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鲁米诺化学发光抑制法测定卡托普利的含量
李献锐;倪瑞星;全江涛
【期刊名称】《河北医科大学学报》
【年(卷),期】2005(26)4
【摘要】目的探索利用化学发光测定卡托普利的新方法.方法基于卡托普利还原I2和I2-luminol化学发光反应,用化学发光测定卡托普利片剂中卡托普利的含量.结果方法的检出限为2.4×10-8g/mL,线性范围1.0×10-7g/mL～1.0×10-4g/mL,对1.0×10-5g/mL卡托普利进行11次平行测定,方法的相对标准偏差为2.6%.结论该法用于制剂中卡托普利含量的测定,与药典方法测得值基本一致.
【总页数】2页(P265-266)
【作者】李献锐;倪瑞星;全江涛
【作者单位】河北医科大学基础医学院医用化学教研室,河北,石家庄,050017;河北医科大学基础医学院医用化学教研室,河北,石家庄,050017;河北医科大学公共卫生学院中心实验室,河北,石家庄,050017
【正文语种】中文
【中图分类】R914.1
【相关文献】
1.一种新颖葡萄糖生化传感器的研制及其在鲁米诺电化学发光法测定葡萄糖含量的应用 [J], 叶瑞洪;王万宗;林振宇
2.流动注射化学发光抑制法测定水样中L-甲硫氨酸的含量 [J], 冯新长;张黎黎
3.鲁米诺流动注射化学发光法测定呋喃西林的含量 [J], 叶瑞洪;林谦;吴琳;卢贵文
4.鲁米诺-铁氰化钾流动注射化学发光法测定红葡萄酒中白藜芦醇的含量 [J], 刘玉萍; 姚悦悦; 蒋泳汝; 王修中
5.ClO^--鲁米诺流动注射-抑制化学发光法测定银杏黄酮 [J], 上官小东;王福生;郎惠云
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【主题】鲁米诺辣根过氧化物酶cl发光强度一、引言鲁米诺辣根过氧化物酶cl（luciferase）发光强度，是一种重要的生物化学特性，它在生物医学研究和生物技术领域起着至关重要的作用。
在本文中，我们将深入探讨鲁米诺辣根过氧化物酶cl发光强度的特性、应用及其前景。
二、鲁米诺辣根过氧化物酶cl发光强度的特性1. 鲁米诺辣根过氧化物酶cl发光机理鲁米诺辣根过氧化物酶cl是一种能够产生生物发光的酶，其发光机理主要与酶催化底物鲁米诺的氧化反应有关。
鲁米诺在酶的作用下发生氧化反应，产生明亮的蓝光，从而实现发光现象。
这种特殊的发光机理使得鲁米诺辣根过氧化物酶cl成为生物检测和生物成像领域的重要工具。
2. 鲁米诺辣根过氧化物酶cl发光动力学鲁米诺辣根过氧化物酶cl发光强度的大小与其发光动力学密切相关。
发光强度的大小受多种因素的影响，包括底物浓度、反应温度、酶浓度等。
深入理解这些动力学因素对于控制和优化鲁米诺辣根过氧化物酶cl的发光强度具有重要意义。
三、鲁米诺辣根过氧化物酶cl发光强度的应用1. 生物成像技术中的应用鲁米诺辣根过氧化物酶cl发光强度在生物成像技术中被广泛应用。
通过将鲁米诺辣根过氧化物酶cl基因转染到目标细胞或组织中，研究者可以通过监测其发光强度来实现对细胞活动、病变进程等的实时跟踪和定量分析。
2. 生物传感器的开发鲁米诺辣根过氧化物酶cl发光强度的特性使得其在生物传感器的开发中具有重要意义。
利用鲁米诺辣根过氧化物酶cl作为信号传感器，研究者可以构建高灵敏度、高选择性的生物传感器，用于检测生物分子、细胞活性等指标。
四、鲁米诺辣根过氧化物酶cl发光强度的前景展望鲁米诺辣根过氧化物酶cl发光强度作为一种重要的生物标识和检测工具，在生物医学研究领域具有广阔的应用前景。
随着基因工程技术和生物成像技术的不断发展，相信鲁米诺辣根过氧化物酶cl发光强度将会在生命科学研究、临床诊断、新药开发等领域发挥更加重要的作用。
化学发光-吖啶酯，鲁米诺化学发光 (ChemiLuminescence ，简称为 CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类，它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。
化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光 ( 光辐射 ) 所吸收的能量来源不同。
体系产生化学发光，必须具有一个产生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量的单独反应步骤的化学反应。
一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以下条件：第一是：该反应必须提供足够的激发能（对于蓝光发射需300kj.mol-1,红光需150kj.mol-1），导致电子从基态跃迁至激发态。
