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二苯乙烯苷含药血清作用于老年性痴呆细胞模型的最佳条件筛选_黄忠仕

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参考文献:[1] 贵州省地方志编撰委员会.贵州省志民族志[M].贵阳:贵州民族出版社,2001:437,688.[2] 吴汝康,吴新智,张振标.人体测量方法[M].北京:科学出版社,1984.[3] 邵象清.人体测量手册[M].上海:上海辞书出版社,1985.[4] 皮建辉,雷鸣枝,吴亿中,等.湖南苗族、侗族头面部10项形态特征研究[J].南华大学学报:医学版,2006,34(3):347-350.[5] 李辉,潘方方,张敏华,等.滇西北8个民族群体面貌特征观察的聚类分析[J].复旦大学学报:自然科学版,2001,40(5):569-578.[6] 李培春,吴荣敏,浦洪琴,等.贵州土著仡佬族体质特征[J].解剖学杂志,2004,27(5):558-563.收稿日期:2009-03-02

二苯乙烯苷含药血清作用于老年性痴呆

细胞模型的最佳条件筛选¹

黄忠仕,张树球,农嵩,李韬,李曙波(右江民族医学院生化教研室,广西百色533000)

摘 要:目的 确定二苯乙烯苷含药血清作用于老年性痴呆(AD)细胞模型的最佳条件。方法 利用细胞计数、MTT方法确立B淀粉样蛋白(AB)25-35片段在建立AD细胞模型时的浓度及筛选二苯乙烯苷含药血清作用的最佳浓度,分别观察不同浓度血清及不同浓度AB25-35对AD细胞模型存活率的影响。结果 各种血清以5%浓度组的细胞存活率最高。在5%血清浓度下,AB25-350Lmol/L和5Lmol/L浓度组中各含药血清组细胞存活率均明显高于正常大鼠血清组(P<0.05或P<0.01),但在10Lmol/LAB25-35浓度时差异无显著性。结论 选用5Lmol/LAB25-35及5%血清浓度建立NG108-15AD细胞模型及药效考察体系较为合适,在此条件下能客观地评价二苯乙烯苷含药血清的药效。关键词:二苯乙烯苷;痴呆,老年性;B淀粉样蛋白;NG108-15细胞中图分类号:R971+.9 文献标识码:A 文章编号:1001-5817(2009)03-0343-03doi:10.3969/j.issn.1001-5817.2009.03.002

TheoptimumconditionsforscreeningofTSG-containingserumaffectoncellmodelofAlzheimer.sdisease

HUANGZhong-Shi,ZHANGShu-qiu,NONGSong,LITao,LIShu-bo

(DepartmentofBiochemistry,YoujiangMedicalCollegeforNationalities,Baise,Guangxi533000,China)

Abstract: Objective ToconfirmtheoptimumconditionsofTSG-containingserumaffectoncellmodelofAlzheimer.sdisease(AD). Methods CellcountingandMTTtechniquewereusedtodeterminetheoptimumcon-centrationofamyloidB25-35(AB25-35)anddrug-containingseruminestablishingcellmodelofAD,thenob-servedthecellsurvivalrateofthecellmodelaftertreatedwithdifferentconcentrationofrat.sserumandofamyloidB25-35,respectively. Results 5%concentrationofserumresultedinthehighestcellsurvivalrateamongallkindsofserum.Atthe5%concentrationofserumcondition,thecellsurvivalrateofdrug-containingserumgroupswerehigherthanthenormalserumgroupat0Lmol/Land5Lmol/LconcentrationofAB25-35(P<0.05orP<0.01),buthadnodifferenceat10Loml/Lconcentration. Conclusions Itistheoptimumconditiontoselect5Lmol/LconcentrationofAB25-35and5%concentrationofdrug-containingserumtoestablishtheNG108-15cellmod-elofADandthebestsystemtoassessthedrugefficacy.UndertheseconditionscanbeobjectivelyassessedthedrugefficacyofTSG-containingserum. Keywords: 2,3,5,4.-tetrahydroxy-stilbene-2-O-B-D-glycoside;dementia,senile;amyloidbeta-protein;NG108-15cells)343)2009年 右江民族医学院学报 第3期

