《细胞培养技术》PPT课件

出来的物质
3、克隆过程运用的技术手段？ 动物体细胞核移植、动物细胞培养和胚胎移植 4、多利的大部分性状与谁一样？
白面绵羊
高度分化的体细胞核具有全能性 5、结论？
克隆动物的研究意义
1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 2.改良动物品种 3.作为异种移植的供体 4.保护濒危动物
体细胞核移植技术存在的问题
原理：细胞增殖
动物细胞培养的过程（见课本）
动物胚胎或幼龄动物的组 织、器官（取材）
剪碎
（分解细胞间的蛋白） 动物组织细胞间隙中含 单个细胞 有一定量蛋白质 加培养液 细胞悬液 原代培养
遗传物质 未改变
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
10代细胞 细胞株
50代细胞
遗传物质 已改变
传代培养
细胞系 无限传代
细胞株和细胞系的区别：
1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过 大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。
2.成功率非常低 3、克隆动物食品的安全性问题。
教学反馈
1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细 胞（ ） A．细胞系 B．细胞株 C．原代细胞 D．传代细 胞 2、动物细胞工程技术的基础是 （ ）
A
A.动物细胞融合 C.胚胎移植
4、动物细胞培养能否像绿色植物组织 培养那样最终培养成新个体？
不能，动物细胞培养只能使细胞 数目增多，而不能发育成个体
5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？
能
6、动物细胞培养过程中特别要注意什么？
注意时间的控制
7、能够用胃蛋白酶代替胰 蛋白酶吗？为什么？
不能，因为两者的最适PH不同， 而正常组织细胞的生存环境与胰蛋 白酶的最适PH较接近
A
B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进 行；

触抑制
代
转入培养瓶
培
细胞株：一般说
遗传物质未改变
传代10代以内，遗传物质不改变，保 分瓶传代培养 养
持正常二倍体核型。
传代10-50代左右，增长缓慢以至于 10代细胞
完全停止，部分细胞核型可能发生
传 代
变化（遗传物质可能改变）
40-50代细胞 培
继续传代培养少部分细胞获得不死性，
养
细胞突变，遗传物质已经改变，等同
-------------（ ） A
4、可以作为异种移植的供体，可以用于组织器官的移植
保证细胞顺利的生长增殖
保证细胞顺利的生长增殖
A．细胞系 体外培养的细胞需要什么样的环境条件？
检测有毒物质，判断某种物质的毒性
B．细胞株
C．原代细胞 D．传代细胞 ２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？
为___________. (4)为了把B瓶原代中培的养 细胞分装到C瓶中，用_____ 处理，然后配置成___________，再分装。 胰蛋白酶 (5)在C瓶中正常培养了一细段胞悬时浮间液后，发现细胞全部死亡。
1.体积大，易操 次分裂中期 作。2.含有促使 细胞（MⅡ
细胞核表达全能 中期）为什 性的物质和营养 么？
条件。
◆促融方法：
电刺激
妊娠、分娩
◆胚胎移植至代 孕受体内
有人说它三个母亲， 对吗？
细胞核核移植
卵母细胞采集、培养
MⅡ期卵母细胞 去核
去核卵母细胞
体细胞核移植过程 （体细胞克隆动物）
供体细胞注入 去核卵母细胞
生长和繁殖。
2、原理：细胞增殖
3、过程
增殖能力强，分裂旺盛，分化程 度低，容易培养

过程
脱分化、再分化
原代培养、传代培养
项目
植物组织培养
动物细胞培养
结果 获得新个体或细胞产物
大量产生细胞或细胞 产物
用途
①快速繁殖名贵花卉和果 树；②培养无病毒植株、 转基因植物；③大规模生 产细胞产物，如药物、食 品添加剂、香料、色素等
①生产蛋白质制品， 如病毒疫苗、干扰素、 单克隆抗体等；②检 测有毒物质；
(3)温度和
温度：哺乳动物多以 pHpH： 7.2～7.4
36.5±0.5℃
为宜
(4)气体环境COO2 ：2：细维胞持代培谢养所液必的需p的H
4．应用[连线]
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1．动物核移植的概念和类型 (1)概念： ①供体：动物一个细胞的细胞核； ②受体：去掉细胞核的 卵母细胞 ； ③结果：形成重组胚胎，发育成 动物个体 。 (2)类型：哺乳动物核移植可分为胚胎细胞核移植和体细 胞核移植。
2.如图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答： (1)容器 A 中放置的是动物器官或组织，它一般 取自________________。 (2)容器 A 中的动物器官或组织首先要进行的处 理是________，然后用__________酶处理，这 是为了使细胞分散开来，这样做的目的是 _________________________________________________。
胞质内的遗传物质来自受体卵母细胞，其次生物的性状还
受环境的影响，因此，克隆动物并不是对提供体细胞的动
物进行完全复制。
4.右图为哺乳动物(羊)的生殖过程，下列叙述
不．正确的是
(D )
A．个体 2 为克隆动物，c 为高度分化的
体细胞
B．个体 2 的遗传性状与提供 c 细胞的羊

生物安全柜
? 生物安全柜一般是做致病菌，霉菌，酵母菌，病毒来用，操作区域 是负压，简单说是往上处抽风的，当然致病菌也不是直接抽出排到 室外，是过滤在生物安全柜的顶部漏器上，从排风量上可以分为， 50%外排型，75% 以及100%外排型。在生物安全柜内所形成的几乎 没有微生物的环境中，尽量避免使用明火，酒精灯的火焰可能会影 响室内的气流平衡。
消毒
? 新洁尔灭消毒液 ? 原理：新洁尔灭灭菌原理为破坏细胞膜、改变其渗透性而起杀菌作用
? 84消毒液 ? 84消毒液是一种以次氯酸钠为主的高效消毒剂，主要成分是次氯酸钠， 次氯酸钠的漂白性是其与水反应生成的次氯酸所带来的，因次氯酸具 有极强的氧化性，能够将大多数物质氧化，使其变性，因而能起到消 毒作用
消毒
? 75%酒精消毒原理
? 酒精之所以能消毒是因为酒精能够吸收细菌蛋白的水分，使其脱水变 性凝固，从而达到杀灭细菌的目的。如果使用高浓度酒精，对细菌蛋 白脱水过于迅速，使细菌表面蛋白质首先变性凝固，形成了一层坚固 的包膜，酒精反而不能很好地渗入细菌内部，以致影响其杀菌能力。 75%的酒精与细菌的渗透压相近，可以在细菌表面蛋白未变性前逐渐不 断地向菌体内部渗入，使细菌所有蛋白脱水、变性凝固，最终杀死细 菌，酒精浓度低于75%时，由于渗透性降低，也会影响杀菌能力。
超净工作台
? 超净台是做一般对人体没有直接伤害的 常规细菌的操作实验，正压送风，工作 台工作区域的气流形成为水平层流型。 区内空气经初效过滤器过滤后，由风机 压入静压箱，再经高效过滤器过滤，由 此送出的洁净气流，以一定的均匀断面 风速通过操作区将尘埃颗粒带走，从而 形成高洁净的工作环境。超净空气的流 速为２４～３０ｍ／ｍｉｎ，这已足够 防止附近空气可能袭扰而引起的污染， 这样的流速也不会妨碍采用酒精灯或本 生灯对器械等的灼烧消毒