第二是：化学反应的能量至少能被一种物质所说接受并使之生成激发态。
第三是：处于激发态的分子或原子必须具有一定的化学发光量子效率时期能释放出光子，或能转移它的能量给另一个分子使之处于激发态并使发出光子化学发光反应的发光效率是指发光剂在反应中的发光分于数与参加反应的分子数之比。
对于一般化学发光反应，值约为 10 － 6 ，较典型的发光剂，如鲁米诺，发光效率可达 0 . 01 ，发光效率大于 0 。
01的发光反应极少见。
现将几种发光效率较高的常用的发光剂及其发光机理归纳如下。
1. 鲁米诺及其衍生物鲁米诺（3—氨基—邻苯甲酰肼,1）,异鲁米诺（2）及其衍生物（如氨基丁基乙基邻苯甲酰肼，ABENH,3）在发光分析中被使用。
鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化学发光反应，辐射出最大发射波长为 425nm 的化学发光。
在通常情况下鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢，但当有某些催化剂存在时反应非常迅速。
最常用催化剂是金属离子，在很大浓度范围内，金属离子浓度与发光强度成正比，从而可进行某些金属离子的化学发光分析，利用这一反应可以分析那些含有金属离子的有机化合物，达到很高的灵敏度。
重庆大学硕士学位论文离子液体介导鲁米诺化学发光影响的初步研究姓名：***申请学位级别：硕士专业：药物化学指导教师：***20120525摘要离子液体是一类新兴的、具有许多独特物理化学性质的环境友好型溶剂，已在分析化学的各个领域得到广泛的应用，是目前研究的热点领域之一。
近年，有研究表明离子液体可以应用于化学发光分析中，具有增强化学发光强度的作用。
然而离子液体在化学发光分析中的研究很少，其影响化学发光的机理也未做出探讨。
鲁米诺化学发光体系是化学发光分析中应用最广泛的发光体系之一，过渡金属离子、过氧化酶以及一些有机、无机化合物对其具有增敏或者淬灭作用，并且可以据此来测定分析样品。
本文把离子液体添加到鲁米诺化学发光反应中，筛选出离子液体对化学发光反应行为有影响的反应，并简单探讨离子液体影响化学发光行为的反应机理。
具体研究内容如下：①通过流动注射化学发光法研究了１一丁基一３．甲基咪唑六氟磷酸盐（［Ｂｍｉｍ］ＰＦ６）介导鲁米诺一过氧化氢化学发光的影响，对比在有、无［Ｂｍｉｍ］ＰＦ６情况下，化学发光发强度的变化，结果表明［Ｂｍｉｍ］ＰＦ６对此化学发光体系具有淬灭作用。
实验研究了其化学发光动力学曲线，对比了有、无［Ｂｍｉｍ］ＰＦ６时化学发光动力曲线的变化；另外，对化学发光条件进行了优化，并分析了三种不同阴离子的离子液体［Ｂｍｉｍ］ＰＦ６、【Ｂｍｉｍ］ＢＦ４（１．丁基．３．甲基咪唑四氟硼酸盐）、【Ｂｍｉｍ］Ｃｌ（１．丁基．３．甲基咪唑氯盐）对化学发光淬灭作用的不同影响；实验还把Ｂ．ＣＤ溶液通入管路中，考察了Ｂ．ＣＤ对［Ｂｍｉｍ］ＰＦ６淬灭化学发光的影响，并结合紫外、荧光光谱法对［Ｂｍｉｍ］ＰＦ６淬灭化学发光机理进行了研究。
②流动注射化学发光法研究［Ｂｍｉｍ］ＰＦ６介导鲁米诺．高锰酸钾化学发光行为的影响，发现［Ｂｍｉｍ］ＰＦ６对鲁米诺．高锰酸钾化学发光体系具有增敏作用。
并比较了加入［Ｂｍｉｍ］ＰＦ６前后，鲁米诺．高锰酸钾化学发光动力学曲线的不同；对化学发光条件进行了优化，并分析了三种不同阴离子的离子液体［Ｂｍｉｍ］ＰＦ６、【Ｂｍｉｍ］ＢＦ４、［Ｂｍｉｍ］Ｃｌ对化学发光增敏作用的影响；利用紫外、荧光光谱法对［Ｂｍｉｍ］ＰＦ６增敏化学发光机理进行了研究。
鲁米诺—高碘酸钾化学发光法测定盐酸二甲双胍陈文娟;陈建福;陈健旋【摘要】在碱性条件下盐酸二甲双胍对鲁米诺一高碘酸钾化学发光体系有强烈的增敏作用，结合流动注射技术，建立了流动注射化学发光测定盐酸二甲双胍的新方法．在优化的实验条件下，测定盐酸二甲双胍的线性范围为1．0×10-9～7．0×10-5mol／L，检出限为3．4×10-9moL／L，对于浓度为1．0×10-7mol ／L的盐酸二甲双胍连续测定11次，测定值的相对标准偏差为0．8％，以片剂为基体，用标准加入法检验方法的回收率，测得结果在99．6％-101．0％之间．该方法用于盐酸二甲双胍片剂中盐酸二甲双胍的定量分析，结果满意．