常见细菌鉴定流程

临床常见细菌的手工鉴定和结果判断一．细菌的鉴定步骤1、鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。

2、对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。

（我们这里一般都是预先纯化培养）+––+b）G，G，c，对待鉴定的菌种进行革兰染色，3、观察形态（Gc，Gb做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。

要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。

4、按鉴定质控单的要求填写好病人姓名，年龄，性别；标本类型，标本编号，送检日期等。

另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。

5、复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。

⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。

首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变细菌对染料的通透性）。

第一步：以结晶紫初染（染色液Ⅰ）第二步：以卢戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ）乙醇脱色（染色液Ⅲ）95%第三步：用．第四步：最后用稀释复红复染（染色液Ⅳ）⑵．触酶实验(HO实验)：22a.原理：具有过氧化氢酶的细菌能催化双氧水生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。

b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在洁净的玻片上涂开，滴加3%过氧化氢数滴，观察结果（立即有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性）。

要注意不能在血平板上进行实验，这样易出现假阳性；另外陈旧菌落要是进行实验可能会导致假阴性结果；还有不能在接种针或环上进行实验。

c.阳性对照用金黄色葡萄球菌，阴性对照用链球菌；试剂要避光置4℃冰箱保存。

d.应用：绝大多数含细胞色素的需氧和兼性厌氧细菌触酶实验阳性，链球菌属阴性。

临床常见细菌鉴定实验中我们一般用于区别葡萄球菌属（+），微球菌属（+），链球菌属（－）。

⑶．氧化酶实验（Kovac实验）：a. 原理：氧化酶又称细胞色素酶，是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。

细菌鉴定流程细菌鉴定细菌形态学鉴定16S rDNA 鉴定生理生化鉴定一、细菌形态学鉴定1.从-80˚Ϲ冰箱中取出菌株放4˚Ϲ复苏，轻柔混匀后用接种环接一环菌液在培养基平板上划线活化，根据菌株来源选择适宜的培养基。

2.放入培养箱倒置培养，实验室一般采用28˚Ϲ培养，特殊菌株依据该菌最适条件（时间、温度）培养24-48h。

3. 纯化：从活化培养基平板上挑取单菌落继续划板培养。

4. 观察记录菌落形态特征：大小（mm）、形状、干湿、透明度、颜色、边缘整齐还是，，，，，，，形状干湿透明度颜色边缘细菌大小（mm）注意事项：①接种划线应在酒精灯旁边操作②培养时应倒置培养，防止污染二、革兰氏染色1.涂片固定将纯化后的菌株进行革兰氏染色，滴一滴生理盐水于载玻片上，无菌条件下用接种环挑取少量菌落均匀涂布水滴中，使其自然干燥，菌面向上，经火焰固定。

注意事项：菌液涂片时不可过于浓厚，干燥、固定。

固定时通过火焰1~2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。

2.染色一般包括初染、没染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：（1）加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。

（2）加上碘液染色1分钟，水洗。

（3）加上95%酒精，摇动玻片，根据涂片厚度，脱色约20~60秒，水洗，吸去水分。

（4）加上蕃红后，染色1分钟，水洗。

（5）吸干或在空气中晾干后，油镜镜检。

3.结果观察：革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。

以均匀分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，都常呈现假阳性。

注意事项：①标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。

若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。

②玻片通过火焰温度不能太高。

③碘液变透明，则不能使用。

④水洗时动作要轻，沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗，以免把菌体冲掉。

三、16S rDNA 鉴定（16S rDNA只能鉴定到属，需进行生理生化、药敏实验等鉴定到种）1. 细菌复苏、活化、纯化同细菌形态学鉴定3. 挑取单菌落至少2-3个接到含有1ml灭菌纯水的1.5ml离心管中混匀。

食物中毒细菌培养鉴定流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!食物中毒是指由于食用了被细菌、毒素或其他有害物质污染的食品而引起的一系列急性消化系统症状。

方法2.3。

5 细菌的生理生化鉴定１、形态学观察采用插片法、埋片法, 对该拮抗细菌的菌落形态特征作镜检观察。

用革兰氏染色进行油镜观察。

① 革兰氏染色溶液和试剂：革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式碘液，95％乙醇，番红复染液等.试验步骤：（1) 涂片：取活跃生长期菌种按常规方法涂片（不易过厚）、干燥和固定。

