生物化学实验I 教学大纲
10．实验课程的教学任务、要求和教学目的
10.1 教学任务
生物化学是研究生命的化学，是生物学科的重要专业基础课，生物化学实验在整个生物化学教学中占有十分重要的地位。通过实验课程教学，使学生了解和掌握生物化学实验的基本方法和技术，了解生物大分子（蛋白质、糖、核酸等）的分离、制备、纯化、分析和鉴定等技术，具备初步的知识应用和科学研究能力。
10.2 教学要求
从培养学生综合实验技能的角度考虑，将本实验设定成综合性大实验，由于涉及的学科知识比较广泛，所需实验仪器比较复杂，实验时间较长，处理因素多，因此课前充分的准备工作是实验顺利进行和获得真实实验结果的重要保证。这就要求学生在课前必须按照实验预习要求认真预习和准备，实验过程中认真掌握所需仪器的使用、所需实验技术的操作原理和方法。在实验过程当中应遵守实验室规章制度，有序进行实验，严格按照规定程序操作，全面观察，准确如实记录实验数据。实验结束后，做好善后工作，清洁整理实验器具并清点归还，经指导教师检查无误后方可离开实验室；及时整理实验记录和数据，按要求认真独立完成实验报告，并按时提交；积极参加课后讨论。
10.3 教学目的
生物化学实验技术作为生命科学研究的主要方法和技术，为其它学科的学习打下坚实基础，同时在生命科学研究和生产实践方面也有较大的应用价值。为此，加强综合型实验的比例，减少了一般型(验证型)实验，按常规生化仪器的使用、
生物活性物质的测定、生物大分子分离制备技术、层析技术、电泳技术、分光光度技术和生化分析技术等几大系列进行优化和整合，使学生掌握组织制备、离心、层析、电泳和分光光度法等基本生化技术，掌握氨基酸、蛋白质、核酸、酶、定量分析及分离提纯方法。强化学生基本实验技能的训练，强化综合能力的培养。通过生物化学实验，使学生熟练掌握所需仪器的使用、所需实验技术的操作原理和方法，锻炼学生的动手能力和分析问题解决问题的能力，培养学生合作精神，有利于对学生实践能力、综合素质和创新能力的培养。
11．学生应掌握的实验技术及实验能力
通过本课程的学习，使学生进一步了解生物化学实验的基本原理，掌握生物化学实验的基本技能和方法，使学生熟练掌握掌握酶的分离、制备、纯化、分析鉴定方法；通过蛋白质的提取、含量测定及氨基酸组成分析，掌握蛋白质分级、透析等技术；掌握Folin－酚法测蛋白浓度和柱层析（离子交换层析和分子筛层析）法纯化蛋白质等技术；掌握蛋白电泳技术；学会相关仪器设备的操作，培养学生动手能力和科学的思维能力，提高学生的创新意识、合作精神和解决实际问题的能力。培养学生学会正确地观察实验现象、记录实验结果、分析实验数据、撰写实验报告的能力。在提高学生动手能力的同时，培养学生具有初步解决问题的能力。
12．开设实验项目
开设实验项目一览表
注：设计性实验项目中，学生可以任选其一。
啤酒酵母蔗糖酶的提取、分离纯化、性质鉴定及反应动力学。主要实验内容
包括啤酒酵母蔗糖酶的提取及分离纯化，考马斯亮蓝法测定蛋白浓度，紫外分光光度法测定蛋白浓度，蔗糖酶活力测定，SDS-PAGE电泳法测定蔗糖酶纯度和相对分子质量，用正交试验法测定几种因素对蔗糖酶活性的影响，蔗糖酶米氏常数K m、最大反应速度V max和抑制剂常数K i的测定，测定并计算不同底物浓度时的反应速率，反应速率对底物浓度作图，再用1/V对1/S作图，计算出K m。
亲和层析法纯化胰蛋白酶。主要实验内容为从猪胰脏的粗提液中分离纯化胰蛋白酶。采用鸡卵类黏蛋白作为配基合成亲和吸附剂，从猪胰脏的粗提液中，通过亲和层析直接获得纯度很高的猪胰蛋白酶。
酶谱分析技术分析纤维素酶。酶谱技术是把纤维素酶的底物与丙烯酰胺共凝聚，经过SDS-PAGE电泳或者非变性PAGE电泳后，将凝胶放于酶作用的缓冲液之中，通过酶对凝胶中底物的催化反应，从而检测出样品中的酶的催化作用，酶系、同工酶的分布、相对分子质量、亚基的数量等技术指标。
大豆蛋白的提取与含量测定。主要实验内容为对大豆粉进行水、碱两步提取；分别采用Folin-酚法、微量凯氏定氮法、双缩脲法测定两步提取液提取的蛋白浓度；双向纸层析法分析大豆蛋白的氨基酸组成。
DNS-Cl法测定蛋白质及肽的N末端氨基酸。主要实验内容为水解氨基酸，采用荧光试剂二甲氨基萘磺酰氯(DNS—Cl) 在碱性条件下与氨基酸(肽或蛋白质)的氨基结合成带有荧光的DNS—氨基酸(DNS—肽或DNS—蛋白质)，DNS—肽或DNS—蛋白质进行测定。采用聚酰胺薄膜层析法进行分离和鉴定后，进行定性及定量测定，识别蛋白质的自由N末端氨基酸。
细胞色素C的制备及测定。主要实验内容为以新鲜猪心为原料，经过酸溶液抽取，人造沸石吸附及三氯乙酸沉淀得到细胞色素C粗品，然后再用离子交
换层析法将粗品纯化。采用分光光度法测定细胞色素C含量，用测压法测定其生物活性。
氯化钠的称量和乙醇的移取。主要内容为学习并了解称量和微量移液技术的基本原理，掌握相关仪器设备的使用方法，掌握固体称量与液体量取的要点和方法。
发酵液的离心分离。主要内容为学习并了解离心技术的基本原理，掌握相关仪器设备的使用方法，学会液体离心的注意事项和操作方法。
铬酸钾溶液吸光度的测定。主要内容为学习并了解光谱技术（Uvmini-1240紫外可见分光光度计）的基本原理，掌握相关仪器设备的使用方法，学会测定样品吸光度的操作方法。
DEAE52纤维素离子交换柱的制备。主要内容为学习并了解离子交换层析技术的基本原理，掌握相关仪器设备的使用方法，掌握如何制备DEAE52纤维素离子交换柱。
G75葡聚糖凝胶柱的制备。主要内容为学习并了解凝胶过滤层析技术的基本原理，掌握相关仪器设备的使用方法，掌握如何制备G75葡聚糖凝胶柱。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶的制备。主要内容为学习并了解SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的基本原理，掌握相关仪器设备的使用方法，学会制备SDS-聚丙烯酰胺凝胶。
常用试剂及溶液（缓冲液）的配制。主要内容为学习并了解常用试剂及溶液（缓冲液）的配制方法，能够熟练配置各种试剂。
电泳凝胶的条带分析。主要内容为学习并了解凝胶成像技术的基本原理，掌握相关仪器设备的使用方法，学会对电泳凝胶进行分析。