%A highly sensitive chemiluminesence（CL） method for the determination of metformin hydrochloride by flow injection analysis was developed, based on that the CL intensity of Luminol - KIO4 systems was en- hanced by metformin hydrochloride. The relationship between the CL intensity and the concentration of met- formin hydrochloride was in a linear range from 1.0 ×10-9 to 7.0×10-5 mol/L. The detection limit of met- formin hydrochloride was 3.4 ×10-9 mol/L, Precision of the method was tested at the content rati on level of 1. 0 ×10-7 mol/L of metformin hydrochloride for 11 determinations, and value of RSD was 0.8%. Test for re- covery was made by standard addition method using tablets samples as matrixes, results of recovery were in the range of 99.6% - 101.0%. The proposed method was applied satisfactorily to the determination of metformin hydrochloride in tablets.【期刊名称】《济宁学院学报》【年(卷),期】2012(000)003【总页数】4页(P39-42)【关键词】化学发光;盐酸二甲双胍;流动注射;高碘酸钾;鲁米诺【作者】陈文娟;陈建福;陈健旋【作者单位】漳州城市职业学院生物与环境工程系,福建漳州363000;漳州职业技术学院食品与生物工程系,福建漳州363000;漳州职业技术学院食品与生物工程系,福建漳州363000【正文语种】中文【中图分类】O657.3盐酸二甲双胍(Metformin hydrochloride)化学名称为1，1－二甲基双胍盐酸盐，是一种双胍类口服降糖药，适用于非胰岛素依赖型糖尿病的治疗，可使糖尿病患者血糖及糖化血红蛋白降低，增加机体对胰岛素的敏感性，减轻胰岛素抵抗及饭后高胰岛素血症，临床应用范围较广［1－2］.因此，简单、快速测定盐酸二甲双胍含量分析方法的建立对糖尿病治疗研究等方面有重要意义.目前测定盐酸二甲双胍的方法主要有光度法［1］、HPLC法［3］、电化学法［4］、荧光光谱法［5］、毛细管电泳法［6］，已有文献［7－10］报道化学发光法测定盐酸二甲双胍的方法，这些方法分别是基于利用盐酸二甲双胍对Cu(Ⅱ)－H2O2－罗丹明 B体系［7］、Cu(Ⅱ)－ Luminol－H2O2体系［8］、Cu(Ⅱ)－ Luminol体系［9］、N －溴代丁亚酰二胺－荧光素体系［10］等增敏作用或抑制作用.在实验中，我们发现在碱性介质中，盐酸二甲双胍对Luminol－KIO4发光体系也存在增敏作用，据此结合流动技术建立了流动注射技术测定盐酸二甲双胍的化学发光分析法［11］.该方法用于盐酸二甲双胍的测定，具有灵敏度高、装置简单、线性范围宽、分析速度快等优点，可用于相应片剂的分析.盐酸二甲双胍(上海瑞齐生物科技有限公司)标准储备液:准确称取1.6562g的盐酸二甲双胍，用蒸馏水溶解后定容于100 ml的棕色容量瓶中，得0.1 mol/L标准溶液，使用时用蒸馏水逐级稀释至所需浓度.鲁米诺(Luminol)(美国Sigma公司)标准储备液:准确称取1.7716g 的 Luminol，用0.01mol/L的NaOH溶液溶解，并用0.01 mol/L的NaOH溶液定容于100mL棕色容量瓶，配制成0.1 mol/L标准溶液，避光保存.使用时用 0.01mol/L 的NaOH溶液稀释至不同浓度.高碘酸钾(KIO4)(汕头西陇化工有限公司)溶液按常规配制，使用时用蒸馏水逐级稀释至所需浓度，实验中所用药品均为分析纯，蒸馏水为二次蒸馏水.分析系统按图1流路.IFFM－D流动注射化学发光分析仪，IFFS－A型多功能化学发光检测器(西安瑞迈电子科技有限公司).整个分析过程中采样、注样、实验数据采集及处理，均由WindowsXP系统下Remax软件完成的.如图1所示.将各输液管插入相应的溶液，经聚四氟乙烯管进入流通池进行发光反应.各流路的泵速均为5mL/min，采样时间为15s，开启IFFM－D型流动注射化学发光仪.以蒸馏水为空白进行测定，以峰高进行定量，记录化学发光强度信号.在室温下考察了Luminol－KIO4－盐酸二甲双胍体系化学发光反应的动力学性质.结果如图2所示，从图2中可以看出，进样0.2后开始发光，发光强度到达峰值时所需时间为2s，发光强度由峰值衰减至零时只需4s.