¹基金项目:广西教育厅资助项目(编号:桂教科200420-11) 用动物模型研究老年性痴呆(AD)能够反映整体水平的变化以及行为和记忆功能的改变,但由于体内复杂因素的影响,对某些特殊类型细胞功能及细胞结构、酶、离子及其通道、受体的研究却较困难。动物细胞的体外培养成功弥补了这一缺陷。利用细胞培养法建立AD细胞模型已经成为现代生物医学研究AD的重要手段[1,2]。我们将B淀粉样蛋白(AB)25-35作用于NG108-15神经细胞,建立AD细胞模型,研究二苯乙烯苷(2,3,5,4c-tetrahydroxy-stilbene-2-O-B-D-glycoside,TSG)含药血清对AD细胞模型的影响。本实验主要探讨建立AD细胞模型的AB25-35的最佳浓度和二苯乙烯苷含药血清的最佳作用浓度,观察在不同浓度AB25-35和不同浓度二苯乙烯苷含药血清的细胞存活率。现报道如下:1 材料1.1 动物 健康3月龄Wistar大鼠60只,雌雄兼用,体重200~250g,由广西医科大学实验动物中心提供(许可证号:SCXKG桂2003-0003,实验动物使用许可证:SYKG桂2003-0005)。1.2 主要药品与试剂 二苯乙烯苷:由本教研室根据有关文献[3,4]提取;石杉碱甲(豫中制药厂生产,批号:H10940156);AB25-35片段,环磷酸腺苷(cAMP),青霉素(Penicillin)G,硫酸链霉素,MTT(以上试剂由Sigma公司提供);HAT(次黄嘌呤/胸腺嘧啶核苷/氨甲喋呤,Gibco公司提供);胎牛血清(FBS),DMEM培养基(由Hyclone公司提供)。1.3 主要仪器 CO2培养箱(ThermoForma公司),倒置显微镜(南京江南光电股份有限公司),酶标仪(Metertech公司)。1.4 实验细胞株 NG108-15细胞:由广西中医学院钟振国教授惠赠。2 方法2.1 含药血清的制备及实验血清浓度的选择 将健康的3月龄Wistar大鼠60只,随机分为3组,每组20只:¹正常对照组;º石杉碱甲组;»二苯乙烯苷组。各组根据成人治疗量换算为大鼠用量,用高剂量灌胃。每天灌胃量0.5ml/100g体重,二苯乙烯苷按0.3g/kg体重,石杉碱甲按0.02mg/kg体重,正常血清组给相应体积的生理盐水,每天1次,连续灌胃10天,于末次给药后2h,用20%乌拉坦腹腔麻醉,腹主动脉抽血,离心分离血清,56e灭活30min,无菌过滤,即得相应的含药血清。将各组含药血清和正常对照组血清分别加入HAT、双抗和DMEM培养液,配成含5%、10%、20%的含药血清和正常对照组血清DMEM培养液(各组HAT和双抗的终浓度均为1%),培养NG108-15细胞,以生存率为指标,选择细胞生长状态最好的血清浓度为实验血清浓度。2.2 AB25-35浓度的选择 将AB25-35溶于高压灭菌后的生理盐水,配成250Lmol/L母液备用。在筛选出最佳实验血清浓度的基础上,分别比较大鼠血清在AB25-350Lmol/L、5Lmol/L和10Lmol/L浓度时的细胞生存率,确立AB25-35片段在建立细胞模型时的最佳浓度。2.3 AD细胞模型的建立 将NG108-15细胞加入细胞增殖液(5%FBS加DMEM加1%HAT加1%双抗),在10%CO2、37e条件下培养1天,然后加入较适浓度AB25-35片段,继续培养1天后,即建成AD细胞模型。以各含药血清或含正常对照组血清DMEM培养液更换原培养液,仍加入上述较适浓度AB25-35片段以维持AD细胞模型。培养2天后进行观察、分析。2.4 细胞存活率观察 细胞直接置于光学显微镜下观察其形态及计数其存活率。在培养板每孔上下左右中5个视野各拍片1张,然后在照片上计算培养板各组细胞的数目,将最初播下的细胞数定为基数(100%),然后将各组细胞与原播种细胞数相比得出各组结果。2.5 MTT测定法 吸弃待测细胞培养孔内培养液,加无血清DMEM液100Ll/孔,MTT液20Ll,置于37e、10%CO2条件下4h,出现蓝色结晶后,加SDS-DMF100Ll/孔,于37e、10%CO2条件下过夜,用酶标仪于K=570nm处测OD值。2.6 统计方法 所有检测结果以(󰀁x?s)表示。用SPSS10.0统计软件分析,多组间均数比较采用方差分析,两组间均数比较采用t检验,显著性水平设在A=0.05。3 结果3.1 不同浓度血清对NG108-15细胞存活率的影响 见表1。5%和10%石杉碱甲和二苯乙烯苷含药血清细胞存活率明显高于同浓度的正常大鼠血清(P<0.01或P<0.05);在20%浓度时组间无差异。同一组内不同血清浓度对细胞存活率进行比较,5%明显高于10%和20%组,但10%和20%浓度组间却无差别。结果表明,5%浓度的正常大鼠血清和各含药血清对维持NG108-15细胞的良好生长状态较为合适,故选用5%的血清浓度培养液供实验用。