(2) 初染：滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位1～２min，用水冲洗至流出水无色。

（3）媒染：先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖１min，倾去碘液，水洗至流出水无色。

(4）脱色：在上述涂片上流加95％乙醇溶液（一般20~30s）,当脱色至流出液无色时立即用水洗去乙醇。

（5）复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min,水洗,用吸水纸吸去残水晾干。

(6）镜检：用油镜观察。

②芽孢染色（1）制片:按常规方法涂片、干燥及固定。

（2）加热染色：向载玻片滴加数滴5％孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽并维持５min,加热时应注意补充染液，切勿让涂片干涸.脱色：待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色.(3）复染：用0.5％番红水溶液复染2min。

(4) 水洗:用缓流自来水冲洗至无色。

(5) 镜检：晾干载玻片后油镜镜检。

③鞭毛染色(硝酸银染色法）(1) 载玻片准备:将载玻片置于含洗衣粉或洗涤剂的水中煮沸 20min，然后用清水充分洗净,再置于 95%乙醇中浸泡，使用时取出在火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。

(2) 菌液制备：用接种环挑取菌落边缘菌体，悬浮于1～2mL无菌水中制成菌悬液，不能剧烈震荡。

（3) 制片:取一滴菌悬液滴到载玻片一侧，倾斜玻片,使菌悬液流向另一边,用吸水纸吸取多余的菌悬液,自然干燥。

（4）染色：滴加硝酸银染色A液覆盖3～5min，用蒸馏水充分洗去A液，再滴加B液染色约1 min，期间可用微火加热，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。

学习总结各位领导好，从5月25号开始，在周老师的实验室已经进行了十多天的培训，让我学到很多。

现将我在实验室学习的情况总结汇报。

一、细菌鉴定流程：1.表观观察鉴定：培养24h的菌落观察，如：菌落形态（圆形、椭圆形等）、大小（直径多少）、表面光滑度（光滑和粗糙）和隆起情况（扁平，隆起，凸起等）、边缘整齐、菌落的透明度、菌落（菌落颜色及是否产生色素等）及培养基的颜色（培养基是否变色）等菌落的描述。

显微观察，观察单个菌的形态（杆状，圆形，椭圆形，螺旋形等），是否有芽孢，荚膜的情况。

染色观察，革兰氏染色、芽孢染色、荚膜染色。

2.分子鉴定：细菌DNA的提取（试剂盒法）⑴将菌种接在适宜的液体培养基中，进行液体发酵，180rpm/min，24h培养。

⑵将摇瓶发酵的菌液加到1.5ml离心管中，10000rpm离心1min，倒掉上清液。

⑶向菌体沉淀中加入200ul缓冲液GA，震荡，至菌体悬浮。

如果是革兰氏阳性菌，则向菌体中加入120ul的Tris盐酸缓冲液，再加入80ul溶菌酶，37℃，30min以上。

⑷向离心管中加入20ul蛋白酶K溶液，混匀。

⑸加入220ul缓冲液GB，震荡15s，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

⑹加入220ul无水乙醇，充分震荡混匀15s，可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

⑺将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个离心柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

⑻向吸附柱CB3中加入500ul缓冲液GD，12000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

⑼向吸附柱CB3中加入600ul漂洗液PW，12000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

⑽重复操作步骤⑼。

⑾ 将吸附柱CB3放入收集管中，12000rpm 离心2min ，倒掉废液，将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

大肠埃希菌的鉴定流程及相应试验结果下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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临床上鉴定病原菌的流程
临床上鉴定病原菌的流程一般包括以下步骤：
1. 临床表现与病史：医生首先对患者的临床表现和病史进行详细的了解和分析，包括症状、体征和患病时间等。