由此可见此反应为快速化学发光反应.从而为盐酸二甲双胍的快速分析提供了依据.反应体系的pH值对发光强度有较大的影响，若碱性太强，背景急剧升高，信噪比反而下降.考察了pH值对Luminol－KIO4－盐酸二甲双胍发光体系的影响.其结果如图3，从图3中可以看出，在pH值为11的介质体系中，发光信号最强.故选择反应体系的pH=11为最佳.Luminol是化学发光试剂，其浓度的大小是影响盐酸二甲双胍测定的重要因素，考察了Luminol浓度对相对发光强度的影响.其结果如图4，从图4中可以看出，Luminol溶液浓度在2.0×10－4 mol/L时发光信号最大，故选择Luminol的浓度为2.0 ×10－4mol/L.KIO4是化学反应中是氧化剂，氧化Luminol产生发光，在反应过程中不仅影响测定的灵敏度，而且还影响测定的线性范围.考察了KIO4浓度对相对发光强度的影响.其结果如图5，从图5中可以看出，随KIO4浓度的增大，发光强度也增大，但当KIO4浓度为2×10－3mol/L时，盐酸二甲双胍对化学发光强度增敏最大，有较强的发光强度和较高的信噪比，在此浓度之外，增敏的化学发光强度均减小，故选择KIO4浓度为2×10－3mol/L.在选定的最佳实验条件下，盐酸二甲双胍溶液浓度在1.0×10－9mol/L ～7.0×10－5mol/L 范围内与发光强度呈良好的线性关系.为了提高测定的精密度和准确度，校准曲线按盐酸二甲双胍溶液浓度的数量级分段绘制.校准曲线的基本参数列于表1.对浓度为1.0×10－7mol/L的盐酸二甲双胍溶液进行平行测定11次，得相对标准偏差为0.8%.检出限为3.4 ×10－9mol/L.实验测试了盐酸二甲双胍溶液中可能存在的无机离子及有机物对本实验方法的干扰，以1×10－7mol/L的盐酸二甲双胍标准溶液做干扰实验，考察了10种常见离子和降糖药苯乙双胍的干扰情况，实验发现，当相对误差小于±5%时，200倍的淀粉、Na+、K+、NO3－、F－、CN－，50 倍的，环糊精、Ca2+、Mg2+、Br－、SCN－，10 倍的葡萄糖、蔗糖、柠檬酸均不干扰测定，Cu2+，盐酸苯乙双胍对本实验干扰严重.在盐酸二甲双胍片剂中，辅料主要为淀粉，溶解过滤后，对定量分析基本无影响.取盐酸二甲双胍片剂10片(广东华南药业集团有限公司)，准确称量求得每片的平均质量，研磨，取相当于一片的重量的药品溶解于水，定容，稀释到药片测试范围内.按实验方法测定样品含量，并做回收实验其结果见表2.盐酸二甲双胍分子中含有多个还原性强的基团，如胺基(－NH2)、亚胺基(=NH)等，在碱性条件下，能被KIO4氧化，产生电子跃迁，生成能量较高的中间产物自由基，生成的自由基在碱性介质中氧化 Luminol产生化学发光.反应机理如下［12］:盐酸二甲双胍+KIO4+OH－=中间产物自由基*中间产物自由基*+Luminol=化学发光在碱性条件下，盐酸二甲双胍对Luminol－KIO4化学反应发光体系具有增敏作用，对影响化学发光的各种因素进行了研究，建立了流动注射化学发光测定盐酸二甲双胍的新方法，该方法灵敏度高、装置简单、线性范围宽、分析速度快等优点，可用于相应片剂中的分析.【相关文献】［1］秦超，尹莉芳，王广基，等.盐酸二甲双胍缓释微丸的制备及体外释放度考察［J］.中国新药杂志，2011，20(21):2069－2072.［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)［S］.2010年版.北京:中国医药科技出版社，2010:625－626.［3］李艺，王红，张良珂，等.HPLC法测定盐酸二甲双胍缓释片中盐酸二甲双胍的含量［J］.中国药房，2011，22(24):2296－2297.［4］Tian X J，Song J F.Catalytic action of copper(Ⅱ)ion on electro-chemical oxidation of metformine and voltammet ric determination of metformine in pharmaceuticals［J］.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2007，44(5):1192 －1196.［5］Wang Z P，Zhang ZJ，Fu Z F，et al.Sensitive flow injection chemiluminescence determination of metformin based on N－bromosuccinimide fluoresce in system［J］.Analytical Letters，2003，36(12):2683－2697.