pH值对人离体血红蛋白结构及功能的影响

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2009.25(增刊)
生物物理学报 《分子生物物理学》专题墙报

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FBP21激活剪切的功能。我们用三维核磁共振波谱学的方法解析了FBP21双WW结构
域的溶液结构。并用不同的富含脯氨酸的小肽作了化学位移干扰实验,发现这两个WW
结构域不但能结合第三类WW结构域的配体(PPR motif)也能识别第二类配体序列
(PPLP)。两个WW结构域上的结合界面都包含了XP和XP2两个配体结合区域。更有
意义的是,两个WW结构域是通过一个高度柔性的linker区域连接起来的。蛋白质骨
架动力学研究以及残留偶极耦合实验显示了这个连接区域的柔性使得两个结构域之间
具有相互运动,他们之间的相对空间取向不是固定的。用选自相互作用蛋白SIPP1的不
同长度的小肽做等温量热滴定发现,FBP21的两个WW结构域一起结合配体能够获得
更强的亲和力。化学位移干扰实验进一步证实了两个WW结构域与配体的强亲和力正
是需要他们之间连接区域的柔性来实现。两个WW结构域连同其柔性的连接区域实现
了FBP21在前体mRNA剪切中的功能。结构方面的研究很好的解释了FBP21在前体
mRNA剪切以及与SIPP1相互作用中的表现。我们的研究拓展了对FBP21在生物学功
能中的认识,并且为理解其在前体mRNA剪切中的功能提供了结构基础。

关键词:FBP21,WW结构域,前体mRNA剪切,蛋白质溶液结构
致谢: 我们非常感谢 M. Bedford博士和姚雪彪教授慷慨的赠与抗体和克隆载体。我们感
谢杨印山博士在结构解析中提供的诸多帮助。我们感谢Nicole Sente提供的技术支持和
许超博士提出的许多富于创造性的想法。我们感谢国家科技部,中国自然科学基金委和
比利时弗兰芒科学研究基金提供的资金支持。

参考文献
1. Bedford, M. T., Reed, R., and Leder, P. (1998) Proc Natl Acad Sci U S A 95(18), 10602-10607
2. Sudol, M. (1996) Prog Biophys Mol Biol 65(1-2), 113-132
3. Llorian, M., Beullens, M., Andres, I., Ortiz, J. M., and Bollen, M. (2004) Biochem J 378(Pt 1), 229-238

P5-23
pH值对人离体血红蛋白结构及功能的影响
吴正洁,康立丽,黄宝添,吴越,罗曼,黄耀熊
暨南大学生物医学工程系,广州
510632 (tyxhuang@jnu.edu.cn)

目的:已知人血红蛋白的氧平衡曲线随PH值的变化而变化。同时,PH值会影响
血红蛋白分子的结构,如蛋白亚基的聚合或寡聚体的解聚。随着PH值的变化,蛋白的
解聚会直接导致其四级结构的改变。但目前仍不清楚pH值的变化会给血红蛋白的一级、
二级、三级、四级结构带来什么样的变化。为此,本实验通过三种不同技术(激光动态
光散射,紫外可见光谱,激光显微共焦拉曼散射技术)的测定分析,获得血红蛋白其蛋
白结构及功能的相关信息,以助于更好地了解血红蛋白的变构效应与其结构之间的关
系。

材料与方法:人血红蛋白的提取按有关报道的标准方法进行。pH值范围从5.4到
9.0。调节血红蛋白的浓度到0.1mM。实验采用动态光散射法以获得不同pH值下蛋白的
粒径。紫外-可见光谱仪检测范围在350-700nm,波长的精确度为0.3nm。实验使用
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生物物理学报 《分子生物物理学》专题墙报

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Horiba JY公司生产的倒置显微激光共焦拉曼光谱系统(JY LabRam INV),激光器为激
发波长514.5 nm的Ar+离子激光器。照射到样品上的激光功率为6.68mw,激光焦点光
斑直径2µm,共焦孔径设置为200 µm,样品扫描曝光积分时间为10s。

结果:经测定发现,正常pH下,人血红蛋白四聚体的粒径为5.6nm左右。随着pH
值的升高或降低,蛋白粒径变为3.2nm左右,血红蛋白四聚体解聚成二聚体。说明在酸
性或碱性环境中,血红蛋白的四级结构被改变,一部分亚基与亚基之间发生断裂。紫外
可见光谱的结果显示,随着环境pH值的降低,血红素的吸收峰逐渐蓝移,从原先415nm
处蓝移至412nm处。同时,随着pH值偏离正常生理条件范围,氧合血红蛋白(576nm)
吸收峰的高度下降,与此同时,高铁血红蛋白的吸光值却逐渐增大,表明随着环境pH
值的改变,血红素周围疏水微环境发生变化,血红素中的二价铁与水相互作用被氧化成
高铁,从而形成了高铁血红蛋白。激光共焦显微拉曼光谱结果表明,表征血红素卟啉环
信息的1358 cm-1处谱峰强度在酸性或碱性条件下,明显增强,间接地说明珠蛋白链所
形成的血红素口袋结构发生了变化,更暴露于水中,使血红素的拉曼谱强度增强。另一
方面,酸性条件下(特别是pH5.4),血红蛋白的拉曼谱信号的背景强度很高,提示血
红蛋白结构发生变化。原因可能是在酸性条件下,血红蛋白的组氨酸残基发生质子化,
转移氢键,使得拉曼背景较高。拉曼谱的结果也表明,血红蛋白二级结构中,α-螺旋在
减少,而无规卷曲在增加,说明有序度在降低,而无序度在增加。

结论:在酸性或碱性环境中,血红蛋白会从四聚体结构解聚成二聚体结构。并且,
伴随四级结构的变化,高铁血红蛋白的生成,血红蛋白的功能(氧合能力)在逐渐减弱。
血红蛋白的二级结构也从有序性较高的α-螺旋转变成无序的无规卷曲。

关键词: 血红蛋白; pH;结构功能;变构效应

P5-24
发卡Trpzip2折叠的网络分析
江学为 肖奕
华中科技大学物理学院 生物分子物理与模拟组 湖北武汉
430074

(xwjiang@smail.hust.edu.cn)

网络方法是研究多肽链和蛋白质折叠等高维自由能曲面的一种有效方法。这种方法
不需要将高维自由能曲面投影到二维平面,从而有效的避免序参数选择而导致的能量曲
面的信息丢失。在本文中,基于Markov Cluster (MCL) 算法,我们对折叠网络方法进行
改进,以有效的提高用网络方法研究蛋白质折叠的局域态和路径的准确性。在本文中为
了使每个节点内的所有结构一样以及避免节点数目过多,我们采用更为严格的节点定
义。我们用改进的方法对发卡trpzip2的折叠轨道自由能曲面进行了分析。通过分析,
我们发现除了找到自由能投影方法能找到的域外,还比较准确的识别了天然域和一个新
的域。而对于折叠路径,我们可以比较准确的区分出快折叠和慢折叠路径,同时我们还
发现在自由能投影图上相邻最近的域,在折叠路径上不一定相连。所以,该方法能够更
加准确的找出域,同时可以更加准确快速的分析折叠路径。