2. 采集临床样本：医生根据患者的症状选择合适的临床样本进行采集，常见的样本包括血液、尿液、呼吸道分泌物、组织活检等。

3. 样本处理和预处理：采集到的样本需要进行处理和预处理，以去除干扰物质，并提高病原菌的浓度和纯度。

常见的预处理方法包括离心、滤液、稀释等。

4. 细菌培养：将处理后的样本接种到含有合适营养物的培养基上进行培养，以创造繁殖菌的适宜环境。

不同病原菌有不同的培养条件和时间，常见的培养方法包括血平板法、McConkey平板法等。

5. 菌落鉴定：根据菌落的外形、颜色、形态等特征进行初步鉴定，通常利用肉眼观察菌落的特征。

6. 生化试验：对初步鉴定的结果进行进一步确认，采用生化试剂进行特异性生化反应，通过观察反应结果来确定菌株的身份。

7. 抗生素敏感性试验：对鉴定出的病原菌株进行抗生素敏感性试验，确定其对不同抗生素的敏感性，以指导临床用药。

8. 分子生物学检测：对部分病原菌，尤其是难以培养或培养时间较长的病原菌，可以采用分子生物学方法进行检测，如PCR、DNA测序等。

9. 结果报告与解读：将实验结果整理并进行报告与解读，为临床医生提供指导性的诊疗意见。

需要注意的是，临床鉴定病原菌的流程会根据临床病情、样本类型、病原菌特性等因素有所差异，上述流程仅为一般步骤的参考。

临床微生物实验室细菌鉴定指南(续)温州医学院附属第一医院实验诊断中心潘钦石一．细菌的鉴定步骤1．鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。

2．对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。

（我们这里一般都是预先纯化培养）3．对待鉴定的菌种进行革兰染色，观察形态（G+c，G–b，G–c，G+b），做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。

要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。

4．按鉴定质控单的要求填写好病人姓名，年龄，性别；标本类型，标本编号，送检日期等。

另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。

5．复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。

⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。

首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变细菌对染料的通透性）。

第一步：以结晶紫初染（染色液Ⅰ）第二步：以卢戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ）第三步：用95%乙醇脱色（染色液Ⅲ）第四步：最后用稀释复红复染（染色液Ⅳ）⑵．触酶实验(H2O2实验)：a.原理：具有过氧化氢酶的细菌能催化双氧水生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。

b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在洁净的玻片上涂开，滴加3%过氧化氢数滴，观察结果（立即有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性）。

要注意不能在血平板上进行实验，这样易出现假阳性；另外陈旧菌落要是进行实验可能会导致假阴性结果；还有不能在接种针或环上进行实验。

c.阳性对照用金黄色葡萄球菌，阴性对照用链球菌；试剂要避光置4℃冰箱保存。

d.应用：绝大多数含细胞色素的需氧和兼性厌氧细菌触酶实验阳性，链球菌属阴性。

临床常见细菌鉴定实验中我们一般用于区别葡萄球菌属（+），微球菌属（+），链球菌属（－）。

细菌鉴定及检测方法
1、首先要获取被鉴菌种的纯培养菌落；
2、其次利用革兰染色或者抗酸染色确定其染色；
3、根据形态及其排列，按照科、属、类次序继续鉴定；
4、最后利用知识、经验等方法做出判断，得出结果，给出鉴定。

细菌鉴定方法：
1、生化鉴定：为细菌鉴定中最重要的一种鉴定手段，主要借助细菌对营养物质分解能力的不同及其代谢产物的差异对致病菌进行鉴定，生化鉴定包括蛋白质分解产物实验、酶触实验、堂分解产物实验等等方法。

2、血清鉴定：一般用于含有较多血清型的细菌，常用玻片凝集试验，也可以用免疫荧光法、协同凝集实验、间接血凝试验等方法灵敏的检测样本中致病菌的特异性抗原。

用已知的抗体检测未知待检测的细菌，或者采用已知抗原检测患者血清中的抗细菌抗体的效价，特异性比较高，一般在生化鉴定基础之上给出确定诊断结果。

3、分子生物学检测：一般适用于人工培养基无法生长或者生长速度过于缓慢以及营养要求高不容易培养的细菌，检测方法含有核酸杂交、生物芯片以及基因测序等等；其中核酸杂交包括斑点杂交等等技术。

4、微生物自动鉴定系统鉴定
5、质谱技术：利用新兴的电力生物质谱对细菌核酸、蛋白质、堕胎等物质进行质谱分析。

金黄葡萄球菌鉴定步骤金黄葡萄球菌鉴定步骤导语：金黄葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的致病菌，对人类健康造成威胁。