［6］Yardimci C，Ozaltin N.Method development and validation for the simultaneous determination of rosiglitazone and metformin in pharmaceutical preparations by capillaryzone electrophoresis［J］.Analytica Chimica Acta，2005，549(122):88 －95.［7］He C，Zhang Z J，He D Y，et al.Chemiluminescence determination of metformin based on hydroxyl radical reaction and molecularly imprinted polymer on lineenrichment ［J］.Analytical and Bioanalytical Chemistry，2006，385(1):128 －133.［8］Marques K L，Santos J L M，Lima J L F C.A catalytic Multipumping flow system for the chemiluminometric determination of metformin［J］.Analytical and Bioanalytical Chemistry，2005，382(2):452－457.［9］李红，杜建修.鲁米诺－Cu(Ⅱ)－盐酸二甲双胍化学发光体系的研究［J］.陕西师范大学学报(自然科学版)，2010，38(1):54－56.［10］方卢秋.NBSM－荧光素体系流动注射化学发光法测定盐酸二甲双胍［J］.理化检验－化学分册，2003，39(9):512－514.［11］李世君，杨冉，屈凌波，等.鲁米诺－高碘酸钾化学发光法测定盐酸阿朴吗啡［J］.药物分析杂志，2011，31(7):1376－1378.［12］Lu C，Song G，Lin J M.Reactive oxygen species and their chemiluminescence detection methods［J］.Trends in Analytical Chemistry，2006，25(2):985 －995.。
鲁米诺氧途径免疫测定方法的研究进展空军军医大学第一附属（西京）医院；1中医科暨全军中医内科中心；2核医学科西安710032近半个世纪以来，临床化学微量免疫分析技术从放射免疫分析，酶联免疫分析，到化学发光免疫分析，经历了检测方法的革新与技术的进步，为医学检验技术带来了数量和质量的迅速提高。
化学发光免疫分析法具有选择性好、灵敏度高、分析速度快、设备简单等特点，在环境、临床、食品、药物检测等领域得到了广泛应用。
20世纪90年代问世的鲁米诺氧途径免疫分析（Luminescent oxygen channeling immunoassay，LOCI）技术以其独特的检测方法，实现了均相，一步，免清洗和高通量检测，并以其高灵敏度和特异性等突出检测性能成为了化学发光免疫分析方法的研究热点。
本文就化学发光免疫分析的概述及其基本原理，化学发光免疫分析的建立流程，几种主要的化学发光免疫分析类型原理等方面进行综述。
1 化学发光免疫分析法的概述1.1 化学发光在分析化学中，发光是指当一个分子的电子从激发态跃迁到基态时所发出的光。
它包括荧光（Fluorescence）、磷光（Phosphorescence）和化学发光（Chemiluminescence）。
当基态分子吸收化学反应中释放的能量跃迁到激发态，处于激发态的分子以光辐射的形式返回基态时产生的光的现象称为化学发光（Chemiluminescence，CL）。
基于化学发光强度和被测物含量之间关系建立的分析方法叫化学发光分析法，它具有灵敏度高，线性范围宽，仪器简单，操作简便等特点，已广泛地应用于环境、临床、食品和工业分析中。
1.2 化学发光免疫分析法化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光强度来确定物质含量的一种分析方法。
化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）诞生于1977年，Halman M 等[1]根据放射免疫分析的基本原理，将化学发光系统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入化学发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或定性检测。
影响鲁米诺体系电致化学发光因素的研究鲁米诺体系是一类常用的电致化学发光（ECL）体系，其特点是由光致电子转移（PET）和共振能量转移（RET）机制引起的发光。