表1 不同浓度血清对NG108-15细胞存活率的影响 (󰀁x?s,%,n=16)血清类别血清浓度5%10%20%正常大鼠血清382?79239?36a211?46a石杉碱甲大鼠血清492?92b267?67a242?61a二苯乙烯苷大鼠血清494?87b284?76ac218?37a 注:同一种血清与5%浓度比较,a:P<0.01;同一血清浓度与正常大鼠血清比较,b:P<0.01,c:P<0.05

3.2 5%浓度血清培养液中不同浓度AB25-35对NG108-15细胞存活率的影响3.2.1 光学显微镜下观察细胞计数结果 见表2。在5%血清浓度下,AB25-350Lmol/L及5Lmol/L浓度组中石杉碱甲和二苯乙烯苷含药血清细胞存活率明显高于同浓度的正常大鼠血清(P<0.01);在10Lmol/L浓度时组间无差异。同一血清组内不同AB25-35浓度对细胞存活率进行比较显示:0Lmol/L浓度组细胞存活率明显高于5Lmol/L和10Lmol/L浓度组,石杉碱甲和二苯乙烯苷含药血清在AB25-355Lmol/L浓度组细胞存活率比10Lmol/L浓度组高(P<0.01)。以上结果表明,二苯乙烯苷含药血清在无AB25-35的毒性作用下,对正常细胞能促进增殖和维持良好的生长态势。在AB25-355Lmol/L浓度时,二苯乙烯苷和石杉碱甲含药血清能保护AB对NG108-15细胞的毒性杀伤作用,但在AB浓度较高(10Lmol/L)时则未能起到保护作用。

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《地黄饮子防治老年性痴呆的实验研究》

《地黄饮子防治老年性痴呆的实验研究》

《地黄饮子防治老年性痴呆的实验研究》

一、引言

老年性痴呆是一种进行性的神经退行性疾病，严重威胁着老年人的健康和生活质量。近年来，随着人口老龄化进程的加快，老年性痴呆的发病率和患病率呈现逐年上升的趋势。目前，老年性痴呆的防治方法仍然较为有限，因此寻找有效的预防和治疗手段成为了当前的研究热点。本文通过实验研究地黄饮子对老年性痴呆的防治作用，以期为该疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。

二、材料与方法

1. 材料

实验所用的地黄饮子由生地黄、山药、枸杞子等中药组成，由专业中药房提供。实验动物为老年性痴呆模型鼠，由专业实验室提供。

2. 方法

（1）模型制备：采用老年性痴呆模型鼠，通过药物诱导制备模型。

（2）实验分组：将模型鼠随机分为实验组和对照组，实验组给予地黄饮子治疗，对照组给予安慰剂治疗。

（3）给药方式及剂量：实验组按照一定剂量给予地黄饮子，对照组给予相同体积的安慰剂，连续给药一定时间。 （4）指标检测：分别在给药前、给药后检测模型鼠的学习记忆能力、神经元损伤程度、炎症反应等相关指标。

