痔瘘熏洗剂药效学剂量依赖性

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2012年7月山东中医药大学学报第36卷第4期

entiondeficithyperactivitydisorder[J].BehavBrainFunct,2005,1:9.[3]池霞,郭锡熔,陈荣华.注意缺陷障碍的动物模型[J].国外医学·儿科学分册,2004,31(6):317-319.[4]汪受传.中医儿科学[M].上海:上海科学技术出版社,2007:140.[5]韩新民.儿童多动症心肝火旺证探析[J].中医儿科杂志,2006,2(1):11-12.[6]殷春霞.韩新民教授治疗儿童多动症经验[J].成都中医药大学学报,2009,32(1):41-42.[7]韩新民,朱先康.安神定志灵治疗儿童多动症58例临床观察[J].河北中医,2004,26(12):898-899.[8]刘成全,韩新民,徐建亚,等.安神定志灵对ADHD模型鼠前额叶皮质和纹状体多巴胺D1、D2受体表达的影响[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(7):136-139.[9]刘成全,韩新民,徐建亚,等.安神定志灵对ADHD模型鼠纹状体多巴胺转运体表达的影响[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(23):89-93.[10]SwansonJM,KinsbourneM,NiggJ,etal.Etiologicsubtypesofattention-deficit/hyperactivitydisorder:brainimaging,moleculargeneticandenvironmentalfactorsandthedopaminehypothes-

is[J].NeuropsycholRev,2007,17(1):39-59.[11]陈艳,王丽珍,古桂雄.注意缺陷多动障碍与S100β蛋白关系的研究[J].中国儿童保健杂志,2009,17(2):140-141.[12]RobertDOades,MariaRDauvermann,BennoGSchimmel-

mann,etal.Attention-deficithyperactivitydisorder(ADHD)andglialintegrity:S100B,cytokinesandkynureninemetabolism-ef-fectsofmedication[J].BehavioralandBrainFunctions,2010,6:29.

痔瘘熏洗剂为朱秉宜教授临床验方,用于促进

肛肠疾病术后恢复,疗效明显[1]。但本制剂属于粗提

产品,且药用剂量较大,使用、携带不方便。本研究

拟对痔瘘熏洗剂进行基础研究,从药效学方面探讨

痔瘘熏洗剂对剂量的依赖性及进行剂量精简的可能

性。

1实验材料

1.1药物与仪器痔瘘熏洗剂:江苏省中医院制剂

部制备,批号110709。MODELDS571电子称;上

皿电子天平,数显恒温水浴锅HH-2,TGL-16G离心机,156PC紫外线分光光度计,天孚牌系列电子天平,

YLS-6B智能热板仪。

1.2动物SD大鼠,合格证号SCXK-(军),2007-012;

ICR小鼠[由美国癌症研究所(InstituteofCancer

Research)分送各国饲养实验,各国称为ICR],合格

证号SCXK-(苏),2007-0001。

1.3试剂模型对照组予生理盐水;痔瘘熏洗剂

组予痔瘘熏洗剂原液,给药剂量为0.488g/kg;低

剂量组予痔瘘熏洗剂组剂量的一半,给药剂量为0.244g/kg。

1.4统计学分析所有数据均以x±s表示;多组纵

向数据等级指标及实验主要定量指标采用One-Way

ANOAY方差分析,以P≤0.05为有统计学意义。

2实验内容及结果

2.1药效学研究

2.1.1大鼠肛缘肿胀实验[2]将30只SD雌性大鼠

,痔瘘熏洗剂药效学剂量依赖性研究

王艳花1,周青1,严士海2,朱萱萱2,达庆国2,吴本升1,陈玉根2

(1.南京中医药大学,江苏南京210046;2.南京中医药大学附属医院,江苏南京210029)

