龄因素等有关,同型半胱氨酸又称为高半胱氨酸,Hcy的正常参考值随测定方法和种族人群的不同而有所不同,一般正常空腹血浆总Hcy水平为5-15μmol/L。
研究表明:Hcy每升高5umol/L脑卒中风险升高59%,缺血性心脏病风险升高32%;Hcy每降低5umol/L脑卒中风险降低24%,缺血性心脏病风险降低16%.Hcy水平与心血管事件风险呈正相关。
1 目的
规范血清同型半胱氨酸检测测试,确保检测结果准确性和重复性。
2 检测方法和原理
2.1检测方法:速率法
2.2检测原理:本产品基于一种新型酶法,样本中的氧化型Hcy被转化为游离型Hcy后,进行一系列循环反应,这种基于共价底物转化产物的酶循环反应系统大大提高了检测的灵敏度,主要是利用S-腺苷同型半胱氣酸(SAH)水解酶反应原理,在该反应中SAH被水解酶水解成腺苷和Hcy,腺苷立即水解成氨和次黄嘌呤,氨在谷氨酸脱氢酶的作用下,NADH 转化为NAD,样本中Hcy浓度与NADH转化速率成正比。
3 标本采集与保护
新鲜无溶血血清或EDTA、肝素抗凝血浆
遵守以下推荐的血清标本处理,运行和储存步骤
3.1用真空采样管采集血液标本时须遵守常规注意事项
3.2离心前使标本完全自然形成凝块
3.3全程保证样品管的密闭状态
3.4尽快分离血清,并及时测定
3.5如果标本不能在24小时内检测或运送标本时,将标本保存在4℃或更低温度的环境中:3.6冷藏标本室温放置20分钟后再测定;
3.7冷冻标本室温解溶后放置20分钟后再测定
3.8不符合标本处理
3.8.1溶血和乳糜血标本在报告单的备注栏注明
3.8.2标本量过少的标本,严重溶血和乳糜血标本与临床沟通并将标本退回,填写不合格标本拒接登记。
4 试剂和设备
4.1试剂
采用深圳奥萨制药有限公司试剂
4.1.1试剂组成
试剂1 S-腺苷甲硫氨酸(SAM) 0. 1 mM
烟酸胺腺嘌呤二核苷酸(NADH) 0. 3 mM
三(2-羧乙基)膦氯化氢(TCEP) 0. 5 mM
α—酮戊二酸(Oxoglutarate) 5. 0 mM
Hcy甲基转移酶(HMTase) 5.0 KU/L
试剂2 谷氨酸脱氢酶(GLDH)10.0 KU/L
S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)水解酶(SAHase) 3.0 KU/L
腺苷脱氨酶(ADA) 5.0 KU/L
4.1.2试剂准备;恢复室温后使用
4.1.3试剂保存
试剂2~8℃避光保存,并于有效期为12个月
4.2质控品
质控品为与试剂配套的临床化学质控品
4.3警告和注意事项
4.3.1只可用于体外诊断;
4.3.2试剂中含有防腐剂和稳定剂,可能存在一定刺激作用和毒性,请勿直接接触皮肤和眼睛,请勿吞服;
4.3.3试剂盒的测定结果仅作为临床各种疾病的辅助诊断依据
4.4仪器
便携式同型半胱氨酸监测仪
5 操作程序
5.1检测过程流程
签收样品→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存
5.2样本签收
严格按标本接收程序签收标本
5.3标本处理
以3000r/min,离心6~10min,分离血清上机测定,若标本不能及时检测,将分离血清冷藏于2~8℃的冰箱内
5.4标本检测
5.4.1从冰箱中取出试剂1 (R1)和试剂2 (R2),使试剂恢复至室温;
5.4.2按照便携式同型半胱氨酸检测仪操作方法,插卡,输入样本信息,确认;