三、实验结果

1. 对学习记忆能力的影响

实验结果显示，给药后实验组模型鼠的学习记忆能力明显优于对照组，差异具有统计学意义。

2. 对神经元损伤的影响

通过检测神经元损伤程度的相关指标，发现实验组模型鼠的神经元损伤程度较对照组有所减轻，差异具有统计学意义。

3. 对炎症反应的影响

实验结果显示，实验组模型鼠的炎症反应程度较对照组有所降低，差异具有统计学意义。

四、讨论

本实验研究结果表明，地黄饮子对老年性痴呆具有一定的防治作用。首先，地黄饮子能够改善模型鼠的学习记忆能力，这可能与其中所含的多种中药成分有关，这些成分能够调节神经递质的释放和传递，改善神经元的功能和结构。其次，地黄饮子能够减轻模型鼠的神经元损伤程度，这可能是由于其具有抗氧化、抗炎、抗凋亡等作用，能够减轻神经元的损伤和死亡。最后，地黄饮子还能够降低模型鼠的炎症反应程度，这有助于减轻炎症对神经元的损害和促进神经元的修复。

何首乌成分及作用

何首乌成分及作用

何首乌的成分及作用

1 化学成分

何首乌主要含三类有效成分:二苯乙烯苷类化合物、蒽醌类化合物及聚合原花青素。此外还含有卵磷脂和多种微量元素 。二苯乙烯苷类化合物是一类具有显著药理活性的水溶性成分，其代表成分二苯乙烯苷，具有显著的降脂作用。李建北等从四川产何首乌块根的乙酸乙酯部分得到16个已知化合物，经理化常数和光谱分析，确定为大黄素，大黄素甲醚，大黄素-1，6-二甲醚，大黄素-8-甲醚，ω-羟基大黄素，ω-羟基大黄素-8-甲醚，2-乙酰大黄素，大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷，2-甲氧基-6-乙酰基-7-四基胡桃醌，苜蓿素，穆坪马兜铃酰胺，2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖甙，胡萝卜苷及没食子酸。周立新等又在何首乌乙酸乙酯不溶部分中分离得到五个单体，经理化常数测定，光谱分析及衍生物制备，确定了两个化合物的结构为新化合物。化合物I为1，3-二羟基-6，7-二甲基口山酮-1-O-β-D-葡萄糖苷，命名为何首乌乙素;化合物Ⅱ为2，3，5，4′-四羟基-二苯乙烯-2，3-2-O-β-D-葡萄糖苷，命名为何首乌丙素,其余三个单体有待于进一步分离、鉴定。

2 药理作用

2.1 抗衰老作用 许多学者认为，衰老动物体内积累大量脂质过氧化产物，并伴随超氧化物歧化酶活性的降低。实验结果表明，何首乌可明显降低老年小鼠脑和肝组织丙二醛含量，增加脑内单胺类递质含量，增强SOD活性，还能明显抑制老年小鼠脑和肝组织内单胺氧化酶-B的活性，从而消除自由基对机体的损伤，延缓衰老和疾病的发生。自由基学说认为，脂质过氧化物的生成和沉积可以引起一系列的衰老症状，因此脂质过氧化物的含量是评价衰老的主要指标之一,何首乌提取物对小鼠皮肤脂质过氧化物的生成具有非常明显的抑制作用，说明何首乌具有延缓皮肤衰老的作用，可以作为良好的皮肤抗衰老化妆品添加剂。此外，何首乌还能明显提高老年大鼠的外周淋巴细胞DNA损伤修复能力，通过抑制脑内单胺氧化酶-B活性，影响生物体中枢神经递质的含量，从而调节中枢神经活动，延缓大脑的衰老 。