[摘要]目的:从药效学方面探讨痔瘘熏洗剂的剂量依赖性及进行剂量精简的可能性。方法:选取SD大鼠,采用大鼠肛缘肿胀及大鼠足跖肿胀实验观察痔瘘熏洗剂原方及低剂量组的消肿、抗炎作用;用小鼠热板法及小鼠扭体法观察实验组的镇痛作用。结果:痔瘘熏洗剂原方能显著抑制巴豆油致炎剂所致的大鼠肛缘肿胀,减轻角叉菜胶所致的足跖皮下水肿,明显降低大鼠足跖中前列腺素E2(PGE2)的含量,且能有效提高小鼠的痛阈水平,明显降低小鼠的扭体次数;低剂量组能抑制大鼠肛缘肿胀,减轻足跖皮下水肿,降低小鼠的扭体次数,但各作用均弱于痔瘘熏洗剂组。结论:痔瘘熏洗剂原方剂量与药效存在依赖性,剂量减半不是处方优化的可行途径。[关键词]痔瘘熏洗剂;药效学;抗炎;镇痛;大鼠;小鼠;实验研究[中图分类号]R285.5[文献标识码]A[文章编号]1007-659X(2012)04-0340-03

[收稿日期]2011-11-22[基金项目]江苏省中医药局科技项目(编号:LZ09035);江苏省六大人才高峰项目(编号:2010-WS-065)[作者简介]王艳花(1986-),女,江苏东台人,硕士研究生,主要从事肛肠病的中西医结合基础与临床研究。[通讯作者]陈玉根,主任医师,硕士研究生导师,E-mail:chenyg666@126.com

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体质量180~220g,随机分为模型对照组、痔瘘熏洗

剂组、低剂量组,每组10只。用脱毛剂(10%硫化钠)

将大鼠肛缘毛脱去,脱毛面积约2.0cm×1.5cm。造

模复制大鼠肛门水肿模型:按照4%巴豆油1.2份、

10%乙醇3份、20%吡啶6份、66%乙醚19.8份配成

致炎剂,把浸吸0.16mL巴豆油混合液的棉球插入6

周龄大鼠肛门内16s,建立大鼠肛门巴豆油肿胀模型。各给药组在造模后4h、24h、48h将药液涂于肛

门肿胀处,给药量为2.5mL,日2次,模型对照组予

生理盐水外涂肛门肿胀处。并于造模后的4h、24h、

48h以两脚圆规测整个肛门周围组织肿胀范围,比

较各组的差异。48h后处死大鼠,取肛周肿胀部位

组织,10%甲醛固定,做病理组织学检查。结果见表

1及图1。

表1各组对大鼠肛缘肿胀的影响(x±s,n=10)

用药剂量(m/g·kg-1)4h面积(S/cm2)24h面积(S/cm2)48h面积(S/cm2)模型对照组-2.17±0.362.66±0.432.39±0.38