鲁米诺体系的发光强度和稳定性受到多种因素的影响，包括电极、电解液、鲁米诺配体、共振能量转移剂（CET）等等。
电极材料是影响鲁米诺体系发光效果的重要因素之一。
金属电极能够提供电子，从而引起化学反应并产生发光，而且金属电极的表面影响反应速率和发光效果。
晶体电极能够提供稳定的电场环境和高度制备表面，从而提高鲁米诺体系的发光效果。
在选择电极材料时，还需要考虑电极对电解液的通透性和电解液与电极表面的亲和性。
电解液的质量也是影响鲁米诺体系发光效果的重要因素。
电解液中的氧气、水等物质可以对鲁米诺体系的稳定性产生影响。
此外，添加一些离子或化合物可以加速或抑制反应速率，从而影响鲁米诺体系的发光。
电解液的pH值也会影响鲁米诺体系发光效果，一般情况下，pH值越高，发光强度越弱。
鲁米诺配体的结构和电子性质也是影响鲁米诺体系发光的关键因素。
目前常见的鲁米诺配体为8-羟基喹啉-3-羧酸（HL），它具有极好的光稳定性和荧光性质。
通过改变鲁米诺配体的结构，可以调节其发射光谱和激发波长，从而调节体系的发光效果。
共振能量转移剂（CET）也影响鲁米诺体系的发光效果。
CET是用来提高鲁米诺体系发光效率的一种化合物，它们能够吸收电荷并将其转移给鲁米诺配体，从而提高其发光效率。
目前常见的CET有二甲基苯乙烯（DPA）等。
总之，鲁米诺体系电致化学发光效率和稳定性受到多种因素的影响。
研究这些因素对体系发光效果的影响有助于优化电致化学发光技术并开发新的发光体系。
鲁米诺电化学发光用于生物分子分析的研究进展屠一锋苏州大学化学化工学院分析化学研究所，215123本课题组开展电化学发光分析研究工作的主要目标是应用于生物分子分析：一、对鲁米诺电化学发光行为及机理的理解：文献报道鲁米诺的电化学发光原理类似于其化学发光原理，是基于鲁米诺的两步氧化反应，在第二步氧化开环时生成激发态而产生光辐射，是不可逆过程，我们的研究表明，鲁米诺的电化学发光可能更主要是涉及自由基的过程，其氧化还原过程中形成自由基并在相应的条件下可在未氧化开环的条件下辐射光信号，从而不需要氧化至第二步开环反应，因此鲁米诺分子可以提供可逆的电化学发光反应，从而为研制电化学发光传感器和检测器提供了重要的基础。
多种纳米粒子可以促进鲁米诺在低电位下的可逆电化学发光反应。
二、中性介质中鲁米诺的电化学发光行为：绝大部分文献报道均强调鲁米诺的电化学发光必须在强碱性介质中实施，而我们的研究主要瞄准中性介质中鲁米诺的电化学发光，经过长期研究，我们发现完全可以在中性介质中实施其电化学发光分析，这对开展生物分子的分析是十分有利的。
研究中采用的主要技术措施是多种增敏技术来提高中性介质中鲁米诺电化学发光的效率，如使用增敏剂和电极表面修饰等。
实现中性介质中的电化学发光对生物分子的研究具有重要价值。
三、生物分子分析研究：已探讨了对多种类型生物分子进行分析测定的性能，其主要机理是基于自由基之间的能量转移及自由基湮灭作用等，表现在信号响应上为电化学发光的增强或猝灭，研究对象包括生物小分子如谷胱甘肽、黄酮、维生素、尿酸等，灵敏度高，检测下限可达皮摩尔以下，生物大分子如酶、DNA等，已研究了葡萄糖氧化酶、尿酸氧化酶、谷丙转氨酶等及其催化体系均有响应，对DNA的响应亦已实现，并可用于研究DNA与小分子之间的作用。
四、电化学发光检测与流动分析及分离技术的联用：生物样品大多组成复杂，电化学发光检测池的研制可实现电化学发光检测与分离技术的联用，我们目前已经构建了结构合理、性能优良的电化学发光检测池，与流动分析成功联用，目前正开展毛细管电泳、芯片电泳与电化学发光检测联用的研究。
1 鲁米诺化学发光分析在药物分析中的研究 化学教育 2000级3班 梁 斐 指导老师：张成孝 教授
摘要:化学发光分析法是根据化学反应产生的光辐射的强度来确定物质含量的分析方法。该分析方法具有灵敏度高、线性范围宽、仪器简单、分析速度快、容易实现自动化等优点，受到人们的广泛关注。本论文利用鲁米诺体系流动注射化学发光法，建立了双嘧达莫和异烟肼的化学发光分析法。 我们在实验中发现，将含氮杂环的嘧啶类合成药物双嘧达莫溶液注入鲁米诺与铁氰化钾化学发光反应结束后的混合溶液中可产生强的化学发光信号。根据此实验现象并结合流动注射分析技术，建立了测定双嘧达莫的化学发光分析法。在优化的实验条件下，化学发光分析信号与双嘧达莫的浓度在1×10-10 ~ 4×10-7g/mL
之间呈良好的线性关系。根据IUPAC规定，计算得该方法的检出限为6×10-11g/mL。
对1×10-8g/mL的双嘧达莫进行7次平行测量，相对标准偏差为1.1%。该方法用于