二苯乙烯苷对Aβ25—35致NG108—15损伤的保护作用

二苯乙烯苷对Aβ25—35致NG108—15损伤的保护作用

右江医学２００８年第３６卷第５期　

●论著●　

二苯乙烯苷对Ａ』３２５—３５致ＮＧ１０８—１５损伤的保护作用　

黄忠仕，农　嵩，谢海渊，张树球，李韬，李曙波　

（右江民族医学院生化教研室，广西百色５３３０００）　・　５１７　・　

【摘要】　目的　观察二苯乙烯苷对Ａ［￣２５—３５诱导损伤的ＮＧ１０８—１５细胞生长、分化的影响。方法　以Ａ９２５—３５诱导ＮＧ１０８—１５　细胞建立痴呆细胞模型后加入二苯乙烯苷培养，观察ＮＧ１０８—１５细胞的生长状态、存活率、突起率及突起平均长度。结果　与细胞　模型组相ｔｆｉ，二苯乙烯苷组能在一定程度上抑制ＡＢ２５—３５对痴呆细胞的损伤作用，细胞生长状态良好，细胞存活率、突起率及突起平　均长度与模型组比较均有显著性差异（Ｐ＜Ｏ．０５或Ｐ＜Ｏ．０１）。结论二苯乙烯苷对Ａ口２５—３５诱导的ＮＧ１０８—１５细胞损伤具有保　

护作用。　【关键词】二苯乙烯苷；老年性痴呆；日淀粉样蛋白；ＮＧ１０８—１５细胞　文章编号：１００３—１３８３（２００８）０５—０５１７—０３　中图分类号：Ｒ　７４９．１０９．６５１　文献标识码：Ａ　

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｔｉｌｂｅｎｅ　ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ（ＴＳＧ）ｏｎ　ｉｎ　ＮＧ１０８—１５　

ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ａ［１２　５—３　５　

ＨＵＡＮＧ　Ｚｈｏｎｇｓｈｉ，ＮＯＮＧ　Ｓｏｎｇ，ＸＩＥ　Ｈａｉｙｕａｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｓｈｕｑｉｕ，Ｌ　Ｔａｏ，ＬＩ　Ｓｈｕｂｏ　

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｙｏｕｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ｛ｏｒ　

Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｂａｉｓｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ　５３３０００，Ｃｈｉｎａ）　

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＴＳＧ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＮＧ１０８—１　５　ｃｅｌｌｓ　ｗｈｉｃｈ　

二苯乙烯苷对Aβ25-35致NG108-15损伤的保护作用

二苯乙烯苷对Aβ25-35致NG108-15损伤的保护作用

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二苯乙烯苷对Ａβ２５－３５致ＮＧ１０８－１５损伤的保护作用

作者：黄忠仕 农 嵩 谢海渊 张树球 李 韬 李曙波

来源：《右江医学》2008年第05期

【摘要】 目的 观察二苯乙烯苷对Aβ25-35诱导损伤的NG108-15细胞生长、分化的影响。方法 以Aβ25-35诱导NG108-15细胞建立痴呆细胞模型后加入二苯乙烯苷培养，观察NG108-15细胞的生长状态、存活率、突起率及突起平均长度。结果 与细胞模型组相比，二苯乙烯苷组能在一定程度上抑制Aβ25-35对痴呆细胞的损伤作用，细胞生长状态良好，细胞存活率、突起率及突起平均长度与模型组比较均有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）。结论 二苯乙烯苷对Aβ25-35诱导的NG108-15细胞损伤具有保护作用。

【关键词】 二苯乙烯苷；老年性痴呆；β淀粉样蛋白；NG108-15细胞

文章编号：1003-1383(2008)05-0517-03中图分类号：R 749.109.651文献标识码：

Protective effect of stilbene glucoside（TSG） on in NG108-

cellular injury induced by Aβ25-

【Abstract】 Objective To observe the effects of TSG on the growth and differentiation of

NG108-15 cells which were injured by Aβ25-35.

Methods NG108-15 cells were cultured by Aβ25-35 to establish cell model of Alzheimer's

disease (AD) and then were cultured with TSG. The growth state,survival rate,neurite outgrowth and