痔瘘熏洗剂组0.4881.43±0.26△△1.30±0.12△△1.04±0.08△△

低剂量组0.2441.82±0.40△*1.51±0.30△△1.16±0.14△△

与模型对照组比较△P<0.05,△△P<0.01;与痔瘘熏洗剂组比较*P<0.05

病理结果说明:模型对照组直肠黏膜上皮坏死

脱落形成溃疡,肠腔内有大量炎性渗出物,上皮结

构破坏,大片黏膜缺损,黏膜下层内水肿,大量炎性

细胞浸润,肌层及浆膜层亦可见较多的炎性细胞浸

润,浆膜层血管扩张充血明显,肠管周围组织轻度

水肿伴少量炎性细胞浸润。痔瘘熏洗剂组病变较模

型组明显减轻,大部分黏膜上皮细胞及腺体恢复正

常,但黏膜层及黏膜下层仍有少许炎性细胞浸润。痔

瘘熏洗剂低剂量组病变较模型对照组明显减轻,大

部分黏膜上皮细胞及腺体恢复正常,小灶性上皮及

黏膜腺体缺损,但黏膜层及黏膜下层仍有少许炎性

细胞浸润。

病理评分:大鼠直肠及周围组织经过10%甲醛

溶液固定,常规取材,脱水,石蜡包埋,制片(4μm),

HE染色,由专业病理人员在光学显微镜下阅片,根

据病变程度分为-、+、++、+++,分别记为0分、1

分、2分、3分。三组综合病变评分分别为12.2分、1.1

分、2.1分。

病理结果提示:模型对照组主要表现为直肠及

肠管周围炎,肠管全层炎性细胞弥漫性浸润,黏膜

坏死溃疡,充血出血、水肿及炎性细胞浸润。痔瘘熏洗剂及低剂量组均能明显减轻直肠炎症及肠管周

围炎,使受损肠管大部分恢复正常,肠管周围炎基本

消退,效果以痔瘘熏洗剂原方较好。

2.2抗炎作用

2.2.1大鼠足跖浮肿实验[3]:SD雄性大鼠30只,体

质量210~230g,随机分为模型对照组、痔瘘熏洗剂

组、低剂量组,每组10只。在各组大鼠的后肢右足

部涂抹相应药物,给药体积为10mL/kg,模型对照组

用等量的生理盐水,连续3d,日2次。末次给药后在

其后肢右足跖皮下,注入0.1mL的角叉菜胶,后肢

左足作对照。在致炎后5min于致炎处再涂受试药

物,30min、1h、2h、4h、6h后用游标卡尺测量左右

足跖厚度,以左、右足跖厚度差为肿胀程度,比较各

组间差异。6h后处死大鼠,在踝关节上剪下致炎右

足,称质量,剪碎,置生理盐水6mL中浸泡2h,离心

浸泡液,吸取上清液0.1mL加0.5mol/LKOH-MeOH

溶液2mL,在50℃下异构化20min,用5mL甲醇稀

释,于波长为278nm处测定其吸光度(A)值,以每克

炎性组织相当的吸光度值表示前列腺素E2(PGE2)

的含量。结果见表2、表3。

2.3

镇痛作用图1三组大鼠肛缘的病理切片比较模型对照组低剂量组痔瘘熏洗剂组王艳花等:痔瘘熏洗剂药效学剂量信赖性研究

3412012年7月山东中医药大学学报第36卷第4期

2.3.1物理刺激法(小鼠热板法)[3]350取ICR小鼠,

雌性,体质量18~22g,将小鼠腹部被毛脱去,脱毛面积约为1.5cm×1.5cm。将小鼠舐后足或疼痛跳跃

为反应指标。去除舐后足或跳跃时间小于5s及大

于30s者,以此作为合格小鼠的筛选条件,将合格小

鼠30只,随机分为模型对照组、痔瘘熏洗剂组、低剂

量组,每组10只。各组小鼠于褪毛区涂抹相应药

物,给药体积为0.25mL,每天2次,连续5d,末次给

药后的30,60,90,120,180min分别测定小鼠痛阈

值,比较组间差异。如60s仍无反应以60s作为该

小鼠痛阈值。结果见表4。表2各组不同时间点足跖肿胀厚度比较(x±s,n=10)

用药剂量(m/g·kg-1)0.5h(d/mm)1h(d/mm)2h(d/mm)4h(d/mm)6h(d/mm)模型对照组-1.83±0.422.80±0.403.68±0.324.80±0.685.34±0.67

痔瘘熏洗剂组0.4881.09±0.54△△1.98±0.49△△3.11±0.63△△4.06±0.69△△3.60±0.57△△

低剂量组0.2441.26±0.33△△2.13±0.46△△3.34±0.61△△4.59±0.67△△*4.05±0.29△△

与模型对照组比较△△P<0.01,与痔瘘熏洗剂组比较*P<0.05

表3各组足跖PGE2含量比较(x±s,n=10)

用药剂量(m/g·kg-1)PGE2的含量模型对照组-0.272±0.049

痔瘘熏洗剂组0.4880.204±0.027△△

低剂量组0.2440.235±0.038△

与模型对照组比较△P<0.05,△△P<0.01

表4各组不同时间痛阈值比较(x±s,n=10)

用药剂量(m/g·kg-1)30min60min90min120min180min

模型对照组-12.8±2.4811.6±2.813.3±4.7113.0±1.1812.6±1.50

痔瘘熏洗剂组0.48825.4±8.15△23.1±7.7819.6±6.3615.9±3.67△△15.6±6.50