双嘧达莫片剂中双嘧达莫含量的测定，并与药典中标准方法进行对照，没有显著性差异。 实验发现将异烟肼溶液注入鲁米诺与高锰酸钾化学发光反应结束后的混合溶液中可产生强的化学发光信号。根据此实验现象并结合流动注射分析技术，建立了测定异烟肼的化学发光分析法。在优化的实验条件下，化学发光分析信号与异烟肼的浓度在5×10-8 ~ 1×10-4g/mL之间呈良好的线性关系。根据IUPAC规定，计
算得该方法的检出限为1×10-8g/mL 。对1×10-6g/mL的异烟肼进行7次平行测量，
相对标准偏差为1.1%。该方法用于异烟肼片剂中异烟肼含量的测定，结果令人满意。
关键词：流动注射分析 化学发光反应 鲁米诺 双嘧达莫 异烟肼 2
The analytical application of luminol chemiluminescence in Pharmaceutical assay
Liang Fei ZhangChengxiao professor Abstract：Chemiluminescence (CL) analysis promises high sensitivity with simple instrumentation (no monochromator required) and rapidly in signal detection (normally 0.1-10s). When coupled with flow injection analysis (FIA), CL-based FIA methods provide cheap, rapid, simple and reproducible means of detection and therefore, it has been extensively used in many fields, such as biological, clinical, environmental. When dipyridamole(DIP) was injected into the reaction mixture after the finish of the reaction between luminol and K3Fe(CN)6, a new CL reaction was initiated to produce strong CL emission. Based on this phenomenon, a novel CL system for DIP combined with flow injection analysis was presented in this paper. The CL intensity responded linearly to the concentration of DIP in the range of 1×10-10 ~ 4×10-7 g/mL with a detection limit of 6×10-11g/mL. The relative standard deviation was 1.1% for 1×10-8 g/mL DIP solution( n=7). The method has been applied to determine DIP in tablets and the results are in agreement with traditional method using UV spectrometry. It was found that a strong CL signal was produced when isoniazid was injected into the reaction mixture after the finish of the reaction between luminol and KMnO4. Based on this finding, a simple flow injection CL method was established for determination of isoniazid. Under the optimized condition, the CL signals responded linearly to the concentration of isoniazid from 5×10-8 g/mL to 1×10-4g/mL with the detection limit of 1×10-8 g/mL isoniazid. The relative standard deviation was 1.1% for 1×10-6 g/mL isoniazid (n=7). This method developed has been applied to determine isoniazid in tablets with satisfactory results. Keywords: Flow-injection analysis; Chemiluminescence reaction; Luminol; Dipyridamole； Isoniazid 3
