TCID50的测定方法

半数组织培养感染剂量法测定淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒优势分析

连亨宁

成都军区总医院呼吸内科，成都 610083

摘要：目的 寻找简便的淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒LCMV病毒滴度测定方法。方法 采用半数组织培养感染剂量(TCID50)法检测LCMV病毒滴度，记录期间细胞形态变化。结果 实验后第5天获得与空斑实验一致的病毒滴度结果,但实验流程更为简单。结论

TCID50法测定LCMV病毒滴度相对于空斑实验更为简便。

关键词：半数组织感染剂量；空斑实验；淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒；病毒滴度

中图分类号：Q939.47 文献标识码：A

The advantage of Lymphocytic Choriomeningitis Virus

quantification by 50% Tissue culture infective dose

Lian Hengning

（Department of Respiratory Medicine ， Chengdu Military General Hospital ，Chengdu

610083）

Abstract：To determine a convenient method to quantify Lymphocytic Choriomeningitis Virus

(LCMV) ,LCMV titer was measured by the 50% Tissue culture infective dose (TCID50) method .

The result was got 5 days post-infection , similar with plaque assay ,but the protocol is easier

than plaque assay .This experiment showd that TCID50 is more convenient than plaques

实例1鸡新城疫油苗制备

（一）培养病毒 按实习四将鸡新城疫病毒接种于9～11d鸡胚的尿囊腔中，接种后48～72h收获病毒，供检测与制苗用。

（二）检测尿囊液病毒的EID50

1．EID50的概念 EID50为半数鸡胚感染量，是利用不同稀释度的病毒液接种鸡胚后，能使半数鸡胚发生感染的病毒量。

2．病毒EID50的测定

（1）稀释病毒 将收获的尿囊液充分混匀后取1ml，作10倍递进稀释至10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7…稀释度。

（2）接种鸡胚 每个稀释度接种9～11d SPF鸡胚5枚，接种量为0.1ml/枚，37℃温箱培养，逐日观察至120h，其间死亡的鸡胚及时拿出冷藏，至第5d时将所有的鸡胚置4℃冰箱中冷却4h或过夜，收获每枚鸡胚的尿囊液，分别存放。

（3）检测血凝价，判断感染情况 用微量血凝试验逐枚检测鸡胚尿囊液中病毒的血凝价，当HA≥1:128时判为感染。

3．根据血凝价计算EID50：EID50计算举例

(1)EID50测定结果见表实-5。

表实-5 EID50测定结果 (接种剂量0.1ml)

病毒稀释度 观察结果 累计结果

感染数 无感染数 感染% 感染数 无感染数 感染%

10-5 5 0 100 10 0 100 10-6 3 2 60 5 2 71

10-7 2 3 40 2 5 29

10-8 0 5 0 0 10 0

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1 / 2 病毒中和试验测定法

1. 固定病毒稀释血清法(α法) 本法用于抗血清的中和价。试验需先滴定病毒毒价，试验时将其稀释成每一单位剂量含200个TCID50，再将待检血清倍比稀释加等量200个TCID50/ml的病毒液，混匀后37℃1h，每一稀释度接种24孔细胞培养板4孔，每孔0.2ml。5%C02培养箱培养一定时间后，记录出现CPE孔数，以不出现CPE数和接种数的比为中和比值。按Karber法计算中和价。其公式如下：

Log TCID50=L+d（S-0.5）

（TCID50用对数计算，L为病毒最低稀释度的对数。d为组距，即稀释系数，在10倍系列稀释则为-1，S为各组CPE与接种数比值之和）

50%中和试验举例

血清稀释 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320

稀释度对数 -1 -1.3 -1.6 -1.9 -2.2 -2.5

每一接种剂量含病毒 100TCID50或 100LD50或100EID50或100ID50

中和比值 4/4 4/4 4/4 4/4 2/4 0/4

L=-1，d=-0.3，S=4/4+4/4+4/4+4/4+2/4=4.5

代入Karber公式：LogND50= -1－0.3*(4.5-0.5)=2.2

该抗血清ND50(半数中和单位)为10-2.2，即1/160，则其中和价为160 ND50/ml，可以简写成160。

2. 固定血清稀释病毒法(β法) 本法用于测定抗血清的中和指数。将病毒原液10倍系列稀释，分列于2排无菌管，第一排加等量正常血清（对照组）；第二排加待检血清（中和组），混匀后，置37℃1h，分别接种细胞板孔（或鸡胚、实验动物）进行培养，记录CPE（鸡胚、动物死亡数），计算TCID50（或LD50），按下式计算中和指数。

tcid50计算方法

TCID50计算方法。

TCID50是一种常用的病毒滴度计算方法，它是指50%组织培养感染病毒量（Tissue Culture Infective Dose 50）。在病毒学研究中，我们经常需要对病毒样本进行浓度测定，而TCID50计算方法就是一种常用的测定方法之一。下面将介绍TCID50计算方法的具体步骤和原理。

首先，我们需要准备好病毒样本和细胞培养物。病毒样本可以是我们从临床样本中分离得到的病毒，也可以是实验室中培养得到的病毒株。而细胞培养物则是我们用来培养病毒的细胞系，常用的细胞系有Vero细胞、MDCK细胞等。

接下来，我们需要进行稀释。首先将病毒样本进行一定倍数的稀释，然后将稀释后的病毒样本与细胞培养物混合，在培养皿中形成不同的稀释度。每种稀释度都要设置3个平行样本，以确保实验结果的准确性。

然后，将培养皿放入恒温培养箱中进行培养。在培养的过程中，病毒会感染细胞并复制，最终形成病变。我们观察培养皿中的病变情况，根据病变的程度来确定病毒的滴度。

最后，根据病变的程度，利用统计学方法计算出TCID50。通常采用Reed-Muench法来进行计算，该方法通过对病毒感染的阳性和阴性结果进行统计学分析，最终得出TCID50的数值。

总的来说，TCID50计算方法是一种常用的病毒滴度计算方法，它通过对病毒感染细胞的情况进行观察和统计学分析，来确定病毒的滴度。这种方法简单、快捷，并且能够得到比较准确的结果，因此在病毒学研究中得到了广泛的应用。希望本文介绍的TCID50计算方法对您有所帮助。