5.4.3按照仪器提示,精密量取8 u 1样本加入试剂1的比色管中;
5.4.4启动反应,等到仪器发出提示音后,按照仪器操作步骤,精密量取40 u 1试剂2加入比色管中;
5.4.5仪器启动检测;
5.4.6自动检测完成后,读取检测结果或打印报告
5.5检验后标本保存
保存在标本冰箱内,保存期为7d
6 校准程序
6.1校准品的准备和储存
直接使用,2~8℃保存。
6.2校准条件
在室内质控失控,或更换仪器主要配件,或进行大保养后均需校准。
无特殊情况校准周期为21d
6.3校准程序
本仪器校准由厂家工程师负责校准。
7 质量控制程序
7.1控制品的准备和储存
试剂2~8℃避光保存
7.2控制品水平和分析批长度
每24h至少进行1批。
7.3质控操作程序
参见生化组的质量控制操作程序。
8 性能参数
8.1准确性线性偏差不超过±10%
8.2精密度 CV≤10
8.3线性范围3~48umol/L
9 生物参考区间
0~15umol/L
10异常结果的处理
结果与诊断不符或两次结果差异较大时,应及时与临床沟通。
11 临床意义
10%的冠心病患者与同型半胱氨酸升高有关,轻、中度同型半胱氨酸水平升高可使心血管疾病死亡危险性增加4-6倍,血浆总Hcy水平每升高5μmol/L则冠心病危险性男性增加60%,女性增加80%,相对危险性男性为1.6,女性为1.8,相当于总胆固醇每升高20mg/dL的危险性,因此成为冠心病的一个独立危险因素。
血浆同型半胱氨酸水平与冠状动脉病变血管的支数有一定关系,有人研究结果表明,单支、双支、多支血管病变的患者血浆Hcy水平呈逐级上升趋势。
并且与血管病变的严重程度有关,研究表明,冠状动脉狭窄≥99%的患者血浆Hcy水平明显高于狭窄<75%的患者。
血浆同型半胱氨酸水平还与冠心病患者的远期预后、生存率、病死率有关。
12 干扰因素
抗坏血酸≦0.5g/L对实验结果无影响。
胆红素≦855µmol/L对实验结果无影响。
血红蛋白≦5.0g/L对实验结果无影响。
乳糜≦2.0%对实验结果无影响。
13 安全防护措施
13.1血液标本运输必须保证运输过程的生物安全,防止溢出。
血液标本溢出后,应立即对污染环境和设备进行消毒处理;
13.2对标明有污染性疾病的血液标本应特别的防护,以不污染环境和保证工作安全为前提;
13.3在进行血液分析的一切操作过程中应按照《检验科生物安全管理程序》进行;
13.4与血液标本接触的一切器皿。
仪器组装/拆卸组合零件都应视为污染源,因此操作人员不小心接触到了这种污染源时,应立即用清水清洗被污染区域并进行消毒;
13.5如果操作人员皮肤或衣服上污染(沾到)了血液或废液应立即冲洗并进行消毒处理。
如果眼睛被溅入了血液或废液应立即用大量清水冲洗并进行必要的医疗措施。
13.6血液标本离心的过程中所有标本都应该加盖,离心后,开启试管时应注意防止气溶(雾)胶污染环境;
13.7所有检测过的血液标本及有关废物,都会给您带来潜在的危险及生物污染。
所有废弃样本及废物的处理方法同血液标本的处理程序。
14 参考文献
14.1《深圳奥萨制药有限公司试剂盒说明书》
14.2《临床实验室操作规程编写要求》
14.3《生化组仪器设备操作程序》
14.4《全国临床检验操作规程》第4版
15 支持文件
15.1《标本签收制度》
15.2《不合格标本拒收制度》
15.3《标本处理程序》
15.4《实验室安全管理程序》
15.5《检验科生物安全管理程序》
16 记录表格
16.1《不合格标本拒收登记表》16.2《标本复检登记表》。