了解金黄葡萄球菌的鉴定步骤对于预防和控制感染具有重要意义。

本文将从简单到深入，介绍金黄葡萄球菌鉴定的全过程。

一、目的金黄葡萄球菌鉴定的目的是确认样本中是否存在金黄葡萄球菌，并进一步了解其特点和性质，以便进行预防和治疗。

二、前期准备1. 确保实验室安全：佩戴实验室必备的防护用品，如手套、口罩和实验室服。

2. 培养基准备：准备适用于金黄葡萄球菌生长的培养基，如牛肉膏蔗糖培养基（Baird Parker Agar）或含有亚硒酸钠的万氏精液胆盐柳糖培养基（Mannitol Salt Agar）。

3. 无菌操作：使用无菌技术，以避免外来细菌的污染。

三、鉴定步骤1. 样本处理：将待检样本在无菌条件下接种于培养基上，可以是涂布法、点状法或环法。

a. 涂布法：将待检样本取适量涂布在培养基表面。

b. 点状法：用匀浆针将待检样本点状刺入培养基内。

c. 环法：用无菌棉签从待检样本中取样后沿培养基表面画环。

2. 培养条件：将培养基培养于37℃恒温培养箱中，培养时间一般为24小时。

3. 金黄葡萄球菌特征：a. 形态特征：金黄葡萄球菌在培养基上生长为黄色或类似葡萄球菌的菌落，呈珠状集聚。

b. 生理特性：金黄葡萄球菌产生酶溶血性作用，可溶解红细胞，形成溶血环。

c. 生化特性：金黄葡萄球菌可产生凝固酶，将凝血蛋白溶解成凝胶。

4. 疑似金黄葡萄球菌鉴定：a. 形态观察：观察菌落形态，如颜色、形状和大小等。

b. 酶溶血性试验：将待检菌落在凝集红细胞上涂布，观察是否形成溶血环。

溶血环直径大于3毫米时，判定为金黄葡萄球菌的溶血作用阳性。

c. 产凝固酶试验：将待检菌悬液与凝血蛋白混合，观察是否形成凝胶。

若凝胶形成，即判定为金黄葡萄球菌的凝固酶阳性。

5. 进一步确认：a. 分子鉴定：可采用PCR等分子生物学方法，通过特定基因的检测来确认金黄葡萄球菌。

细菌的一般检验方法细菌是一类微生物，其存在对人类和动植物的生长发育、食品的加工贮藏和环境的卫生安全等方面都具有重要的影响。

因此，对细菌的检验成为了保障公共卫生安全和食品安全的重要手段。

细菌的一般检验方法包括了样品采集、预处理、培养、鉴定和计数等步骤。

首先，样品采集是细菌检验的第一步。

样品的采集应当严格按照规范进行，以避免外界污染的介入，影响检验结果的准确性。

不同类型的样品需要采用不同的采集方法，比如空气中的微生物可以通过空气采样器进行采集，而食品和水样则需要进行样品的取样和保存。

其次，样品的预处理是为了提高细菌的检出率。

预处理的方法包括了样品的稀释、过滤、离心、酶处理等。

这些方法可以去除样品中的干扰物质，使得细菌更容易被检测出来。

然后，培养是细菌检验的关键步骤。

将样品接种在含有营养物质的培养基上，利用恒温箱进行培养，有利于细菌的生长和繁殖。

不同的培养条件可以选择不同的培养基，比如选择富含营养物质的富养分琼脂培养基用于一般微生物的培养，选择含有特定抑菌剂的培养基用于选择性培养。

接下来是鉴定，即对培养后的细菌进行鉴定和分类。

鉴定的方法包括了生化试验、形态学观察、生理生化特性检测、分子生物学方法等。

通过这些方法，可以对细菌的种属进行初步鉴定，从而为后续的处理和控制提供依据。

最后是计数，通过计数可以了解样品中细菌的数量。

常用的计数方法包括了平板计数法、膜过滤法、MPN法等。

这些方法可以对样品中的细菌数量进行定量分析，为后续的风险评估和控制提供依据。

总的来说，细菌的一般检验方法包括了样品采集、预处理、培养、鉴定和计数等步骤。

这些方法的准确性和可靠性对于保障公共卫生安全和食品安全具有重要的意义，因此在实际操作中需要严格按照规范进行操作，以确保检验结果的准确性和可靠性。