一 引言 化学发光是在化学反应的中间体或反应产物吸收了化学反应释放出的化学能由基态跃迁至电子激发态，并由电子激发态返回基态时所产生的光辐射。根据化学反应产生的光辐射的强度来确定物质含量的分析方法称为化学发光分析法。化学发光分析法具有灵敏度高、线性范围宽、仪器简单、分析快速、容易实现自动化等优点。 发光现象最早发现在生物体（如萤火虫）内，现在称之为生物发光（Bioluminescence）。1877年，Radziszewski[1]观察到洛粉碱在碱性乙醇介质中通入氧时可产生绿色的光。1888年Weidemann首次提出了化学发光(Chemiluminescence)这个专业术语。化学发光现象广泛存在于自然界中，但是由于大多数反应的化学发光效率太低，以及由于早期检测器灵敏度的限制，使得化学发光反应在分析化学中的应用受到限制，直到二十世纪六、七十年代，化学发光分析法才得到了快速发展，尤其在二十世纪的最后十年里发展非常迅速。化学发光分析法在无机物、有机物和生物物质的痕量和超痕量分析领域得到了广泛应用，为生命科学、环境科学、材料科学的研究提供了许多高灵敏度有效的分析方法，推动了这方面科学理论和高新技术的发展；同时，其他相关学科的研究成果也为化学发光分析和生物发光分析的建立提供了许多新的技术和手段，出现了许多新的化学发光分析方法，如纳米发光、发光成像、发光活体分析法。 由于流动注射分析技术的发展，流动注射化学发光仪被广泛使用，配备微机系统，自动进样，储存记录，打印结果，使得化学发光分析的速度更快。随着药物分析的不断发展，它不但要求分析结果准确可靠，且要求分析方法简单快速，尤其是对痕量和微量药物分析，流动注射化学发光分析法更是显现出了其它分析方法不可替代的重要地位。近年来有多篇文章对化学发光分析进行了较全面的评述[1-5]。 鲁米诺（3-氨基邻苯二甲酰肼）是使用最早、应用最广泛且量子产率较高的化学发光试剂之一。自从1928年，Albrecht首次报道了鲁米诺与氧化剂在碱性溶液中的化学发光行为以来，该化学发光反应主要被用来测定氧化剂与无机金属离子。最近几年来人们在进一步研究该化学发光反应的同时，将其与许多分析技术相结合，使得其应用范围不断扩大，已被广泛应用于包括药物分析，生化分析在内的各个分析领域。
近年来，人们发现许多药物如肾上腺素[6]、异丙肾上腺素[6，7]、异烟肼[8, 9]、单宁[10]、氨比西林[11]、羟氨苄青霉素[11]、核黄素[12]、五氟利多[13]、维生素B6[14]、抗坏血酸[15]、硫酸链霉素酸[16]、氯丙嗪[17, 18]、盐酸异丙嗪[18]、甲硝 4
唑[19]、酚磺乙胺[20 ]等，对鲁米诺-无机氧化剂（高碘酸钾、铁氰化钾、高锰酸钾等）化学发光体系具有增敏作用，并且根据增敏现象建立了这些药物的化学发光分析法。 双嘧达莫（DIP）为一含氮杂环的嘧啶类合成药物，是较强的冠状动脉血管扩张剂，临床上主要用于治疗和预防心绞痛、心肌梗死。目前测定双嘧达莫的方法有高效液相色谱法[21，22]，电化学法[23]，荧光法[24，25]，磷光分析法[26，27]，分光光度法[28]，化学发光法[29-32]等，其中化学发光法具有灵敏度高、线性范围宽和仪器简单等优点，将其与流动注射相结合，更兼有分析速度快，精度高、易实现自动化等特点。我们在实验中发现，将DIP注入鲁米诺与铁氰化钾反应结束后的混合溶液中又可引发新的化学发光反应，产生强的化学发光信号，而且luminol-K3Fe(CN)6-DIP体系的化学发光强度与DIP的浓度成线性关系，从而建立了测定DIP的新方法，该方法具有灵敏度高，线性范围宽等优点。 异烟肼(Isoniazid)，别名雷米封，是目前广泛使用的有效抗结核病药物之一[33]，对结核杆菌有较强的抑制和杀灭作用，临床上主要用于各种类型的结核病，如肺结核、结核性脑膜炎等的治疗。目前文献报道的异烟肼测定方法主要有分光光度法[34-36]、电化学法[37]、荧光法[38] 和化学发光分析法[39-44]。其中化学发光法具有灵敏度高、线性范围宽和仪器简单等优点，将其与流动注射相结合，更兼有分析速度快，精度高、易实现自动化等特点。实验发现，在碱性条件下，高锰酸钾能直接氧化异烟肼产生弱的化学发光，将异烟肼注入鲁米诺与高锰酸钾反应结束后的混合溶液中又可引发新的化学发光反应，产生强的发光信号，而且luminol-KMnO4-isoniazid体系的化学发光强度与异烟肼的浓度成线性关系，从而建立了测定异烟肼的新方法，该方法具有灵敏度高，线性范围宽等优点。
