Muta-direct™定点突变试剂盒
操作方法
[A] 诱导突变基因（PCR反应）以待突变的质粒为模板，用设计的引物及Muta-direct™酶进行PCR扩增反应，诱导目的基因突变。
1. 设计点突变引物。
[注]参考引物设计指导
2. 准备模板质粒DNA
[注]用dam+型菌株（例如DH5α菌株）作为宿主菌。在end+型菌株中常有克隆数低的现象，但是对突变效率没有影响。提取质粒DNA时我们建议您使用本公司的质粒提纯试剂盒。
3. [选项]对照反应体系（50μl反应体系）
10×Reaction Buffer 5μl
pUC18 control plasmid（10ng/μl, total 20ng） 2μl
Control primer mix（20pmol/μl） 2μl
dNTP mixture（each 2.5mM） 2μl
ddH2O 38μl
Muta-direct™ Enzyme 1μl
4. 样品反应体系（50μl反应体系）
10×Reaction Buffer 5μl
Sample plasmid（10ng/μl，total 20ng） 2μl
Sample primer (F)（10pmol/μl） 1μl
Sample primer (R)（10pmol/μl） 1μl
dNTP mixture（each 2.5mM） 2μl
ddH2O 38μl
Muta-direct™ Enzyme 1μl
5. PCR反应条件
[注]按如下参数设置PCR扩增条件。
Cycles Temperature Reaction Time
1cycle 95℃ 30sec
15cycle 95℃
55℃
QuikChange HT DNA Cleanup Kit, Part Number 5190-7456
*************(24小时)化学品安全技术说明书
GHS product identifier
应急咨询电话（带值班时间）第1部分 化学品及企业标识
:
:供应商/ 制造商:安捷伦科技贸易（上海）有限公司
中国（上海）外高桥自由贸易试验区
英伦路412号（邮编:200131)
电话号码： 800-820-3278
传真号码: 0086 (21) 5048 2818QuikChange HT DNA Cleanup Kit, Part Number 5190-7456
化学品的推荐用途和限制用途DNA-Binding Solution400771-14
PCR Wash Buffer (5X)400771-17部件号:
物质用途:分析试剂。
DNA-Binding Solution2.5 ml（毫升）
PCR Wash Buffer (5X)5 ml（毫升）部件号（化学品试剂盒）:5190-7456安全技术说明书根据 GB/ T 16483-2008 和 GB/ T 17519-2013
GHS化学品标识:QuikChange HT DNA 纯化试剂盒，部件号 5190-7456第2部分 危险性概述危险性类别
GHS标签要素DNA-Binding Solution由急性吸入毒性未知的成分组成的混合物百分
比： 1 - 10%物质或混合物的分类根据 GB13690-2009 和 GB30000-2013
DNA-Binding Solution
H302急性毒性 (口服) - 类别 4
H313急性毒性 (皮肤) - 类别 5
H332急性毒性 (吸入) - 类别 4
H314皮肤腐蚀/刺激 - 类别 1C
H318严重眼损伤/眼刺激 - 类别 1
H412
危害水生环境一长期危险 - 类别 3紧急情况概述
DNA-Binding Solution液体。
抗原表位鉴定方法的研究进展
孙娟;王愉涵;刘艳;郭进露;武丽涛;李冬民
【摘 要】抗原决定簇又称为抗原表位,是抗原分子中决定抗原特异性的化学基团,也是蛋白质抗原性的基础.抗原抗体的特异性结合反应是针对特定的抗原表位而并非是完整的抗原,因此明确蛋白质的抗原表位对多肽和新型疫苗分子的设计及诊断试剂的发展具有重要意义.随着科技的发展,出现了一些新的鉴定单克隆抗体抗原表位的方法.本文在传统表位鉴定方法基础上简要综述了多技术结合鉴定抗原表位新方法.
【期刊名称】《国外医学（医学地理分册）》
【年(卷),期】2017(038)003
【总页数】5页(P291-295)
【关键词】抗原表位;多技术;鉴定方法
【作 者】孙娟;王愉涵;刘艳;郭进露;武丽涛;李冬民
【作者单位】西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安
710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061;西安交通大学2013级临床医学五年制,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安 710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061;西安交通大学2013级临床医学五年制,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安 710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安
710061;西安交通大学2013级临床医学五年制,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安 710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061;西安交通大学2013级临床医学五年制,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安 710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安
咨询电话：4006663029
Fasta-II快速定点突变试剂盒
使用说明
一、产品概述
本试剂盒是Fasta快速定点突变试剂盒的升级版，采用同源重组的原理，用PCR手
段将目标质粒从待突变位点反向扩增，其产物经重组环化后直接转化即可完成定点突
变。与原Fasta试剂盒相比具有以下优势：
1.升级了原有的高保真酶，采用新型的2×Fasta-IIMix高保真扩增体系，扩增速
度比原有酶快了一倍（15s/kb）且降低了扩增过程中引入新突变的可能性。2.酶、buffer、dNTP均整合到2×Fasta-IIMix里，PCR体系只需要加引物和模板。
3.长片段扩增能力卓越，可以广泛适用于长度不超过20kb的任何质粒扩增。
4.省略了Dpn酶消化的步骤，节省1h时间。PCR扩增产物对模板的数量优势已
足够保证突变成功率。5.大多数情况下PCR产物无需纯化即可直接做下一步重组反应。
由于使用高效的同源重组反应替代了传统的退火成环或连接成环，因此使用本试剂
盒进行定点突变不但引物设计灵活，还可以同时突变距离较远的两个点。
二、产品组成（15次反应）2×Fasta-IIMix：375ul
5×Fasta-IIRecombinationBuffer：30ul
Fasta-IIRecombinationEnzyme:15ul
三、贮藏与保质期
本产品应置于-20℃储存，保质期一年。
四、单碱基或连续多碱基定点突变实验方案
图1实验流程概况
4.1引物设计
向质粒引入单碱基或连续多碱基定点突变，只需设计一对引物将质粒进行反向PCR扩
增即可。引物设计原则为：(1)正、反向扩增引物5’端包含15-21bp反向互补区域，GC含量40-60%为佳。(2)各引物非互补区域长度至少为15bp。
(3)待突变位点至引物3’端区域Tm值高于60℃为佳。
(4)需要引入突变的位点首选使其包含在互补区域内，即两条引物均引入点突变。
(5)若待突变点附近序列很难满足GC含量40-60%的要求，则也可以将待突变点包含在
